Hva oppdager RNA av hepatitt C-virus ikke

Share Tweet Pin it

Studien av RNA i hepatitt C-viruset er den viktigste prosedyren, som gjør det mulig å fastsette varighet og metoder for behandling av pasienter med stor nøyaktighet. Diagnosen av sykdommen består av flere forskjellige blodprøver, for eksempel:

  • hepatitt C markører (anti-HCV);
  • bestemmelse av hepatitt C-virus RNA (HCV RNA).

Den første studien er utført ved første mistanke om hepatitt. Det andre alternativet er den mest signifikante i behandlingen av HCV RNA, så betrakt det mer detaljert.

Hva er viral hepatitt C?

Viral hepatitt C, eller HCV, er en smittsom sykdom som påvirker leveren. Infeksjon med viruset skjer gjennom blodet. Du kan bli smittet ved å gjøre blodtransfusjon når regler for sterilisering av medisinske instrumenter ikke følges. Oftere er det tilfeller når sykdommen oppnås seksuelt eller fra en gravid mor til fosteret. Hepatitt C kan være av 2 typer.

Kronisk hepatitt C er den farligste. Det er en form for sykdom som kan vare i livet. Det fører til alvorlige problemer i leverfunksjonen, som skrumplever eller kreft. I 70-90% av infiserte mennesker blir sykdommen kronisk.

Den viktigste faren for hepatitt C er at den fortsetter skjult, uten icteric tegn. Samtidig klager de oftest på feber, kvalme og oppkast, fysisk svakhet, økt tretthet, tap av matlyst og vekt. På samme tid, på grunn av en liten herding av leverenvevet, opptrer den ondartede degenerasjonen ganske ofte. Av denne grunn blir hepatitt C ofte referert til som en "tidsbombe" eller "kjærlig morder".

En annen funksjon av sykdommen er den svært sakte utviklingen, beregnet i dusinvis av år.

Som regel føler de smittede ikke noen symptomer og er ikke klar over sin sanne tilstand. Ofte kan en sykdom kun oppdages ved å kontakte en lege på et annet emne.

På risiko er:

  • barn som fikk hepatitt C-viruset fra sine mødre;
  • narkomane;
  • folk som gjennomsyret deler av kroppen eller tatoverte med ikke-sterile instrumenter;
  • mottar donorblod eller organer (fram til 1992, da hemodialyse ikke ble utført);
  • folk smittet med hiv;
  • medisinsk personale i kontakt med infiserte pasienter.

Bestemmelse av hepatitt C RNA

Definisjonen av hepatitt C-virus-RNA, også kalt hepatitt C-PCR, er en studie av biologisk materiale (blod) som kan brukes til å bestemme direkte tilstedeværelse av hepatittvirusgenomater i kroppen (et enkelt virus er et enkelt RNA).

Hovedprøven er PCR, eller polymerasekjedereaksjonsmetoden.

Det finnes to typer blodprøver for HCV RNA:

Kvalitetstest

Gjennomføring av en kvalitativ analyse gjør det mulig å avgjøre om viruset er i blodet. Alle pasienter der C-hepatittantistoffer er funnet, må bestå denne testen. Ifølge resultatene kan du få 2 svar: "tilstede" eller "fravær" -virus. Ved et positivt testresultat (detektert) kan man dømme den aktive reproduksjonen av et virus som infiserer friske celler i leveren.

Testen utført på PCR av høy kvalitet er innstilt til en bestemt følsomhet, fra 10 til 500 IE / ml. Hvis hepatittviruset oppdages i blodet med et spesifikt innhold på mindre enn 10 IE / ml, kan deteksjon av viruset bli umulig. Et svært lavt spesifikt virusinnhold observeres hos pasienter som har antiviral terapi blitt foreskrevet. Derfor er det viktig at følsomheten til det medisinske systemet er høyt for å diagnostisere og sette et kvalitativt resultat i polymerasekjedereaksjonen.

Ofte utføres polymerasekjedereaksjonen av C-hepatitt umiddelbart etter å finne de tilsvarende antistoffer. Etterfølgende tester, under gjennomføringen av antiviral terapi, utføres på 4., 12. og 24. uke. Og en annen analyse etter avslutning av HTP er gjort etter 24 uker. Så - en gang i året.

Kvantitativ test

Kvantitativ analyse av PCR RNA, som noen ganger kalles viral belastning, bestemmer konsentrasjonen (spesifikt innhold) av viruset i blodet. Med andre ord, viral belastning er definert som en viss mengde viralt RNA, som kan være i en bestemt mengde blod (det er vanlig å bruke 1 ml, lik 1 cm i en terning). Enhetene for testresultater er internasjonale (standard) enheter dividert med en milliliter (IE / ml). Virusets innhold forekommer noen ganger annerledes, det avhenger av laboratoriene der forskningen utføres. For hepatitt C bruker kvantitativ bestemmelse noen ganger verdier som kopier / ml.

Du må forstå at det ikke er noen spesifikk avhengighet i alvorlighetsgraden av C-hepatitt på konsentrasjonen av denne stammen i blodet.

Sjekk "viral load" lar deg bestemme graden av smittsomhet av sykdommen. Dermed øker risikoen for å infisere en annen person med et virus med en økning i konsentrasjonen av hepatitt i blodet. I tillegg reduserer det høye innholdet av viruset effekten av behandlingen. Derfor er lav viral belastning en svært gunstig faktor for vellykket behandling.

