Serologiske markører av infeksjoner transkripsjon

Share Tweet Pin it

Serologisk blodprøve - hva er det? Ukjente prosedyrer skremmer alltid og gjør at du mistenker det verste. Men serologiske studier er bare en studie av de aktive komponentene i blodserumet, og det er ikke nødvendig å mistenke at du har noen sykdom når du mottar en henvisning til denne analysen. Blodserologi gjøres ikke bare for mistenkte sykdommer, men også for forebyggende formål. For eksempel, når du søker på en jobb, er alle forpliktet til å gjennomgå tester for markører av hepatitt og HIV.

Serologisk forskning utføres for å identifisere smittsomme sykdommer som en person har eller bekrefter deres fravær. Analysen er basert på samspillet mellom antistoffer eller antigener i serum med det tilsatte reagenset. Den agglutineringsreaksjon som følger av interaksjonen tillater oss å bestemme typen patogen og hvilket stadium den smittsomme prosessen er på.

Blodprøver utføres på to måter:

  1. Et antigen legges til serumet som forårsaket smittsomme sykdommer. Antistoffer i blodet til patogenet treffer umiddelbart en kjemisk reaksjon. På denne måten kan du bestemme hvor sterk immunresponsen i kroppen, samt alvorlighetsgraden av den smittsomme prosessen.
  2. Den andre metoden bestemmes av typen patologisk patogen. Når det tilsettes, tilsettes humane antistoffer produsert mot et bestemt patogen til serumet. Hvis patogenet er i humant blod, vil agglutinering oppstå.

Nesten også bestemt gruppen og rhesus av humant blod når pasientens biomaterialekomponenter blandes med sera av forskjellige grupper.

Derfor er det ikke overraskende når en lege gir retning til tester: Antistoffer produsert mot hepatitt C vil ikke beskytte kroppen mot andre typer hepatitt. Det samme skjer med andre infeksjoner. Ved dekoding av data er det normale innholdet nullt innhold av antistoffer eller antigener.

Etter å ha lært hva en serologisk blodprøve er, vil mange pasienter vil vite hva dekoderen gir.

Ved å bruke dataene du har fått, kan du:

  • identifisere den patologiske mikroorganismen i de tidlige stadiene av den smittsomme prosessen;
  • kontrollere utviklingen av sykdommen og graden av effektivitet i behandlingsprosessen;
  • evnen til å prøve ofte, på grunn av den økonomiske tilgjengeligheten av reagenset;
  • Resultatet kan fås innen få timer, noe som er svært viktig for behandling på sykehuset.
  • Pasienten trenger nesten ikke spesiell forberedelse før man tar biomaterialet.

Denne undersøkelsen er ikke bare foreskrevet for påvisning av infeksjoner: onkologiske prosesser, allergiske midler, endokrine forstyrrelser, og noen andre plager oppdages på samme måte.

En liten ulempe ved denne metoden er at noen ganger oppnås et falskt positivt eller falskt negativt resultat. Dette kan skje hos gravide eller om pasienten har spist noen måltider eller drikker dagen før.

Hvis det oppdages et positivt resultat under den første dekodingen av data, blir undersøkelsen alltid gjenutnevnt for å eliminere feilen under diagnosen.

Til tross for enkelheten i undersøkelsen og det faktum at resultatet nesten ikke påvirkes av eksterne faktorer, men for å oppnå de mest pålitelige dataene, anbefaler laboratorieteknikere å gjøre en liten forberedelse på tvers av levering av biomaterialet:

  • eliminere fett og krydret mat fra kostholdet;
  • Spis mindre søtsaker og ikke drikk søte kulsyreholdige drikker;
  • slutte å drikke alkohol
  • begrense fysisk innsats (idrettsutøvere anbefales å hoppe over trening, og de som er engasjert i tung fysisk arbeidskraft, tar ledig tid på jobb);
  • unngå stressende situasjoner.

Alle de ovennevnte faktorene kan påvirke dekodingsdataene, og resultatet kan være falskt positivt.

Men som det ble sagt tidligere, er den første positive reaksjonen, spesielt hvis det ikke finnes symptomer som følger med den identifiserte sykdommen, ikke alltid en indikator på patologi.

Serologisk analyse er bare et navn ukjent, faktisk ble denne studien utført mer enn en gang hos de fleste barn og voksne, fordi med hjelpen er det mulig å identifisere patogenet i tide og overvåke effekten av behandlingsprosessen.

Verdien av markører i diagnosen viral hepatitt B

Hepatitt B-virus (HBV) er en kompleks formasjon med eget DNA- og proteinbelegg. Den er preget av høy replikativitet, evnen til å mutere, integrere i det menneskelige genom.

Kombinasjonen av antigener, antistoffer, virus-DNA danner et system av serologiske (serum) markører, identifikasjonen av hvilke bestemmer sykdomsfasen, bidrar til å gjøre det til en retrospektiv analyse og forutsi utfallet, samt opprettholde dynamisk kontroll over infeksjonsutviklingen.

I kroppen bryter viruset seg inn i deler, kjerne trenger inn i hepatocytene, hvor det begynner å produsere nytt DNA og proteiner, hvorfra hele virioner er samlet.

HBV DNA sirkulerer i blodet, deler av membranene er antigener. Etter en tid dannes kroppens immunrespons i henhold til "antigen-antistoff" -prinsippet.

Hepatitt B overflateantigen (australsk antigen) ble først identifisert i aboriginene i Australia, som han mottok navnet sitt på. Det er et overflateantigen av det ytre proteinbelegget i hepatitt B-viruset. Det har flere undertyper, betinget betegnet av ayw, ayr, adw, adrq, adrq + koder, med noen forskjeller i struktur.

Det er HBsAg som spiller en nøkkelrolle i utviklingen og progresjonen av sykdommen, sikrer virusets levedyktighet, og dens hepatotropi er innføring av leverceller inni. Dens tilstedeværelse indikerer infeksjon med hepatitt B, og på grunnlag av antistoffer mot det er det bygget immunforsvar.

HBsAg vises i blodet fra midten av inkubasjonsperioden, vanligvis 15-25 dager etter infeksjon. Fra nå av blir infeksjonen smittsom, det vil si at den kan overføre fra transportøren til andre.

Virus-DNA i hepatocytter produserer så mange HBsAg at mengden overskrider hele virionene hundrevis av ganger. Fra en del er konvolutten av nye virus samlet, resten av proteinet går inn i blodet. Metningen av dem er i stand til å nå 500 μg / ml, som kan sammenlignes med kroppens eget myseprotein.

Hele prodromal (preicteric) og icteric perioden av antigen sirkulerer i blodet, og ved slutten av den akutte stadiet av sykdommen, 80-140 dager etter de første manifestasjonene av sykdommen, forsvinner og forsvinner forsiktig. Eksistensen av et antigen som er lengre enn 180 dager indikerer dannelsen av en kronisk form for hepatitt.

