Kvalitativ analyse for hepatitt C
Legg igjen en kommentar 7,180
En kvalitativ analyse av polymerasekjedereaksjonen - PCR for hepatitt C bestemmer tilstedeværelsen eller fraværet av HCV i kroppen. I laboratorieforhold studeres strukturen av RNA, som vil inkludere viruset. Ved detektering av viruset C, er det nødvendig å gjennomgå et behandlingsforløp, siden forsømmet tilstand av leveren vil medføre alvorlige konsekvenser. PCR av høy kvalitet utføres også etter utvinning for å bekrefte fraværet av antistoffer. Tilordnet for rutinemessig inspeksjon. Med lav konsentrasjon av kausjonsmiddelet i blodet, kan PCR (kvalitativ) ikke oppdage noe, fordi diagnostikksystemet har sine egne følsomhetsgrenser. I tilfelle av den første fasen av sykdommen eller den milde formen, utføres PCR ultradiagnostikk på ekstremt følsomt utstyr.
Hva er RNA-virus?
Begrepet RNA i hepatitt C-viruset (eller hepatitt C-virus-RNA) er selve leversykdommen. Virus C binder seg til den sunne cellen i kroppen ved å trenge inn i. Over tid, spredt over hele kroppen, er det bare nødvendig å komme inn i blodet. Som et resultat trengs patogenet i leveren, smelter med sine celler og virker hardt. Leverceller (hepatocytter) virker under påvirkning, undergår endringer, og fra dette dør de. Jo lengre viruset C er i leveren, jo større antall celler dør. Over tid utvikler farlige sykdommer som fører til ondartet degenerasjon og død.
Infeksjon av leveren med denne typen virus kan ikke manifestere seg eksternt. I mange år eller flere tiår føler en smittet seg helt sunn, og bare en tilfeldig undersøkelse avslører ofte patologi. Ved donering av blod til hepatitt undersøkes en del av RNA (ribonukleinsyre) kjeden, som er en del av det humane genet (DNA). Resultatene av laboratorietester bør ikke brukes til selvbehandling, fordi dette bare er en indikator. Det nøyaktige bildet og ytterligere diagnose er bedre bestemt av legen.
Når ferdig: indikasjoner på forskning
I bekreftelse på HCV utføres PCR-analyse (polymerasekjedereaksjon). Studier av PCR bidrar til å finne patogenmaterialet i strukturen av RNA og foreskrive en effektiv terapi. Utnevnt i følgende tilfeller:
- påvisning av tegn på betennelse i leveren;
- screening studier for forebygging;
- undersøkelse av personer i kontakt
- diagnose av hepatitt av blandet opprinnelse (bestemmelse av hovedpatogenet);
- bestemme nivået på reproduksjonsaktivitet av viruset i kronisk form;
- levercirrhose;
- for å bestemme effektiviteten av den foreskrevne behandlingen.
Det er en kvalitativ og kvantitativ analyse av PCR. Kvantitativ PCR viser prosentandelen av RNA til virusbærere i blodet, og kvalitativ indikerer viral tilstedeværelse eller fravær. En positiv indikator for kvalitet (tilstedeværelse av hepatitt C RNA) trenger også kvantitativ forskning. Et høyt nivå av konsentrasjon av det forårsakende middelet av hepatitt C er forbundet med risikoen for overføring, det vil si infeksjon av andre. Lavt antall er bedre behandles. Mengden av RNA-virus i blodet er ikke relatert til intensiteten av sykdommen. PCR-analyse gjøres også ved interferonbehandling for å foreskrive varighet og kompleksitet i behandlingsforløpet.
Egenskaper av høy kvalitet PCR analyse for hepatitt C
En kvalitativ analyse med polymerasekjedereaksjonsindeksen er tildelt alle pasienter som har antistoffer mot hepatitt C i blodet. De som har vært syk og gjenopprettet, må ta testen igjen. Det anbefales å bestå testen for hepatitt B, da i en positiv konklusjon, og for hepatitt D. Også kvalitativt analysert reaksjon skal utføres i forbindelse med andre blodprøver. Analyser vil vise et komplett bilde av viral spredning.
Fra testresultatene vil bare en positiv test for hepatitt C være synlig eller negativ, det vil si tilstedeværelse eller fravær av et virus. Hvis utgangen er "detektert", er viruset og fortsetter å være aktivt. Betegnelsen "ikke oppdaget" indikerer fraværet av et virus eller dets lille mengde. Med denne indikatoren bør man huske på at analysens følsomhet for diagnostiske systemer er forskjellig, og at RNA hepatitt C fortsatt kan være i blodet, men ikke manifestert i analysen.