I tillegg har hepatitt C-testen og dens bestemmelse ved PCR en stor rolle i anvendelsen av terapi for sykdommen og bestemmer suksessen av behandlingen. Basert på testresultatene er det planlagt et rehabiliteringskurs. For eksempel, hvis den spesifikke konsentrasjonen av hepatittviruset er for sakte, er antiviral terapi forlenget, og vice versa.

I moderne medisin antas det at belastningen på mer enn 800000 ME / ml er høy. En belastning på over 10 000 000 ME / ml anses kritisk. Men eksperter fra forskjellige land har fortsatt ikke den samme oppfatningen om grensene for virusbelastningen.

Frekvensen av den kvantitative testen

I generelle tilfeller utføres en kvantitativ analyse av hepatitt før antiviral terapi og 3 måneder etter avslutning av medisinske prosedyrer for å bestemme kvaliteten på den utførte behandlingen.

Som et resultat vil en kvantitativ test bli vurdert som en kvantitativ vurdering av resultatene for prøven spesifisert ovenfor. Som et resultat vil dommen "under det målte området" eller "ikke oppdaget i blodet" bli utstedt.

Sensitivitetsparameteren til en kvalitativ test er vanligvis lavere enn sensitiviteten til en kvantitativ analyse. Den "Manglende" transkripsjonen viser at begge typer analyser ikke fant virus-RNA. Når testindeksen var "under det målte området", fant en kvantitativ type analyse sannsynligvis ikke hepatitt-RNA, selv om dette bekrefter tilstedeværelsen av et virus med et svært lite spesifikt innhold.

Hepatitt C og dens genotyper

Hepatitt C-virus RNA-genotyping diagnostiserer tilstedeværelsen av forskjellige genetiske typer hepatitt C. Mer enn 10 typer av det virale genomet er kjent for vitenskap, men for medisinsk praksis er det tilstrekkelig å utelukke flere genotyper som har størst andel i regionen. Å bestemme den genetiske typen spiller en nøkkelrolle i valg av behandlingstidspunktet, noe som er svært nødvendig dersom du tar hensyn til det store antallet bivirkninger av medisiner for hepatitt.

Metoder for behandling av viral hepatitt C

Den eneste effektive måten å kurere hepatittviruset, er som regel en kombinasjon av 2 medisiner: interferon-alfa sammen med ribavirin. Individuelt er disse stoffene ikke like effektive. Den anbefalte dosen av legemidler og tidspunktet for bruk bør kun foreskrives av lege og individuelt for hver pasient. Behandling med disse legemidlene kan ta fra 6 til 12 måneder.

I dag ikke oppfunnet narkotika som garanterer et hundre prosent utvinning fra viruset. Men med riktig behandling kan helbredelse av pasienter nå opptil 90% av antall tilfeller.

Kvalitativ analyse av PCR for hepatitt C

Hepatitt er en alvorlig sykdom som har mange årsaker. Grunnlaget for utviklingen er direkte eller indirekte skade på leveren. Med tanke på dens betydning for hele organismen, kan man bare gjette hvor vanskelig patologien er. I denne artikkelen vil vi nærmere undersøke funksjonene i kurset og laboratoriediagnosen av hepatitt C.

Årsaken til sykdommen er et virusmiddel som refererer til RNA-holdige patogener. Den har en særegen egenskap - evnen til å mutere, det vil si å forandre strukturen. På grunn av dette unngår infeksjonen fra angrepet av immunsystemet og fører i de fleste tilfeller til kronisk betennelse i leveren.

Gitt eksistensen av forskjellige undertyper av viruset, bør valget av medisiner være basert på resultatene av genotyping. Til tross for en lang studie av sykdommen og strukturen av HCV, har det ennå ikke vært mulig å utvikle en spesifikk vaksine for sykdommen.

Vanskelighetene med tidlig diagnose ligger i det asymptomatiske løpet av hepatitt, noe som fører til at en person besøker en lege på cirrhosisstadiet. For å oppdage sykdommen i tide, er det nødvendig med vanlige medisinske undersøkelser. Bare ved laboratorietesting av blod er det mulig å oppdage HCV og forhindre forurensning av andre. Faktum er at transportøren av infeksjonen i lang tid ikke kan gjette om patologien og fortsette å overføre viruset til friske mennesker.

Fremgangsmåter for overføring

I de fleste tilfeller sprer viruset gjennom blodet, da det inneholder den høyeste konsentrasjonen av patogene stoffer. Dermed overføres infeksjonen:

  • med hemodialyse;
  • med en infisert nål;
  • i ferd med å kjempe, når huden er skadet, og blodkontakt oppstår;
  • med blodtransfusjon (blodtransfusjon).

Sannsynligheten for infeksjon under intimitet er ubetydelig, da sæd og vaginal utslipp inneholder en liten mengde patogener. Risikoen for infeksjon økes betydelig i strid med integriteten til slimhinnen i kjønnsorganene. Dette observeres med aggressiv og analsex.

Når det gjelder vertikal modus for overføring, utføres den i arbeidsprosessen. I fosterets svangerskapstid kan patogen ikke trenge gjennom moderkaken til embryoet. Ved naturlig fødsel blir det patogene stoffet overført til barnet når huden er skadet, når kontakt med moderens blod blir observert.