Immunresponsen - antistoffer mot HBs (anti-HBsAg) - vises etter en tid etter at antigenet forsvinner - fra 1 til 6 måneder, vanligvis i 2-4 måneder. Perioden mellom antigenets forsvunnelse og antistoffutseendet kalles et serologisk vindu, og erstatning av antigener med antistoffer kalles serokonversjon. Det er en klar indikator for slutten av den akutte perioden og begynnelsen av utvinning med dannelsen av livslang immunitet mot viruset.

Brudd på dette dynamiske scenariet, fraværet av et serologisk vindu, utseendet av antistoffer mot HBs for fort er et ugunstig tegn. Det er fare for hyperimmunreaksjon, utvikling av den fulminante formen av sykdommen med alvorlige lesjoner i leveren og andre organer. Samtidig påvisning av markører i serum etter flere måneder av sykdommen indikerer en kronisk form for hepatitt.

Resultatet av en blodprøve for HBsAg er ikke alltid pålitelig. Falske negative svar er mulige av følgende grunner:

  • for kort periode mellom infeksjon og undersøkelse - mindre enn 3 uker;
  • Feilpasningen av antigen-subtypen med typen diagnostisk immunoenzym-kit - antigenproteiner og antistoffer er forskjellige;
  • Sannsynlig infeksjon med blandet infeksjon - HIV, hepatitt C.

Hvis det er mistanke om infeksjon med hepatitt B og negative testresultater for et antigen, utføres PCR-tester for tilstedeværelse av viralt DNA og andre virusmarkører, gjenta analysen etter en stund.

Det er en positiv test for HBsAg hos personer som ikke har hepatitt, de såkalte sunne virusbærerne. Faren for overføring til andre er bevart, til tross for fravær av kliniske manifestasjoner, er medisinsk tilsyn nødvendig.

Antistoffer mot HBsAg er de eneste beskyttende immunelementene som helt beskytter kroppen mot re-infeksjon med hepatitt B.

Disse egenskapene til anti-HBsAg er lagt ned i grunnprinsippet for vaksinering. Vaksinen inneholder et rekombinant (kunstig avledet) australsk antigen kombinert med aluminiumhydroksyd. Etter den intramuskulære injeksjonen av vaksinen, begynner antistoffer å utvikles om to uker, en fullverdig immunitet bør dannes etter triple inokulering.

Det beskyttende nivået av anti-HBsAg er over 100 mIU / ml. Over tid, etter 8-12 år, kan konsentrasjonen av anti-HBs reduseres.

En negativ eller svak immunrespons på vaksineadministrasjon er mulig når antistoffnivået ikke er mer enn 99 mIU / ml. Flere faktorer spiller en rolle her:

  • alder mindre enn 2 eller mer enn 60 år;
  • Tilstedeværelsen av langvarige kroniske infeksjoner;
  • svak generell immunitet
  • utilstrekkelig dose av vaksine.

Disse situasjonene, samt reduksjonen av det nødvendige beskyttende nivå av antistoffer, er årsaken til at en booster (ekstra) dose av vaksinen innføres i et år.

Dette antigenet er kun konsentrert i hepatocytter, detekteres bare i studien av leverpunkmentmaterialet, og dannede totale antistoffer mot den vises nesten fra de første dagene av sykdommen, når det ennå ikke er kliniske tegn på sykdommen.

Det finnes to typer antistoffer mot HBcoreAg:

  1. IgM-immunglobuliner øker i løpet av den akutte fasen av hepatitt og i perioder med forverring av kronisk form, forsvinner under remisjon og etter utvinning. Den totale oppholdstiden for HBcore-IgM i blodet er fra 6 til 12 måneder. Denne markøren tjener som hovedindikator for akutt hepatitt B;
  2. Klasse G immunoglobuliner (HBcore-IgG) finnes for livet hos alle som noen gang har hatt hepatitt B, men har ikke beskyttende egenskaper.

Identifikasjon av disse antistoffene bidrar til å diagnostisere sykdommen i løpet av det serologiske vinduet i fravær av HBs markører.

Positive resultater av testing for HBcore-IgM og HBcore-IgG kan noen ganger være upålitelige - klasse M og G immunoglobuliner produseres i visse sykdommer i muskel-skjelettsystemet.

Antigenet dannes ved transformasjonen av en del av HBcoreAg og er karakteristisk for fasen av aktiv viral replikasjon i leverceller. I tillegg indikerer utseendet av denne markøren en økning i infektiøsiteten i blodet og utladning av pasienten. Med en gunstig løpet av den akutte form for hepatitt, reduseres konsentrasjonen av HBeAg 20-40 dager etter sykdomsutbruddet med en samtidig økning i antistoffer (anti-HBeAg) til de helt erstatter antigener.

Serokonversjon og spesielt dets tegn, som for eksempel en rask økning i antistoffkoncentrasjonen - en indikator for en nær utvinning, som utelukker muligheten for kroniskhet. Tvert imot øker svake indikatorer for anti-HBeAg eller deres langvarige fravær risikoen for utbruddet av den kroniske integrerende form for hepatitt - innsetting av virusgenomet i hepatocyt DNA.

I den kroniske formen av sykdommen indikerer nærværet av en høy konsentrasjon av HBeAg og kopier av virus-DNA at aktiv replikasjon opprettholdes. Reduserte antigen titere og DNA nivåer (10 ^ 5 kopier / ml.

Etter gjenvinning forblir anti-HBeAg i blodet i ytterligere seks måneder til fem år.

De mest effektive metoder for blodprøver for tilstedeværelse av serologiske markører av hepatitt B er ELISA og PCR.

En enzymimmunoassay er en svært sensitiv informativ metode som gjør det mulig å identifisere markører av viral hepatitt, som reelt gjengir "antigen-antistoff" -reaksjonen i laboratoriet. Den rensede serumprøve kombineres med et reagens inneholdende et antistoff eller antigen. Det resulterende immunkomplekset er farget med en spesiell substans under enzymindikasjoner. Resultatet undersøkes optisk.

Analysens spesifisitet gjør det mulig å oppnå et nøyaktig resultat selv med lav konsentrasjon av elementet i blodet. ELISA, i motsetning til andre typer studier, oppdager anti-HBcoreAg ikke totalt, men HBcore-IgM og HBcore-IgG separat, noe som øker informasjonsinnholdet.

PCR (polymerasekjedereaksjon) brukes til å identifisere DNA-partikler av viruset, kvalitativ analyse av deres tilstedeværelse og kvantitativ viral belastning av blod. For PCR er tilstedeværelsen av ett DNA-molekyl i prøven under studien tilstrekkelig. Det kan brukes til å oppdage infeksjon i inkubasjonsperioden - det "ser" viruset fra den andre infeksjonsvecka. PCR med høy følsomhet tillater deg å få 100% pålitelig informasjon for diagnose. For full dynamisk overvåkning av sykdomsforløpet, bør PCR-diagnose av blod utføres minst hver tredje måned.