Spesielt sensitiv PCR-metode viser ultra hepatitt C selv i små mengder. En fluorescens hybridiseringsstudie brukes, som er mange ganger høyere enn standard PCR-systemer. Metoden brukes i flere tilfeller:
- mistenkte skjulte former for hepatitt C;
- PCR-diagnostikk bekreftet ikke patogenet, men det er antistoffer;
- i tilfelle gjenoppretting
- å oppdage tidlig infeksjon.
Dekoding analyse
PCR-dekodingen av HCV påvirker den endelige avgjørelsen når man foretar en diagnose, spesielt med ultrametod-metoden. Den største ulempen ved denne studien er streng overholdelse av sterile forhold for prøven og materialene. En liten avvik viser noen ganger unøyaktige analytiske konklusjoner, kompliserer diagnose og etterfølgende behandling. Analyse av PCR for bestemmelse av hepatitt-RNA viser ikke alltid selvtillit et bilde av sykdommen, noen ganger er unøyaktigheter tillatt, og i begge retninger.
Diagnostisering av hepatittvirus, det anbefales å bruke en omfattende undersøkelse.
Norm for indikatorer
Fraværet av JgM antistoffer mot viral hepatitt C i resultatene av studien regnes som normen i analysen av polymerasekjedereaksjonen. Samtidig viser funnene fra den serologiske analysen tilstedeværelsen av antistoffer mot C-viruset, og dette er også innenfor det normale området. En kvalitativ definisjon viser ikke intensiteten av sykdommen, det avslører bare årsaksmedlet til hepatitt C i RNA. Denne analysen gjentas etter behandling for å bekrefte den faktiske utvinningen.
avvik
Hvis JgM antistoffer mot HCV RNA er tilstede, indikerer dette en utviklingsinfeksjon. Sykdommen pågår samtidig akutt eller kronisk, manifestert i forskjellige stadier. Hvis en nedgang i antall antistoffer registreres, vil analysen indikere at resultatene av behandlingen ble oppnådd under utvinning. Det er bare svært sjeldne tilfeller av falske positiver som finnes i diagnosen. De finnes hos kvinner under graviditet og hos personer med andre smittsomme sykdommer.
Bruk av PCR-diagnostikk
Polymeraskjedereaksjon (PCR) i molekylærbiologi er en eksperimentell metode for å oppdage virus. Det lar deg øke konsentrasjonen av bestemte nukleinsyrefragmenter (DNA) i prøver av biologisk materiale, noe som gjør det mulig å bestemme dem (gjenkjenne) og telle.
Analysen utføres som følger. Genetisk materiale (en blodprøve), som potensielt kan inkludere det ønskede genet, blir introdusert i røret. Det er også plassert primere - kjemisk syntetiserte segmenter av en liten lengde av ønsket gen.
DNA- eller RNA-polymerase er også tilsatt til karet, det er i stand til å lineere opp en nukleinsyrekjede som er helt identisk med originalen. Den resulterende sammensetning injiseres og et sett med fire fri nukleotider - et spesielt byggemateriale for RNA eller DNA, hvorav den ene inneholder radioaktive fosforpartikler.
Den resulterende blanding oppvarmes til 95-96 ° C, og derfor er to DNA-spiraler, som normalt er sammenflettet, vevd. Deretter avkjøles legemidlet, hvorpå primene selv fester seg til den ønskede regionen av virusgenomet, og hindrer at RNA (eller DNA) danner en dobbelt helix igjen.
Under kjøleprosessen søker polymerasen etter en fri nukleotidkjede. For funksjonen av dette enzymet er det nødvendig en enkelt kjede av nukleotider. Siden polymerase glir langs DNA-kjeden (som en ring på et tau), er den ikke i stand til å arbeide på en dobbelt helix.
Etter dette utføres en gjentatt varmesyklus som skyldes hvilke kjeder av nukleotider som er separert. Ved hver av disse syklusene av PCR øker mengden i prøven av det ønskede hepatittgenet eksponentielt, og resten av det genetiske materialet blir produsert (vokser) lineært.
Etter rensing av løsningen fra nukleotidrester og separasjon ved elektroforese av DNA-kjeder av molekylvektsparameteren, kan man lett bestemme om det er et ønsket gen i prøven under studie eller ikke.
Fordeler med PCR
Laboratorietesting ved hjelp av PCR tillater enda mer informasjon enn tilstedeværelsen av virus-RNA. Ved å bestemme parameteren for nivået av radioaktiv stråling, er det mulig å identifisere hvor mye genetisk materiale som opprinnelig var inneholdt i prøven under studien. I tilfelle av hepatitt, bestem indikatoren for nivået av viral belastning.