Etter patogenes inntrengning i en sunn organisme begynner syntesen av antistoffer, som er beskyttelse mot infeksjon og tilhører immunstrukturer. De er funnet i den første studien av en person som bruker ELISA.

En polymerasekjedereaksjon utføres for å bekrefte pasientens diagnose. Det er en analyse av det genetiske materialet til et patogent middel og bestemmelsen av viral belastning.

Laboratoriediagnose av hepatitt C

Laboratoriediagnose starter med enzymimmunoassay. Hovedoppgaven er å oppdage antistoffer produsert mot patogenet. Dens effektivitet er nesten 95%. Takket være denne undersøkelsen er det mulig å identifisere virusbæreren i det prekliniske stadiet og sende det til videre undersøkelse.

En kvalitativ analyse av ELISA indikerer tilstedeværelse eller fravær av immunglobuliner i pasientens blod. Resultatet kan være "positivt" eller "negativt". Etter å ha mottatt det første svaret, blir personen sendt til neste undersøkelse - PCR. Prisen avhenger av kvaliteten på reagensene og laboratoriet. Kostnaden for polymerasekjedereaksjonen kan nå 4000 rubler.

PCR-funksjoner

Ved hjelp av en polymerasekjedereaksjon, tillater selv en liten mengde biologisk materiale oss å estimere virusbelastningen i blodet, det vil si å beregne konsentrasjonen av patogener i en milliliter væske.

Med forekomsten av PCR har diagnosen hepatitt blitt mye lettere. Analysen gjør det mulig å identifisere HCV RNA, for å etablere stadium av den smittsomme prosessen og infektiøsiteten av virusbæreren.

Det finnes flere typer genetisk diagnose:

  1. Kvalitativ analyse av PCR for hepatitt C - bekrefter tilstedeværelse eller fravær av HCV i emnetes blod:
  2. kvantitativ, der du kan beregne konsentrasjonen av virus og etablere scenen av sykdommen. Resultatet er gitt i IE / ml eller kopier / ml (avhengig av laboratoriet);
  3. genotyping - nødvendig for å bestemme genotypen av HCV. Dette kreves for det nøyaktige utvalg av stoffer som vil være mest effektive i dette tilfellet. Analyse indikerer indirekte alvorlighetsgraden av den patologiske prosessen i leveren. Således, med den tredje genotypen av patogenet, observeres steatosis oftest, grunnlaget for dette er akkumulering av fett i hepatocytter (dets celler). I tillegg påvirker typen av virus utfallet og varigheten av terapeutisk kurs.

Kvalitativ analyse av PCR for hepatitt C

Først og fremst blir biologisk materiale undersøkt i laboratoriet for tilstedeværelse av HCV RNA. Det er viktig å huske at en kvalitativ analyse av hepatitt C har et visst følsomhetsnivå, og derfor kan det ikke alltid gi riktig svar. I dette tilfellet anbefales det å gjennomføre laboratoriediagnostikk ved hjelp av andre reagenser.

For å oppnå pålitelige resultater, bør testsystemer med følsomhet på minst 50 IE / ml brukes.

Det diagnostiske resultatet kan enten være "positivt" eller "negativt". Hvis patogenet ikke er funnet i blodet, er studien fullført. Hvis det oppdages et patogent middel i en prøve, kvantifiseres en viral belastning.

En falsk-negativ respons oppnås når en teknologisk prosess brytes, for eksempel, aktive komponenter som undertrykker byggingen av kopier av patogenet, kommer inn i mediet. Dermed er det ikke mulig å vise et ekte blodbilde, og derfor er ikke en persons infeksjon diagnostisert.

Et falskt positivt resultat kan oppnås hvis røret for innsamling av biologisk materiale, samt miljøet for studien, var forurenset. I tillegg er slik analyserespons mulig med blandede infeksjoner, når leveren er påvirket av flere virus, for eksempel hepatitt C og D.

Indikasjoner for kvalitativ forskning

Legen kan foreskrive en pasient en kvalitativ studie om identifisering av RNA i hepatitt C-viruset:

  • ved mottak av et positivt eller tvilsomt enzymimmunoassayrespons;
  • for bekreftelse av diagnosen;
  • bestemme viral belastning;
  • sette scenen av sykdommen;
  • diagnose av blandet infeksjon. Hepatitt C infiserer ofte leveren samtidig med "D" -viruset;
  • Bestemmelse av terapeutisk taktikk under hensyntagen til kausjonsmiddelets genotype;
  • vurdere dynamikken i endringer under behandling med antivirale medisiner.

Fordelene ved polymerasekjedereaksjonen inkluderer:

  1. høy følsomhet av teknikken, som gjør det mulig å fastslå faktumet av infeksjon i det prekliniske stadium;
  2. identifisering av patogenets genetiske materiale, og ikke antistoffer mot det;
  3. muligheten for å etablere en subtype av et patogent middel;
  4. høy hastighet på diagnostikk, da det ikke krever såing av materialet på næringsmediet, og det er nok å bruke spesifikke testsystemer. En person mottar resultatet etter 5 timer;
  5. allsidighet. Analysen tillater å identifisere ethvert genetisk materiale (RNA, DNA). På grunn av dette kan legen bekrefte hepatitt C og andre typer sykdommen (B);
  6. evnen til å oppdage latent infeksjon.