I alle tilfeller blir venøs blod tatt for studien etter foreløpig forberedelse, som inkluderer en 12-timers rask, nektelse å drikke alkohol og medisiner.

Resultatene av tester for serologiske markører, kompetent lesing av deres kvalitative og kvantitative egenskaper bidrar til å etablere infeksjonens tilstand - tilstedeværelsen eller fraværet av det i kroppen, bestemme sykdommens periode og form, forutse den videre utvikling.

Egenskaper ved den serologiske analysen av blod

Serologiske blodprøver utføres for å finne ut om en person er syk med visse smittsomme sykdommer eller er helt sunn. Serologisk undersøkelse utført i laboratoriet, etter at transkripsjonen er utstedt. Studien gjør at du kan finne ut hvor langt sykdommen har gått for å bestemme scenen av sykdommen. Definisjonen av prosedyren og en detaljert beskrivelse av stadiene av analyse belyser Wikipedia.

En blodprøve for antistoffer er indisert for et stort antall sykdommer. Disse er sjeldne og utbredte plager. Det er kjent at antistoffer og antigener er i stand til å interagere. Legene bruker også denne funksjonen og utfører forskning.

Hvis en person er syk, dannes immune beskyttende komplekser. Legen, som utfører studien, legger til et antigen eller antistoff, og observerer deretter reaksjonen. Det er slik det blir klart hvilken type infeksjon som er tilstede i kroppen. Etter det kan du på en trygg måte starte behandlingen.

Serologisk blodprøve utføres som følger. Legen tar antigenet av patogenet, legger det til serumet. Som et resultat av manipulasjonen begynner en kjemisk reaksjon. Legen gjør en vurdering og gir resultatet.

Ofte er det en situasjon der hendelser utvikles på motsatt måte. Poenget er å avgjøre hvilken type sykdom en person har. Dette kan gjøres i henhold til tilgjengelige antigener. For å identifisere dem, tar legen antistoffene og legger dem til blodet.

Hvis du trenger å vite hvilken blodtype en person har, tar de også materialet. Legene er nøye oppmerksom på hva som er blodpropp. Kanskje studien vil avdekke en avvik fra normen, så hvis du ikke starter behandling, kan konsekvensene være katastrofale. Det handler ikke bare om trombose, en person kan ha et hjerteinfarkt. I tillegg øker sannsynligheten for slagtilfelle.

Hvis du vil gjennomgå forskning, husk at det skal gjøres på tom mage. En blodprøve er tatt i laboratorier. Hvordan reaksjonen går, bestemmer legen ved bruk av serumet. Det er gjennom det at man kan forstå hvordan antigener og antistoffer interagerer. Oppnådd informasjon gir oss mulighet til å presentere et komplett bilde. Legen, basert på resultatet av studien, vil foreskrive den mest effektive behandlingen. Derfor, hvis det er mulig, vær sikker på å overlevere materialet.

Følg en diett minst dagen før dagen for levering av materialet. Ikke spis fett, søtsaker bør også utelukkes. Ikke spis for mye mat om gangen. Alkohol eliminerer helt. I tillegg bør du ikke utslette deg selv med fysisk anstrengelse. Siden stress kan føre til forvrengning av resultater, unngå det før du tar en blodprøve.

Hvis du tror at du har Giardia, amebiasis, kan du kontakte laboratoriet. En undersøkelse av materialet vil vise om en person er syk med toxoplasmose, opisthorchiasis og en rekke andre sykdommer. Antistoffer vil være et signal for å starte behandlingen.

Denne undersøkelsen er foreskrevet for gravide, i tilfelle mistanke om kardiovaskulær patologi. Åreknuter, autoimmune sykdommer er alle indikasjoner på studien.

I tillegg er forskning gjort:

  • etter behandling
  • før og etter operasjonen;
  • å vurdere effektiviteten av behandlingen.

I urologi og venerologi er forskning gjort oftest.

Hvis resultatene viser at det ikke finnes antistoffer, så er dette veldig bra. Ingen infeksjon. Men dette skjer sjelden, spesielt hvis det tidligere var alle symptomene som indikerer forekomsten av sykdommen. Som regel blir serologisk analyse ofte den siste bekreftelsen på diagnosen.

Vanligvis gjøres en blodprøve for antistoffer to ganger. Først avgjør du bare om det er infeksjon. Den andre gangen tas en antistofftest for å forstå hvor dynamisk prosessen er. Hvis antall bindinger mellom antistoffer og antigener har økt, vil infeksjon oppstå. For å velge riktig behandling, bør legen få mer informasjon. I denne situasjonen utføres ytterligere kjemiske reaksjoner. Så du kan forstå hvilken sykdom som må kjempe. I tillegg er det bestemt av scenen av sykdommen.

Resultatet av blodprøver for antistoffer kan kun økes. Normen er verdien på "null" -merket. Det er derfor at resultatet ikke kan reduseres.

Laboratoriediagnose av viral hepatitt B og C

Resultatene av laboratorieundersøkelser spiller en betydelig, om ikke ledende rolle i å bekrefte diagnosen av viral hepatitt og etablere dens etiologi.

Biokjemisk blodprøve

Biokjemisk analyse av pasientens blod har lenge kommet inn i kliniske laboratoriers praksis. Totaliteten av de innhentede dataene på indikatorene for utveksling av bilirubin, wheyproteiner og enzymer kan påvise inflammatoriske prosesser som forekommer i menneskekroppen og foreslår lokalisering. Disse kriteriene er ikke spesifikke og karakteriserer ikke etiologien av viral hepatitt, men er avgjørende for å vurdere leverens funksjonelle tilstand.

Indikatorer for utveksling av bilirubin.

Pasienten kan vurdere tilstanden av bilirubinmetabolismen på grunnlag av en biokjemisk analyse av blod, urin og avføring. Fri bilirubin er et derivat av hemoglobin frigjort under hemolyse av røde blodlegemer. Under fysiologiske forhold blir ca. 1% sirkulerende erytrocytter, som danner 200-250 mg bilirubin, hemolysert hver dag. Hoveddelen av bilirubin går inn i blodbanen fra celler fra det mononukleære fagocytsystemet i milten og benmarg. Bilirubin er uoppløselig i vann, derfor blir det i blodet overført av ikke-spesifikke transportproteiner, albumin. Fri bilirubin er en giftig forbindelse som er i stand til å trenge inn i blod-hjernebarrieren, forårsaker encefalopati. Bilirubinavgiftning forekommer i leveren celler, hvor glukuronsyre er festet til den, og danner bilirubin glukuronider. Disse forbindelsene er ikke lenger giftige og vannløselige, noe som letter deres eliminering fra kroppen som en del av gallen. I tarmen, under virkningen av bakterielle enzymer, dannes to grupper av bilirubin dekomponeringsprodukter - urobilinogener og stercobilinogener, hvorav de fleste utskilles i avføringen. Under normale fysiologiske forhold er nyrene ikke involvert i fjerning av bilirubin.
Bilirubin i blodet av en sunn person er inneholdt i en konsentrasjon på 1,7-17,1 μmol / l og representeres av to fraksjoner: uoppløselig bilirubin assosiert med albumin - indirekte bilirubin og løselig glukoronid bilirubin - direkte bilirubin. Normalt er forholdet 3: 1.
I hepatitt er leverceller skadet, og dermed slår galdeproduksjonen ned. I tillegg, som et resultat av skade på leveren parenchyma, går galle ikke bare inn i gallekanaliculi, men også inn i blodet. Disse prosessene fører til økning i total bilirubin i blodet på grunn av begge deler. Det er påvist at allerede i slutten av den pre-epidermale perioden, hos enkelte pasienter, mot bakgrunnen av normal totalt bilirubin, begynner brøkdelen av direkte bilirubin å vokse, noe som er en tidlig indikator for cytolytiske prosesser i leveren. Bilirubin og urobilin begynner å bli påvist i urinen, og konsentrasjonen av stercobilin i avføringen reduseres kraftig (tabell 1).
Tabell 1. Forholdet mellom bilirubinmetabolismen i normal og i utviklingen av levergulsott.

Totalt serum bilirubin

1,7 - 17,1 μmol / l

Direkte serum bilirubin

Indirekte serum bilirubin

Reaksjon av urin til bilirubin og urobilin

Reaksjon av avføring til sterkobilin

Det bør bemerkes at bilirubinmetabolismen å diagnostisere viral hepatitt spille en rolle bare i utviklingen av gulsott. Det meste av den anicteriske formen og den preikteriske fasen av viral hepatitt er for det meste ukjent.

Evaluering av enzymaktivitet.

Bestemmelse av serumaminotransferaseaktivitet (alaninaminotransferase (ALT) og aspartataminotransferase (AST)) er en svært sensitiv indikator for cytolysen av hepatocytter, som bestemmer sin ledende rolle i diagnosen hepatitt av ulike etiologier. I den cytolytiske prosessen, som utvikler seg i leveren hos en pasient med viral hepatitt, utløses ALT "flush out", graden av AST-økning er betydelig mindre (tabell 2).

Tabell 2. Bestemmelse av enzymaktivitet i serum

Hepatittverdier

Hepatocyt-spesifisitet

Alkalisk fosfatase (SHF)

31-115 U / l barn: opptil 350 U / l

* Verdiene er gitt i samsvar med anbefalingene fra diagnostiske testsystemer som brukes i KDL NPF "Liteh"

For ytterligere å bekrefte den hepatogene karakteren av fermentemien, er det mulig å bestemme aktiviteten til lever-spesifikke enzymer - sorbitol dehydrogenase, fruktose-1-fosfataldolase, urokinase etc. De er hovedsakelig lokalisert i hepatocytter og deres identifikasjon i blodet er tydelig forbundet med leversykdom. Imidlertid er disse testene dårligere i følsomhet for bestemmelse av ALT-aktivitet. Aktiviteten til ALT og AST reflekterer alvorlighetsgraden av betennelse i leveren, men ikke etiologien av hepatitt.

Proteinprøver

Ved akutt viral hepatitt forblir det totale proteininnholdet i blodplasma og deres sammensetning nesten uendret. Et unntak er tymol-testen, som vanligvis har verdier på opptil 4 U og øker til 6-8 IE i hepatitt.

Når CPU i trinn hCG kan observeres en reduksjon av albumin serumkonsentrasjon, senke den protrombin-indeksen (mindre enn 70%), reduksjon av konsentrasjonen av andre blodkoaguleringsfaktorer innenfor syndrom hepatocellulær mangel. Ytterligere indikatorer for hepatittaktivitet er den akselererte ESR (~ 15 mm / h), en økning i serumgamma globulinkonsentrasjon.

Påvisning av serologiske markører av viral hepatitt

Det er mulig å fastslå hepatittens virale karakter og kun få informasjon om dets etiologi ved å identifisere serologiske markører av hepatittvirus. Slike markører inkluderer virale proteiner (antigener), spesifikke antistoffer produsert av kroppen som svar på en infeksjon, og virusnukleinsyrer (DNA eller RNA), som representerer dens genom.

Kombinasjonen av metoder for å detektere spesifikke virale eller bakterielle proteiner (antigener) eller antistoffer fremstilt i verten i nærvær av ett eller annet patogen i biologiske vev og fluider refereres til som immunologiske metoder for laboratorieanalyse. De siste tiårene har immunologiske forskningsmetoder blitt utbredt. Årsaken til dette var den tette fusjonen av immunologi og bioteknologi, noe som gjorde det mulig å utvikle og sette i bruk et bredt spekter av testsystemer basert på samspillet mellom antigen-antistoff. For viral hepatitt, refererer ELISA til indirekte metoder for å oppdage patogenet, slik at man kan etablere etiologien av sykdommen.

Relativt nylig har metodene for genodiagnostikk blitt innført i praksis av kliniske diagnostiske laboratorier, som tillater deteksjon og karakterisering av gener eller ikke-sansete DNA- og / eller RNA-sekvenser. Deres utvikling skyldes utviklingen i 1983 av prinsippet om polymerasekjedereaksjonen (PCR). De første rapportene om den praktiske anvendelsen av PCR dukket opp i 1985, og siden da har antall publikasjoner hvor PCR brukes som en av forskningsmetodene, et av de første stedene i verdens vitenskapelig litteratur. Disse tilnærmingene er anvendbare for påvisning og undersøkelse av genomene av smittsomme midler, påvisning av markører av onkologiske sykdommer, påvisning av genetiske forandringer i det humane genom som er forbundet med forskjellige funksjonsforstyrrelser. I motsetning til ELISA refererer PCR-analyse til direkte metoder for å detektere patogenet i klinisk materiale, noe som gjør det mulig å evaluere aktiviteten av den virale prosessen og å spore prosessene for spredning av patogenet i forskjellige organer og vev.

Serodiagnose av viral hepatitt B.

Hepatitt B-virus (hepatitt B-virus, HBV) tilhører familien Hepadnoviridae. Virusets genom er representert ved et delvis doblet sirkulært DNA-molekyl på 3200 bp i størrelse. Under lysmikroskopi ser HBV ut som en sfærisk partikkel med en diameter på 42 nm (dansk partikkel) som består av en nukleoidformet nukleoidformet som en icosahedron med en diameter på 28 nm, innvendig som det er et dobbeltstrenget DNA, terminal protein og DNA-polymeraseenzym. Nukleoidproteinet inneholder HBcAg og HBeAg. Ytre skallet (7 nm tykt) dannes av HBV-overflateantigenet - HBsAg (figur 2, 3). Hepatitt B-viruset er et pseudoretrovirus, dvs. dets DNA kan delvis settes inn i hepatocytgenomet.

Fig. 2. Ordning av strukturen av HBV virion og komponenter av overflate antigenet. Overdreven produksjon av overflateprotein (HBsAg) fører til tilstedeværelse i pasientens serum i fri form.