Kvantitativ forskning

I studien av blod ved hjelp av polymerasekjeden kan reaksjonen beregne antall patogener i et fast volum biologisk materiale. Indikatoren er presentert i IE / ml. Gjennom analyse er det mulig å bestemme graden av smitte av pasienten, bestemme stadium av den smittefarlige prosessen, og også vurdere effektiviteten av medisinering.

På grunnlag av PCR bestemmer spesialisten hvilke doser medikamenter som kan blokkere reproduksjon av patogener. I tillegg bestemmes varigheten av antiviral behandling og prognose for livet. Det er viktig å huske at testsystemene har høy følsomhet, slik at metoden gjør det mulig å bekrefte infeksjon av en person i det prekliniske stadiet.

genotyping

Gitt patogenes evne til å mutere, er genotypen nødvendig for å bestemme behandlingens taktikk og valg av antivirale legemidler. For eksempel varer behandling av hepatitt B HCV 1 48 uker, med en positiv utvikling observert i bare 60% av tilfellene. Genotyper 2 og 3 har en mer gunstig prognose. Antivirale legemidler er foreskrevet i 8 måneder, og deres effektivitet når 85%.

Ifølge statistikk er HCV 1, 2 og 3 i de fleste tilfeller registrert i Russland.

Når deklarerer en laboratorietest, kan dette svaret angis - "ikke skrevet". Dette betyr at et virus sirkulerer i pasientens sirkulasjonssystem og ikke kan gjenkjennes av testsystemet. Resultatet av analysen i dette tilfellet indikerer at patogenet ikke er typisk for et gitt geografisk område.

Hvordan får du pålitelige resultater?

For at en kvalitativ studie av PCR for å oppdage RNA av det fremkallende middel av hepatitt C viste de riktige resultatene, er det nødvendig å observere kravene til å forberede laboratoriediagnostikk:

  1. blodprøvetaking utføres på tom mage, og det "sultne" gapet bør ikke være kortere enn 8 timer;
  2. To dager før studien anbefales det å slutte å drikke alkoholholdige drikkevarer og forlate krydret, fett og røkt mat;
  3. Avbryt introduksjonen av legemidler som reduserer blodproppene, for eksempel heparin. Hvis disse medisinene er foreskrevet av helsehensyn, må du varsle legen. I tillegg bør spesialisten være oppmerksom på inntak av andre legemidler som kan påvirke resultatet av laboratorieforskning;
  4. På tærskelen til samlingen av biologisk materiale, bør ikke fysioterapeutiske prosedyrer utføres og ikke utsettes for alvorlig fysisk anstrengelse.

Resultatene av analysen kan påvirkes ikke bare av den personen som donerer blod, men også av andre faktorer, nemlig:

  • dårlig kvalitet blod prøvetaking;
  • manglende overholdelse av anbefalinger om transport av biologisk materiale
  • Utilstrekkelig opplæring av laboratoriearbeidere;
  • manglende overholdelse av forskningsteknikken;
  • innføring av antikoagulantia (heparin) på kvelden før blodprøvetaking. Denne gruppen medikamenter reduserer koagulering, og derved reduserer arbeidet med reagenser.

I ulike laboratorier kan det diagnostiske svaret avvike noe, men disse feilene påvirker ikke det endelige resultatet av studien.

Spesiell oppmerksomhet er lagt til hvilke typer testsystemer som brukes i laboratoriet. Ofte er det gitt fortrinnsvis reagenser med høy følsomhet. Dette er viktig for pasienter med lav viral belastning, da det er vanskelig å oppdage.

Hvor ofte utføres en laboratorietest?

Primær polymerasekjedereaksjon utføres hos mennesker som har blitt påvist ved immunoassay-antistoffer mot patogenet av hepatitt. I dette tilfellet er det tildelt å bekrefte det faktum at infeksjon av en person og etablere scenen av sykdommen. I tillegg tillater analysen å bestemme virus subtypen, noe som er spesielt viktig for valg av medisiner.

Neste periode for obligatorisk laboratorietesting er 3 måneder fra starten av antiviral terapi. Diagnostikk gjør det mulig å evaluere effektiviteten av medisiner, justere dosen eller erstatte dem.

I tillegg til grunnleggende tester kan PCR i tillegg utføres ved 4 og 24 uker fra starten av behandlingen. Positiv prognose av sykdommen er bekreftet av en reduksjon i viral belastning etter tre måneders behandling. For eksempel bør den reduseres fra 1 million IE / ml til flere hundre tusen.

Hvis konsentrasjonen av patogene stoffer i blodet forblir på samme nivå eller øker noe, indikerer dette ineffektiviteten av antivirale legemidler og krever erstatning. Ved bruk av PCR ved slutten av behandlingen, er det mulig å bekrefte pasientens utvinning.

For å korrekt tolke resultatene av laboratoriediagnostikk, er det nødvendig med konsultasjon av en hepatolog eller smittsom sykdom. Gitt den høye frekvensen av falske responser i ELISA, brukes analysen utelukkende til primær screening. For en grundigere undersøkelse av den anvendte polymerasekjedereaksjonen.

Hvordan gjenopprette fra hepatitt C med 97% sjanse?