Fig. 3. Partikler av dansker i pasientens serum (lysmikroskopi)

Med AVH og forverring av kronisk hepatitt, kan viruspartikler detekteres i pasientens hepatocytter og serum. Med den integrerende formen for kronisk hepatitt B og i remissiefasen oppdages ikke HBV i serum.

Basis for laboratoriediagnose av HBV-infeksjon er bestemmelse av serologiske markører for virusinfeksjon: HBsAg, HBeAg, anti-HBc klasse IgM og IgG, anti-HBe og anti-HBs, HBV DNA og viral DNA polymerase aktivitet. Avhengig av løpet av viral hepatitt B ser spekteret av endringer i serologiske markører annerledes ut (Figur 4, 5)

Fig. 4. Spektrum av endringer i serologiske markører i akutt hepatitt B med oppløsningsstadiet

Figur 5. Spektrum av endringer i serologiske markører i tilfelle kronisk hepatitt B

HBsAg er en viktig markør for HBV-infeksjon. I akutt viral B kan i de fleste tilfeller (90-80%) HBsAg detekteres i inkuberingsperioden, fra den femte uke av infeksjon. Gjennomsnittlig varighet av antigelsirkulasjon er 70-80 dager. Den raske forsvinden av HBsAg (i de første dagene av gulsott) med utseendet av antiBB er et dårlig prognostisk tegn. Ved kronisk hepatitt B kan HBsAg sirkulere i pasientens blod over mange år. Det skal bemerkes at nåværende metoder for bestemmelse av HBsAg, inkludert ELISA, har en terskel av følsomhet. Derfor, i nærvær av kliniske tegn på hepatitt og fravær av HBsAg i serum, er det derfor nødvendig å undersøke andre markører for HBV-infeksjon. Tilstedeværelsen av HBsAg i blodet indikerer tilstedeværelsen av et virus i leveren og er svært sannsynlig i blodet. Ikke hvert serum som inneholder HBsAg inneholder hepatitt B-viruset. I noen tilfeller er virus-DNA ikke fullt integrert i hepatocytt DNA, men delvis, bare av regionen som koder for HBsAg-syntese. I disse tilfellene syntetiseres HBsAg uten andre komponenter i virionen (det vil si uten andre antigener). Det antas at denne situasjonen oppstår når den "sunne" bæreren HBsAg.

HBeAg av hepatitt B-viruset karakteriserer høy infeksibilitet av blodet, som er en indikator for aktiv replikasjon av HBV. HBeAg sirkulerer i pasientens blod bare i nærvær av HBsAg. I den første uken i isterperioden oppdages det hos 85-95% av pasientene. Deteksjon av HBeAg i to måneder eller mer tjener som et prognostisk tegn på utviklingen av kronisk hepatitt. I de fleste pasienter med kronisk hepatitt med høy aktivitet i HBeAg-prosessen, varer det lenge (opptil flere år).

Antistoffer mot nukleært antigen av hepatitt B-virus klasse M (anti-HBc IgM) er en markør for aktiv HBV-replikasjon og akutt infeksjon. Identifisert 1-2 uker etter oppdagelsen av HBsAg og vedvarer i 2-18 måneder. Hos 4-20% av pasientene med akutt hepatitt B er anti-HBc IgM den eneste markøren for infeksjon. Hos pasienter med kronisk hepatitt B kan anti-HBc IgM påvises hos enkelte pasienter med lavere titre enn ved akutt infeksjon, med antistofftiter som reflekterer alvorlighetsgraden av hepatitt.

Antistoffer mot HBcAg klasse G (anti-HBc IgG) vises nesten samtidig med anti-HBc IgM. Som regel forblir de med alle personer som har hatt hepatitt B for livet. Anti-HBc IgG sirkuleres sammen med HBsAg i 95% HBsAg-bærere.

Antistoffer mot HBsAg (anti-HBs) indikerer tidligere infeksjon eller forekomst av immunisering etter vaksinering (beskyttelsesnivå - 10 IE / ml). De opptrer i gjenopprettingsperioden, 4 uker etter HBsAgs forsvunnelse, og når en maksimal konsentrasjon i 1-2 år, etterfulgt av en gradvis reduksjon i nivået utilgjengelig for deteksjon ved moderne diagnostiske metoder. I noen tilfeller kan anti-HBs sirkulere for livet. Utseendet til anti-HBs mot bakgrunnen av klinisk forbedring hos en pasient med hepatitt B er et godt prognostisk tegn. Det er viktig å merke seg at i dynamikken ved akutt HBV-infeksjon er det et "vindu" når HBsAg ikke lenger er definert, og anti-HBs er ikke fremstilt ennå. Samtidig påvises anti-HBc IgM og IgG. Det følger av dette at det er nødvendig å undersøke pasienter med AVH for anti-HBc IgM selv med negative resultater av HBsAg- og anti-HBs-studien.

Antistoffer mot HBeAg (anti-HBe) vises i blodet etter eliminering av HBeAg og fullføring av viral replikasjon. Ved slutten av 9. uke i den akutte perioden med hepatitt B har mer enn 90% av pasientene anti-HBe. Under gjenopprettingsperioden kan anti-HBe forsvinne. Tilstedeværelsen av anti-HBe er imidlertid ikke en indikasjon på fraværet av infeksjon i et bestemt serum. Det har vist seg at i en rekke pasienter under utviklingen av hepatitt B (ca. 10%), under påvirkning av "immuntrykk" på viruset, oppstår mutante former som "unngår" immunovervåkning og elimineres ikke. En mutant ble isolert fra bærere av anti-HBe, ikke i stand til å produsere HBeAg på grunn av defekter i precoreområdet og ble betegnet HBeAg-negativ. Utseendet til en HBeAg-negativ mutant fører til utviklingen av leverskade med fortsatt virusreplikasjon (tilstedeværelse av HBV DNA i serum). Den primære infeksjonen med HBeAg-negativ mutant øker risikoen for fulminant hepatitt betydelig.

De beskrevne hepatitt B markører undersøkes ved hjelp av ELISA. Spekteret av antistoffer (anti-HBe, anti-HBs, anti-HBc IgM, anti-HBc IgG) og antigener (HBsAg, HBeAg) tillater deg å etablere diagnosen hepatitt B og bestemme sykdomsstadiet (Tabell 3). Ulempen med denne metoden er at det er umulig å bruke den i infeksjonen med mutante former av viruset, med immunosuppresjon (kreftpasienter, rusmisbrukere etc.) og for den kvantitative vurdering av patogenet som finnes i kroppen. Løsningen av disse problemene ble mulig som følge av innføring av molekylærbiologiske metoder i praksis av kliniske diagnostiske laboratorier.

Tabell 3. Ulike kombinasjoner av serologiske markører av hepatitt B-virusinfeksjon og deres tolkning

antiNVc
IgM

antiNV
c mengder

gen diagnostiske metoder, som inkluderer PCR, i betydelig grad utvide funksjonaliteten til laboratoriediagnostisering av virus i å la seg selv for å identifisere det forårsakende middel, for å etablere vev og subcellulær lokalisering av HBV, identifisere og karakterisere de mutante former av viruset, for å vurdere nivået av viremi i sykdomsforløpet, inkludert - på bakgrunn av antiviral terapi.

For tiden er det et bredt spekter av diagnostiske testsystemer for å detektere HBV DNA under laboratorieforhold basert på PCR-metoder - Roche, NPF Litekh, DNA-teknologi, LCR (ligasekjedereaksjon) - Abbott, bDNA (metode for "divergerende" DNA probes) - fast "Chiron". Disse testsystemene tillater kvalitativ bestemmelse av tilstedeværelsen av et patogen i biologisk materiale: serum eller plasma, levervev, mononukleære celler. En av alternativene for den kvalitative bestemmelsen av HBV-DNA er in situ-PCR-teknologi (i histologiske seksjoner), som gjør det mulig å etablere intracellulær lokalisering av viruset i hepatocytter.

Det eneste kommersielle testsystemet for differensialdiagnosen av HBeAg-negativ hepatitt B ble skapt av Abbot ved hjelp av LCR. En signifikant ulempe ved dette systemet er deteksjon av bare en av mange mutasjoner, hvilket resulterer i fravær av syntesen av HBeAg-virus. Identifikasjon av hele settet av genetiske endringer som er karakteristiske for HBeAg-negative hepatitt B-virus, er så langt mulig bare mulig ved direkte sekvensering av PCR-amplifiserte fragmenter av virusgenomet.

Kvantitativ karakterisering av HBV DNA-innholdet i kliniske prøver er viktig for å evaluere effekten av antiviral terapi og har prognostisk betydning for å bestemme kroniskiteten av HBV. Når innledningsvis lavt nivå av viremi (HBV DNA på mindre enn 500 fg / l) i prosent av kronisk akutt hepatitt B nær null, mens konsentrasjonen av DNA HBV fra 500 til 2 000 fg / ul chronization prosess observeres hos 25-30% av pasientene, mens høyere nivå av viremi i pasient (mer enn 2000 fg / μl) akutt hepatitt B blir ofte kronisk.

Kjente kommersielle testsystemer for vurdering av konsentrasjonen av HBV-DNA implementerer prinsippet om konkurrerende PCR-analyse fulgt av et hybridiseringsskjema for å bestemme amplifikasjonsprodukter (Roche, NPF Liteh). Denne tilnærmingen er basert på å innføre i en klinisk prøve en intern standard av en kjent konsentrasjon som er kvalitativt forskjellig fra matrisen som skal bestemmes. Etter PCR beregnes konsentrasjonen av HBV DNA i testmaterialet basert på den kjente konsentrasjonen av den interne standard og forholdet mellom akkumulering av amplifikasjonsprodukter av den interne standard og matrisen som skal bestemmes.

I dag er utviklingen av laboratoriediagnostisering av hepatitt metoder i å gå mot etableringen av kommersielle testsett for identifisering av klinisk relevante HBV-mutantstammer, så vel som anvendelse av nye optiske enheter (biosensorer) for omfattende diagnose av HBV-infeksjon (virale proteiner, antistoffer dertil og HBV DNA)

Hepatitt C serodiagnose

Hepatitt C-virus (hepatitt C-virus, HCV) er et RNA som inneholder hepatotropiske og lymfotropiske virus som tilhører familien Flaviviridae. Virusets genom er representert ved et enkeltstrenget (+) RNA-molekyl som måler ca. 9 500 baser, som koder for strukturelle og ikke-strukturelle proteiner (figur 6).

Fig. 6. Skjema for HCV genomisk RNA og viral proteinsyntese

Strukturelle proteiner inkluderer kjerneprotein (kjerne) og konvoluttglykoproteiner (El og E2). Den ikke-strukturelle regionen er et kompleks av proteiner med enzymatisk aktivitet, primært RNA-avhengig - RNA-polymerase. I tillegg til virale proteiner, er det utenfor virionen dekket av en lipidmembran som består av en lipoproteins med lav tetthetsverdi (figur 7).

Fig. 7. Diagram over strukturen av virionen av hepatitt C-viruset.

Inntil 1990 ble CGN-A-Ni-B med parenteral overføring diagnostisert på grunnlag av økt serum-ALT-aktivitet i 6 måneder, i fravær av andre kjente markører av viral hepatitt. Men hos noen pasienter med kronisk hepatitt C øker ikke nivået av ALT. I moderne diagnostikk av hepatitt C, er hovedrolle gitt til bestemmelse av antistoffer mot HCV og påvisning av HCV RNA.

I motsetning til hepatitt B, der virusene og antistoffene til dem kan detekteres, med hepatitt C, oppdages det bare antistoffer ved hjelp av ELISA. HCV antigener, hvis de kommer inn i blodet, i mengder som knapt er fanget. De kan bare bli funnet i levervev ved hjelp av immunhistokemiske undersøkelsesmetoder. Dette begrenser i betydelig grad evnen til å vurdere kurs og aktivitet av den smittsomme prosessen.

Anti-HCV indikerer ikke fortsatt virusreplikasjon, og kan være et tegn på både nåværende og tidligere infeksjoner. Det er også nødvendig å ta hensyn til at en anti-HCV-donor, som ikke nødvendigvis er indikativ for HCV-infeksjon, kan påvises hos mottakere som har blitt transfisert med infisert blod. Hos pasienter med kronisk hepatitt C finnes anti-HCV i blodet, ikke bare i fri form, men også i sammensetningen av sirkulerende immunkomplekser.

Antistoffer dannes til hver av de virale proteiner som er lokalisert i det strukturelle og ikke-strukturelle område av virusgenomet. Dette bestemmer deres forskjellige spesifisitet og dermed ulike diagnostiske opplysninger. For screening av hepatitt C benyttes ELISA-metoden, og immunoblot-metoden (RIBA) brukes som en bekreftende test. Det finnes flere generasjoner av diagnostiske testsystemer for å oppdage anti-HCV, forskjellig i sensitivitet og spesifisitet (Tabell 4).

Tabell 4. Sammenligning av forskjellige generasjoner av diagnostiske enzymimmunoassay-testsystemer for påvisning av antistoffer mot HCV.

* Testsystemer av den fjerde generasjonen inneholder syntetiske og rekombinante virusantigener, hvis størrelser kan avvike fra fragmentene fra den tredje generasjonen.