I dag er moderne medisiner av den nye generasjonen Sofosbuvir og Daclatasvir sannsynlig å helbrede hepatitt C for 97-100%. Du kan få de nyeste medisinene i Russland fra den offisielle representanten for den indiske farmasøytiske giganten Zydus Heptiza. Bestilte stoffer vil bli levert med bud innen 4 dager, betaling ved mottak. Få en gratis konsultasjon om bruk av moderne rusmidler, samt lære om hvordan man skal anskaffe, kan du på den offisielle nettsiden til leverandøren Zydus i Russland.

Rna ikke oppdaget hva det betyr

"Identifisering av gener av hepatitt C-viruset (HVC) i pasientens blod er den andre fasen av laboratoriediagnosen av denne smittsomme patologien. For å oppdage et patogen som ikke har en cellemembran og følgelig overflateantigener, anvendes fremgangsmåten for polymerasekjedereaksjon. Ved hjelp av denne metoden er molekylet direkte bestemt, der all dens genetiske informasjon er kodet - RNA.

RNA - Ribonukleinsyre, sammen med DNA, er en del av cellene i alle levende organismer. Hepatitt C-viruset inneholder et RNA-molekyl og har evnen til å mutere det.

En HVC-genomprøve er vanligvis foreskrevet etter at en generell, biokjemisk blodprøve er utført og en positiv respons på antistoffer (anti-HVC) er oppnådd.

Hva betyr dette?

Studien av antistoffer mot HVC er en screening, det vil si det kan brukes til å undersøke store populasjoner av mennesker (leger, gravide, sykehuspasienter, givere, injeksjonsbrukere, HIV-smittet). Et negativt resultat av laboratorieanalyse av anti-HVC indikerer at ingen immunrespons på viruset ble oppdaget i pasientens blod. Et negativt resultat kan oppnås i slike tilfeller:

Hvis en person aldri har blitt smittet med hepatitt C.

Hvis følsomheten til laboratorietestsystemet var lavere enn konsentrasjonen av anti-HVC.

Hvis infeksjonen skjedde mindre enn 2 måneder siden, og anti-HVC i blodet ikke er nok til å bestemme. Når en falsk negativ respons på grunn av menneskelige faktorer.

Hvis resultatet er at antistoffene til HVC ble funnet i pasienten, betyr dette at hepatitt C-viruset var i pasientens kropp på tidspunktet for studien eller var i blodet for en tid siden. Med et positivt resultat på anti-HVC er det behov for ytterligere laboratorieundersøkelser som vil påvise det genetiske materialet til selve patogenet, bestemme konsentrasjonen av dets gener (viral load, viremia) og etablere genotypen.

Analyse av Hepatitt C Virus RNA

HVC-genomet under laboratorieforhold kan påvises ved å bruke flere studier:

forgrenet DNA (p-DNA);

transkripsjonal amplifikasjon (TMA);

polymerasekjedereaksjon (PCR).

P-DNA-metoden er en billig og enkel måte å oppdage virusgenomet hos et stort antall undersøkte personer. Dens viktigste ulempe er lav følsomhet: det viser kun HVC når konsentrasjonen overstiger 500 IE / ml.

Metoden for transkripsjonal amplifikasjon detekterer virusnukleinsyrer i serum. Analysen har en høy følsomhet (5-10 IE / ml), men den er ennå ikke tilstrekkelig innarbeidet i allestedsnærværende laboratoriepraksis.

PCR-metoden i Russland er den vanligste og tilgjengelige laboratorieundersøkelsen med høy følsomhet (fra 50-60 IE / ml).

PCR-studien utføres i et hvilket som helst klinisk laboratorium som har riktig akkreditering. En svært viktig nyanse av denne diagnostiske metoden, som påvirker resultatet av analysen, er følsomheten til testsystemet som brukes i laboratoriet. For eksempel tillater diagnostisk følsomhet på 60 IE / ml, som i Invitro Laboratories, deteksjon av viralt RNA 3 måneder etter infeksjon. Ved lav følsomhet i testsystemet, kan patogenene ikke bli detektert selv 4 måneder etter infeksjon.

Hepatitt C-virus RNA: PCR-metode

PCR-metoden har mange fordeler i forhold til andre laboratorietester for påvisning av HVC-gener:

høy følsomhet. Metoden tillater å bestemme patogenets genetiske materiale selv med minimumskonsentrasjonen i prøven;

stor spesifisitet. Identifiserer gener av et virus av en bestemt genotype blant en rekke DNA og RNA av andre patogener, som tillater genotyping av patogenet;

fartshastighet. Fraværet av en lang prosess med dyrking av patogenet forkorter tiden for å oppnå resultatet opptil flere timer; universality of analysis.

Den universelle forskningsmetoden muliggjør samtidig bruk av en human blodprøve for å detektere det genetiske materialet til forskjellige patogener. Disse fordelene gjør det mulig å vurdere PCR som "gullstandard" for laboratoriediagnostisering av viral hepatitt C sammen med en enzymimmunanalyse for anti-HVC.

PCR er en studie som brukes til å bestemme HVC-gener i et individs blod. Studien består av flere faser:

Prøvetaking av biomaterialet.

Gjentatt økning av konsentrasjonen av RNA-kopier i den utvalgte prøve.

Påvisning av genetisk materiale ved hjelp av spesielle testsystemer.

Etter å ha tatt det venøse blod fra pasienten, utføres kunstig initiering av prosessen med multiple replikasjoner (amplifisering, kopiering) av HVC-gener.