Det første diagnostiske testsystemet basert på deteksjon av antistoffer mot C-100-3 ble utviklet i 1989 i laboratoriet av M. Houghton og ble raskt allestedsnærværende. Det gjorde det mulig å fange antistoffer i sonen som kjennetegner bare 12% av virusproteinet i den ikke-strukturelle regionen (NS3, NS4). I tillegg faller det kunstige rekombinante antigenet C-100-3 ikke helt sammen med naturlige virale proteiner, som forutbestiller sin svake immunogenicitet. Antistoffer mot C-protein (Ag-kjerne) ved hjelp av antigen C-100-3 er ikke fanget i det hele tatt. Dette bestemte forutbestemt lav spesifisitet av definisjonen av anti-HCV og et stort antall falsk-negative resultater, spesielt hos pasienter med kronisk hepatitt C. Hos pasienter med alvorlig hypergammaglobulinemi er T-testen tvert imot falsk positiv.

Testsystemer av 2. generasjon, som dukket opp i 1991, tillater å fange antistoffer mot proteiner i forskjellige zoner av genomet, ikke bare ikke-strukturelle, men også strukturelle områder. Deres fordel var fremfor alt høy spesifisitet, samt muligheten for en mer fullstendig representasjon av spektret av HCV antigener. Bruk av testsystemer fra 2. generasjon gjorde det mulig å forbedre utvalg av donorer betydelig og redusere risikoen for utvikling av hepatitt C etter transfusjon.

Ved bruk av testsystemer av 2. generasjon er ikke falske negative resultater ekskludert, spesielt hos pasienter med HCV-genotyper som er uvanlige for denne regionen. De mest perfekte testsystemene i 3. og 4. generasjon, brukt i klinisk praksis siden 1995.

Testsystemer av 3. og 4. generasjon tillater detektering av anti-HCV i 99,7% av tilfellene. I noen tilfeller kan ikke antistoffer mot HCV detekteres, for eksempel når immunresponsen forsinkes, når immunosuppressiv terapi brukes eller når immunosuppresjon observeres på bakgrunn av en onkologisk sykdom, når det tas narkotika etc. False-positive resultater observeres svært sjelden. For å ekskludere dem analyseres spørsmålet sera i RIBA- eller INNO LIA-tester, som oppdager antistoffer mot hvert enkelt HCV-protein. Etablering av en diagnose av hepatitt C og overvåking av pasienter er ofte vanskelig når man bare bruker klassiske metoder for laboratoriediagnose. Dette skyldes de spesielle egenskapene ved HCV-infeksjonen, hvoretter følgende kan observeres: asymptomatisk i de første stadiene av sykdommen; lave, ofte normale nivåer av ALT; sen forekomst av antistoffer (opptil 2 år etter sykdomsutbrudd); mangel på pålitelige testsystemer for påvisning av virale proteiner. Molekyærdiagnostikk hepatitt C-ledende stilling i laboratoriet diagnose av HCV-infeksjon oppta genodiagnostic metoder slik: direkte å påvise genetiske materialet til viruset i serum og vev i menneskekroppen (mononukleære celler, hepatocytter, benmarg, etc.); evaluere virusets replikative aktivitet i vevet; kvantifisere konsentrasjonen av viruset i serumet; etablere genotypen av viruset og overvåke variasjonen av HCV. Påvisning av HCV RNA i serum er "gullstandard" av diagnose, noe som indikerer fortsatt HCV-replikasjon. I henhold til WHO-anbefalingen kan diagnosen hepatitt C fremstilles på grunnlag av en trefolds deteksjon av HCV RNA i pasientens serum i fravær av andre hepatittmarkører. I den akutte fasen av hepatitt detekteres RNA i blodet så tidlig som 1-2 uker etter infeksjon, dvs. lenge før adventen av anti-HCV. Med all heterogeniteten av HCV-befolkningen har alle genetiske varianter av viruset en konservativ region i den 5'-utranslaterte regionen av genomet, ved påvisning av hvilke mest kjente diagnostiske testsystemer for detektering av HCV RNA er basert. Inntil nylig var Amplicor HCV Roche-testen, som avslørte 700 kopier av RNA per ml, ansett som den mest sensitive testen for å bestemme HCV RNA. Ved bruk av Abbott LCx-settet, kan 200 kopier av RNA / ml detekteres. BDNA Quantiplex-testen (fast "Chiron") er for tiden mindre følsom, men er utbredt. Innenlandske testsystemer er basert på bestemmelse av HCV RNA i en klinisk prøve ved RT-PCR ved bruk av amplifikasjonen av den konservative 5'-ikke-translaterte regionen av virusgenomet (NPF Liteh, DNA-teknologi) som et mål. PCR tillater detektering av HCV RNA, ikke bare i blodets serum, men også i leverenvevet, noe som er viktig for å bekrefte rollen av HCV i dannelsen av hepatocellulært karcinom. I denne kategorien av pasienter blir HCV RNA detektert i hepatocytter og i fravær av anti-HCV og HCV RNA i serum. Et karakteristisk trekk ved HCV-infeksjon er utviklingen av en rekke ekstrahepatiske manifestasjoner, som krever overvåking av spredningen av viruset i kroppen. HCV RNA bestemmes av PCR i mononukleære blodceller, kryoprecipitater, cellehjernevev, leverbiopsi og muskelvev. Det er en metodologisk tilnærming som ikke bare bestemmer tilstedeværelsen av et virus i et vev, men også for å evaluere dens replikative aktivitet - reaksjonen på (-) RNA-strengen. Ved overvåking av pasienter med kronisk hepatitt C spiller den kvantitative vurderingen av virusinnholdet i pasientens serum eller blodplasma og bestemmelsen av HCV-genotypen en betydelig rolle. Det mest gunstige svaret på antiviral behandling er observert hos personer med lav viremia og genotype 2 eller 3. Basis for kjente diagnostiske testsystemer for kvantifisering av HCV-innhold er en tilnærming basert på prinsippet om konkurransedyktig forsterkning av HCV RNA og en intern standard. Først av alt, er dette Amplicor HCV monitor kit diagnostiske firmaer fra Roche og NASBA HCV (Organon). Kvantitative testsystemer av firmaet "Chiron" bDNA Quantiplex, som lar deg direkte estimere konsentrasjonen av matrisen i prøven med intensiteten til det registrerte signalet. Disse testsystemene er preget av pålitelighet, bedre reproduserbarhet, men lavere nivåer av følsomhet sammenlignet med amplifikasjonssystemer. Ansatte i selskapene Gen-Probe og Bayer Diagnostics publiserte resultatene av kvantifisering av HCV RNA ved hjelp av TMA (transkripsjonsmidlet amplifisering) med en meget lav følsomhetsgrense på 50 kopier / ml. De fleste innenlandske laboratorier bruker begrensende fortynningsmetode for å estimere konsentrasjonen av HCV RNA. Den er basert på modning av den analyserte matrisen for å forsvinne konsentrasjoner, og beregningen av initialkonsentrasjonen basert på amplifikasjonen resulterer i sammenligning med kalibreringskurven. Dessverre er denne metoden ikke nøyaktig nok, siden den ikke tar hensyn til muligheten for å undertrykke amplifikasjonsreaksjonen i et reagensrør med en prøveprøve. Ikke desto mindre er metoden ganske enkel i utførelse og brukes fortsatt i en rekke laboratorier for "intern bruk" (i huset). Et vesentlig trekk ved egenskapen av HCV er dens genetiske heterogenitet, som tilsvarer den spesielt raske nukleariteten av nukleotider. Som et resultat dannes et stort antall forskjellige genotyper og subtyper. Ifølge Simmonds-klassifiseringen er 11 typer utmerkt (genotyper 1-11), som igjen er delt inn i 70 subtyper (for eksempel subtypene 1a, 1c, 1c) av HCV. Spesielt mange subtyper av HCV finnes i Afrika og Sørøst-Asia. Dette bekrefter indirekte eksistensen av HCV i disse regionene i flere århundrer. De antar at HCV dukket opp senere i Europa og Nord-Amerika, noe som tilsvarer et betydelig mindre antall subtyper. For klinisk praksis er det nok å skille mellom 5 subtyper av HCV: 1a, 1b, 2a, 2b, 3a. Etablerte geografiske forskjeller i fordelingen av ulike genotyper. Således er i Japan, i Taiwan, delvis i Kina, genotyper 1b, 2a, 2b registrert overveiende. Type 1b kalles selv japansk. I USA, 1a - den "amerikanske" genotypen hersker. I europeiske land hersker genotypen HCV 1a, i Sør-Europa øker andelen av genotype 1b markant. På territoriet til Russland, er den overvektige genotypen 1b, som utgjør 80% av viruspopulasjonen, deretter med avtagende frekvens - 3a, 1a, 2a. Den vanlige metodologiske tilnærmingen for å skrive HCV er å detektere karakteristiske genetiske endringer (mutasjoner) i de konservative områdene av virusgenomet - 5 'utranslaterte, Cor, NS5A-områder. HCV skrive er forsterkningen av konserverte regioner av det virale genom og analyse av spesifikke nukleotidsekvenser metoder: direkte sekvensering av de amplifiserte fragmenter etterfulgt av PCR med typespesifikke primere RFLP (analyse av de amplifiserte fragmenter med et restriksjonsenzym) revers hybridisering med typespesifikke sonder (LIPA) SSCP (analyse konformasjonell polymorfi enkelt-trådede fragmenter DNA) For å etablere HCV-genotypen er et kommersielt InnoLiPA HCV testsystem ("Innogenetics") opprettet, i utgangspunktet Hvilket er basert på prinsippet om revers hybridisering med typespesifikke prober (figur 8). 1-1a genotype 2-1c genotype 3-2a genotype 4-1c + 3a genotype 5-2c genotype 6-1a + 2a genotype 7- negativ kontroll av amplifikasjon Pic. 8. Etablering av genotypen til hepatitt C-virus ved anvendelse av test-system "InnoLiPA HCV" Etter noen store sentra utføre diagnostiske prosedyrer på det opprinnelige HCV-typing ved hjelp av PCR-type-spesifikke primere, DNA-fragmenter restrictase analyse (RFLP), enkelt-trådet konformasjonell analyse eller DNA-fragmenter (SSCP ). I det kliniske og diagnostiske laboratoriet for NPF Litekh bestemmes således genotypen av et virus av PCR-SSCP (figur 9) eller allel-spesifikk amplifisering med de tilsvarende primere. Figur 9. Genotyping av HCV RNA ved SSCP analyse: 1-5 genotype 1 til 6-1a7-2a8-3a. Det har blitt fastslått at HCV-befolkningen ikke er jevn i hver pasient. HCV sirkulerer i menneskekroppen som en heterogen blanding av nært beslægtede mutantstammer som tilhører samme virusgenotype, men har genetiske forskjeller i de variable regioner i virusgenomet. Genetisk forskjellige varianter av HCV som sirkulerer i kroppen til en vert, kalt "kvasi-arter". Eksepsjonell ustabilitet er preget av E2 / NS1-regionen, som bare inneholder 80 nukleotider og kalles hypervariabel region (HVR1). Det antas at det er antistoffer mot proteiner kodet av E2 / NS1-genomet som har nøytraliserende egenskaper. Den eksepsjonelle ustabiliteten til HVR1-regionen fører til det faktum at viruset klarer å endre sin antigeniske struktur, og derfor er immunokompetente celler ikke i stand til å gjenkjenne kontinuerlig oppdaterte antigener. Tilstedeværelsen av "kvasi-arter" er forbundet med fenomenet av rømningen av viruset fra immunresponsen, den ineffektive fjerning av HCV, og som et resultat dets langsiktige utholdenhet i menneskekroppen og en høy prosentandel av kroniske infeksjoner. Vurdering av heterogenitet av en individuell HCV-populasjon utføres vanligvis på grunnlag av registrering av antall genetiske varianter av det HVR1-virale genomet ved bruk av heteroduplexanalyse eller SSCP. Ifølge noen utenlandske forskere forårsaker det høye nivået av heterogenitet av den enkelte HCV-befolkningen i HVR-locuset et mer alvorlig forløb av HCG C med et bølge-lignende mønster av fluktuasjoner i nivået av vevstransaminaser og toleranse mot antiviral terapi. Egen forskning, gjennomført på grunnlag av Research Institute of fysisk-kjemiske Medicine viste at registrering av genetiske endringer HCV befolkningen ved akutt hepatitt C har ingen prognostisk betydning, som i noen tilfeller, kronisk hepatitt C. Derfor er det nødvendig å vurdere genetisk heterogenitet som en adaptiv respons av viruset bor i endringsbetingelser for vertsorganismen, som påvist av forskjeller i HCV-subpopulasjoner av hepatocytter, mononukleære celler og humant serum. I tillegg kan de observerte i dynamikken i den genetiske variabiliteten av den individuelle populationen av HCV, sammen med endringer i konsentrasjonen av viruset i pasientens serum, tjene som en indirekte markør av aktiviteten til den replikative prosessen som forekommer i leverceller. Laboratoriediagnostisering av hepatitt C utvikler seg underveis for å skape nye, mer avanserte testsystemer. Ortho Clinic Diagnostic har lansert et nytt immunanalysesett for å bestemme kjerneantigenet i blodet. Det første trinnet er frigjøring av antigener fra cellulære strukturer ved lysering av serum, den andre er fangst av antigener ved bruk av spesifikke monoklonale antistoffer. Denne testen er spesielt nyttig for å oppdage tidlig stadium av HCV-infeksjon, når virussspesifikke antistoffer ennå ikke har oppstått. Chiron og Gen-Probe tilbyr en ny forsterkningstest - NAT-analysen - for å oppdage både HCV og HIV RNA, som kan fange enkeltkopier av viruset i materialet som analyseres. Som konklusjon er det nødvendig å nevne behovet for en omfattende undersøkelse av pasienten med involvering av de siste fremskrittene innen medisinsk og biologisk vitenskap for riktig diagnose av viral hepatitt og utnevnelse av adekvat terapi til pasienten.


Relaterte Artikler Hepatitt