For å gjøre dette må du på en bestemt måte endre temperaturen inne i røret med biomaterialet flere ganger. Når antall kopier av RNA i testrøret når ønsket verdi, utfør deteksjonen av patogenet ved hjelp av spesiell testdiagnostikk.

kvalitativ (oppdager tilstedeværelsen av et virus),

kvantitativ (bestemmer konsentrasjonen av virale gener per volumdel)

genotypisk (etablerer genotypen av patogenet).

Hepatitt C RNA: Kvalitativ analyse

Oppgaven med kvalitets-PCR er å bestemme tilstedeværelsen av HVC i det presenterte biomaterialet. Denne studien utføres vanligvis for screening diagnose av sykdommen eller påvisning av vogn. Tilordne det etter at et anti-HVC er detektert av ELISA.

For å diagnostisere hepatitt C er det tilstrekkelig å oppdage det genetiske materialet HCV kvalitativt, det vil si uten å telle sin konsentrasjon i blodvolumet. Resultatet av høyverdig PCR kan være: "RNA er detektert" eller "RNA er ikke detektert."

Nøyaktigheten av metoden tilsvarer 95%. Samtidig når nøyaktigheten til testdiagnosen seg selv 100%, og 5% er den menneskelige faktoren, som alltid er tilstede i laboratorieundersøkelser. For å unngå en falsk-negativ analyse, særlig hos personer med lav viremi, er en høy følsomhet av det diagnostiske systemet som brukes i studien, nødvendig. Sensibiliteten til testsystemet bør ikke være mindre enn 60 IE / ml.

Hepatitt C RNA: Kvantitativ analyse

Kvantitativ analyse er foreskrevet når du trenger å vite nivået av viremia i menneskekroppen. Indikasjonene for å gjennomføre denne studien er:

positivt resultat av høyverdig PCR, gitt deteksjon av antistoffer mot viruset;

etablere scenen av patologi;

bestemmelse av viral belastning i hepatitt;

valget av kombinasjons antivirale legemidler;

overvåke en virologisk respons på antiviral terapi;

vurdering av sannsynligheten for overgang fra akutt hepatitt C til kronisk.

Resultatet av analysen er uttrykt i IE / ml (internasjonale enheter i 1 ml serum) eller i kopier / ml (antall kopier av virusgener i 1 ml serum). Kvantitativ PCR er ikke normal: HVC-genet i humant blod bør normalt ikke oppdages. Resultatene fra undersøkelsen sammenlignes med referanseverdiene som er fastlagt for en varierende grad av viral belastning.

Dermed er indikatorene (i IE / ml):

under 4 × 10 * 5 betraktes som lav viremia;

fra 4 × 10 * 5 til 8 × 10 * 5 - gjennomsnittlig;

over 8 × 10 * 5 - høy.

Jo flere kopier av virus RNA i blodet, jo mer aggressive sykdommen og jo større er risikoen for overføring av viruset til andre. Men nivået av viral belastning er ikke den eneste indikatoren som påvirker patologiens alvorlighetsgrad og den videre prognosen for pasienten: Genotypen av patogenet er også viktig.

Etablering av en genotype er nødvendig for å tilordne riktig behandlingsregime. Det bestemmer også prognosen for pasientens helse og liv. For eksempel fører virusgenotype 3 ofte til fibrose eller skrumplever i leveren, sammenlignet med pasienter med bærere av genotype 1.

Hepatitt C: analyser og transkripsjon

RNA Diagnosen av hepatitt C kan ikke bare gjøres ved resultatene av kun kvalitativ og / eller kvantitativ analyse av PCR: bestemmelsen av HVC og nivået av viral belastning er ikke nok til å foreskrive tilstrekkelig antiviral terapi. En potensiell pasient bør undersøkes grundig (klinisk, laboratorium, instrumentelt) for å få et objektivt bilde av patologien. Riktig tilordne et sett med undersøkelser for å etablere diagnosen hepatitt C, og så kan legen kun dekode resultatene riktig.

Hepatitt med rna ikke oppdaget

Populære artikler om emnet: Hepatitt med rna ikke oppdaget

Kronisk viral hepatitt er en gruppe smittsomme sykdommer som sprer seg over hele verden i en alarmerende takt.

Historien om studien av viral hepatitt (VG) begynner i 1965, da B. Blumberg, i studien av blodserumet fra den australske aboriginen, oppdaget en antigendannende utfellingslinje i reaksjon med blodserum hos en pasient med hemofili.

Autoimmun hepatitt (AIG) er en kronisk nekrotisk inflammatorisk leversykdom med ukjent etiologi, preget av periportal eller mer omfattende inflammatorisk prosess i leveren, forekomsten av hypergammaglobulinemi og utseendet til en bred.

I Ukraina kan virus hepatitt A med rette bli kalt en barndomsinfeksjon.

Taktikk for behandling av pasienter med hepatitt C-virusinfeksjon. Kliniske retningslinjer for Den europeiske sammenslutningen for studier av leversykdommer (EAIP / EASL) 2015

Taktikk for behandling av pasienter med hepatitt C-virusinfeksjon. Kliniske retningslinjer for Den europeiske sammenslutningen for studier av leversykdommer (EAIP / EASL) 2015

Taktikk for behandling av pasienter med hepatitt C-virusinfeksjon. Kliniske retningslinjer for Den europeiske sammenslutningen for studier av leversykdommer (EAIP / EASL) 2015

Taktikk for behandling av pasienter med hepatitt C-virusinfeksjon. Kliniske retningslinjer for Den europeiske sammenslutningen for studier av leversykdommer (EAIP / EASL) 2015

For tiden har det oppstått en ekstremt alarmerende situasjon i Ukraina angående HIV-infeksjon. I 2005, i vårt land, var den offisielle HIV-infeksjonsraten 29,4 tilfeller per 100.000 befolkning.

Diagnose av hepatitt C-virus

Hepatitt C-virus (HCV) er et RNA-inneholdende virus fra Flaviviridae-familien. Denne infeksjonen er i stand til å multiplisere i blodceller (monocytter, nøytrofiler, B-lymfocytter og makrofager), og påvirker også cellene i leveren selv - hepatocyttene. På grunn av den høye grad av mutasjonsaktivitet, er denne typen hepatitt i stand til å unngå eksponering for det menneskelige immunsystemet.

Det er 11 genotyper og massen av subtyper av et slikt virus, som varierer i graden av leverskade og påvirker varigheten av behandlingen av hepatitt. Et slikt utvalg av hepatitt C krever forskjellige metoder for antiviral terapi. For eksempel må hepatitt 1 og 4 genotyper behandles i 48 uker, og for et behandlingsforløp mot virus av 2. og 3. type, kan det ta bare 24 uker.

Etter at den raske testen for hepatitt C ga et positivt resultat, utføres PCR-analyse for å detektere RNA av viruset i blodprøver.

PCR-diagnostikk

Polymeraskjedereaksjon (PCR) er en eksperimentell teknikk for å detektere virus. En slik analyse av hepatitt C kan signifikant øke konsentrasjonen av noen DNA-fragmenter eller RNA av viruset i de overførte prøver. Dette gjør det mulig å gjenkjenne dem og til og med telle tallet.

Denne hepatitt C-testen utføres i henhold til følgende fremgangsmåte:

  1. En blodprøve (genetisk materiale) som kan inneholde det ønskede hepatittgenet, settes inn i et reagensrør. Spesielle stoffer, primere, er plassert på den, de er korte lengdesegmenter fra det ønskede genet, som kjemisk syntetiseres. DNA eller RNA-polymerase er også tilsatt dette fartøyet, det er i stand til å bygge opp kjeder av nukleinsyre som er helt identiske med originalen. Et utvalg av frie nukleotider, som er spesielle byggematerialer for DNA og RNA, tilsettes sammensetningen, og en av dem inneholder små partikler av radioaktivt fosfor.
  2. Den resulterende blanding oppvarmes opprinnelig til 95 grader, hvilket resulterer i at begge DNA-helixene sammenflettet i normal tilstand blir viklet.
  3. For å fortsette analysen, blir stoffet avkjølt, hvorpå primrene fester til ønsket del av hepatittvirusgenomet, som forhindrer DNA i å dannes i en dobbelt helix. Når blandingen avkjøles, ser polymerasen etter enkle kjeder av nukleotider. Under vedlegget av dette enzymet glir det langs DNA-kjeden (som en blokk langs tauet), og på dobbeltspiralen er det ikke i stand til å "arbeide", for dette formål oppvarmes blandingen.
  4. For å forlenge analysen utføres reheat, noe som igjen fører til separasjon av nukleotidkjedene. Når slike PCR-sykluser utføres i prøven, øker antallet av de ønskede hepatittgenene i en geometrisk andel, og de gjenværende genetiske materialer blir bare dannet (dannet) i et lineært mønster.
  5. For å fullføre studien, rengjøres løsningen fra resterende nukleotidpartikler. De separeres ved elektroforese, med separasjon av parametrene for molekylvekten til DNA-kjedene. Slike tester for hepatitt C ved bruk av PCR lar deg bestemme om de ønskede virusgenene er tilstede i prøven eller ikke.

Fordelen med denne testen er den høye terskelen av PCR-reaksjonen. En slik teknikk for diagnose, ideelt sett, kreves av bare ett virusgenom for hele prøven.

I tillegg er denne PCR helt spesifikk. I hvert av gener er det en unik sekvens av nukleotider som, som et fingeravtrykk, ikke kan gjentas hvor som helst. For denne analysen på hepatitt C, blir primere syntetisert slik at de helt svarer til de unike områdene av genene som er søkt, som ingen annen sekvens har.

Denne teknikken lar deg også analysere for hepatitt C og bestemme dem, og bidra til å etablere den endelige diagnosen.

En slik laboratorieanalyse gir informasjon mer enn bare nærvær eller fravær av RNA av hepatitt C-virus eller en annen type i blodprøver. Ved å bestemme parameteren for radioaktiv stråling, er det mulig å identifisere hvor mye av det ønskede genetiske materialet som opprinnelig var i prøven under studien. Dette lar deg bestemme parameteren for den såkalte virale belastningen - konsentrasjonen av partikler av RNA av hepatitt i et bestemt volum.

Kvalitativ analyse av PCR

Denne analysen tillater å bestemme tilstedeværelsen av hepatitt B-virus i blodprøver. Det bør utføres for alle mennesker som har funnet antistoffer mot hepatitt.

Som et resultat av slik forskning kan det bare være to verdier:

  • "Oppdaget". Et slikt positivt testresultat tolkes som følger: I den analyserte prøven fra biologisk materiale ble det funnet fragmenter av RNA fra hepatittviruset. Det følger av dette at det var det faktum at pasienten var infisert med dette viruset. Dette kan indikere at patogen hepatitt multipliserer i kroppen og smitter nye celler, som ødelegger leveren.
  • "Ikke oppdaget." Dette resultatet sier at i en prøve som ble analysert i dette laboratoriet, ble det ikke påvist noen RNA-fragmenter som er spesifikke for hepatitt C-viruset. Det er også en mulighet for at konsentrasjonen av RNA i patogenviruset i prøven var så liten at testen ikke kunne oppdage det.. I slike tilfeller er det sagt at konsentrasjonsnivået er under sensitivitetstrømen for analysen.

En slik test kan også være falsk positiv eller falsk-negativ på grunn av forurensning av biomaterialet eller tilstedeværelsen i prøver av bestemte stoffer som reagerer med de kjemiske komponenter som er nødvendige for analysen.

Det bør understrekes at i den akutte fasen av hepatitt C kan en kvalitativ studie ved hjelp av PCR-metoden oppdage RNA etter 1-2 uker fra organismens øyeblikk. Dette betyr at sykdommen kan oppdages lenge før utseendet av dets ytre symptomer eller utseendet av antistoffer mot hepatitt i kroppen.

Blodprøvetaking (fra en vene) utføres fortrinnsvis på tom mage.

PCR kvantitativ analyse

Ved hjelp av denne analysen bestemmer du nivået av konsentrasjon av hepatittviruset i pasienten (viral belastning). En slik test må bestås for å estimere mengden av virus-RNA per enhet av et visst volum.

Dekryptere tester for hepatitt C, utført i henhold til denne metoden, kan ha følgende resultater:

  • Kvantitativ indikator (i tall)

Viruskoncentrasjonen (mengden) er gitt i numeriske termer. For dette brukes ulike måleenheter: enten IE / ml (internasjonal enhet per milliliter) eller kopier / ml (antall kopier av virus-RNA per milliliter). I gjennomsnitt tilsvarer 1 IE / ml 4 kopier / ml, da forskjellige testsystemer har forskjellige konverteringsfaktorer for slike enheter.

De lave viralbelastningsverdiene anses å være mindre enn 400.000 IE / ml, og 8.000.000 IE / ml er høy.

En slik kvantitativ vurdering gjør det mulig å bestemme infeksjonsnivået av sykdommen ("smittsomhet") hos pasienten. Jo mer denne indikatoren for analyse, desto større er sannsynligheten for risikoen for overføring av patogenet til andre mennesker (gjennom seksuell kontakt eller vertikalt).

Denne dommen betyr at den kvantitative metoden ikke kunne oppdage hepatitt-RNA, men selve viruset er tilstede i kroppen, bare i svært lave konsentrasjoner. Dette ble bekreftet ved ytterligere kvalitativ analyse av PCR, og ved sitt positive resultat vitner det til forekomsten av hepatitt.

  • Resultat ikke oppdaget

    Denne positive tolkningen av analysen antyder at den kvantitative testen selv i en blodprøve ikke kunne oppdage bestemte RNA-partikler av hepatitt C-viruset.

  • En kvantitativ analyse av PCR utført ved ulike perioder med antiviral terapi (1., 4., 12. og 24. uke) tillater oss å bedømme effektiviteten av behandlingen og foreta de nødvendige endringene.

    Analyse spesifisitet

    Denne testen må bestås for å bestemme de forskjellige genotypene av hepatitt C. For tiden er det 11 genotyper av dette patogenet og mange subtyper. I vårt land er genotypene av hepatitt C av 1., 2. og 3. arten vanlige. I laboratorier kan de identifisere ulike subtyper av disse artene: 1a, 1b, 2a, 2b eller 3, 4, 5, 6 genotyper med ulike modifikasjoner av subtyper. For alle disse hepatittene er spesifisiteten av bestemmelsen 100%.

    Spesifisering av modifikasjonen av genotypen gjør det mulig å velge riktig behandling. Tilstedeværelsen av en bestemt type genotype hos en pasient indikerer ikke at sykdommen er lettere eller mer komplisert, de er bare varianter av hepatittviruset, og ikke mer.

    I de tilfellene når genotypen av viruset ikke kan isoleres i laboratoriet, kan resultatet gis: "Ikke skrevet. Ble undersøkt genotyper: slik-og-slik "(for eksempel 1a, 2c, 3av). Denne dekodningen antyder at i dette laboratoriet var det ingen passende reagenser som kunne bestemme genotypen av hepatittviruset. Studien ble testet for virus, dataene i listen, men deres overensstemmelse med RNA-prøver ble ikke identifisert.

    For å få en endelig diagnose er bare en type analyse utilstrekkelig. Hver av testene kan gi et falskt positivt resultat. For å nøyaktig bestemme type hepatitt og omfanget av skade på denne infeksjonen i kroppen, utfør en omfattende studie. Dette er gjort en leverbiopsi og testing av enzymer: ALT, ASAT, samt alkalisk fosfatase og LDH. En bilirubin-test og protrombinindeksanalyse kan også utføres.

    Bare et sett av slike tester og laboratorietester, med en generell analyse av pasientens tilstand, vil bidra til å bestemme tilstedeværelsen av hepatitt i kroppen, dens form, samt alvorlighetsgraden. Legen kan avgjøre videre behandling og gjøre en mulig prognose for pasienten.


    Relaterte Artikler Hepatitt