En annen fordel ved denne metoden er den meget høye følsomhetsgrad av CR-reaksjonen. Det er mye høyere enn klassiske metoder for å oppdage virus. Ideelt sett, for å identifisere ønsket gen, for PCR, er bare ett virus i prøven tilstrekkelig.
I tillegg er PCR helt spesifikt. Dens primere er utformet på en slik måte at de stemmer fullt overens med de unike områdene av de ønskede gener som ingen annen sekvens har. Som fingeravtrykk er unike, er det unike nukleotidsekvenser i hvert gen.
Kvalitativ analyse av PCR
Kvalitativ analyse lar deg bare identifisere tilstedeværelsen av et virus i blodet. Denne testen skal utføres for alle pasienter i hvilke antistoffer mot hepatitt C ble funnet i blodet. Det kan resultere i bare én av to verdier: "detektert" eller "ikke oppdaget". I en sunn person skal normen (referanseverdi) "ikke oppdages".
Det er en spesiell tolkning av slike resultater av kvalitativ forskning:
- Resultatet er "oppdaget". Dette betyr at et fragment av RNA som er spesifikt for hepatitt C-viruset ble funnet i den analyserte prøven av biologisk materiale tatt. Det er derfor et faktum at pasienten er infisert med hepatitt C-viruset. Hvis resultatet av høyverdig PCR er "detektert", indikerer dette at viruset multipliserer og på denne tiden smitter det nye leverceller i kroppen.
- Resultatet er "ikke oppdaget." En slik dom indikerer at i den analyserte prøven av biologisk materiale som er oppnådd i dette laboratoriet, ble det ikke funnet noe fragment av RNA som er spesifikt for hepatitt C-viruset. Alternativt var konsentrasjonen av RNA av patogeninfeksjonen i denne prøven under sensitivitetsgrensen for testen.
I den akutte fasen av RNA i hepatitt C-viruset kan slike kvalitative studier ved PCR-metoden detekteres allerede etter 1-2 uker umiddelbart etter kroppsinfeksjon, det vil si lenge før utseendet av antistoffer mot hepatitt selv.
Unøyaktige testresultater fra denne studien kan fås ved å:
- forurenset biomateriale;
- tilstedeværelsen av heparin i pasientens blod;
- Tilstedeværelsen i prøven av kjemiske eller proteinstoffer (inhibitorer) som påvirker de ulike komponentene i PCR.
For å gjennomføre en kvalitativ analyse av PCR, er det ikke nødvendig med spesiell forberedelse av pasienten for studien. Venøst blod brukes som et materiale.
Evaluering av resultater
HPR-test av høy kvalitet har en viss grad av følsomhet, og avhengig av nøyaktigheten av forskningen og nivået på utstyret i laboratoriet kan variere fra 10 til 500 IE / ml.
Dette betyr at hvis viruset i blodprøven er tilstede i en meget lav konsentrasjon (mindre enn terskelverdien av følsomheten til dette laboratoriet), kan resultatet bestemmes som "ikke detektert" hos en pasientpatient. På grunn av dette, når det utføres en kvalitativ analyse av PCR med lavt nivå av viremia (lav viruskonsentrasjon), for eksempel for pasienter som gjennomgår antiviral terapi, er det svært viktig å kjenne følsomhetsgrensen for dette diagnostiske systemet.
Varianter av diagnostiske systemer
For å kontrollere den virologiske responsen, anbefales det å bruke diagnostiske systemer med en følsomhetsgrense på minst 50 IE / ml for antiviral behandling. Disse kriteriene er oppfylt, for eksempel med Cobas Ampicolor HCV-test-analysatorer (nøyaktig til 50 IE / ml), samt RealBest HCV RNA (med følsomhet på 15 IE / ml).
I henhold til WHO-anbefalinger, for å etablere en endelig diagnose av hepatitt C, er det nødvendig å basere seg bare på tre ganger deteksjon av C-virus-RNA i pasientens serumprøver, uten andre varianter av hepatittmarkører.
I tillegg til PCR-metoder, brukes en TMA-analyse (transkripsjonal amplifikasjonsmetode) til å detektere HCV RNA hos pasienter. Den har den beste følsomhetsgrensen (5-10 IE / ml), men i vårt land er en slik testmetode ikke særlig vanlig.
Utvalg av detekterbare virusmodifikasjoner
En slik kvalitativ bestemmelse i serum av tilstedeværelsen av RNA i hepatitt C-viruset gjør det mulig å bestemme flere genotyper av dette viruset. For tiden vet vitenskapen mer enn seks genotyper av dette viruset, så vel som om 10 subtyper av denne sykdommen.
I vårt land er vanlige virus 1, 2, 3 genotyper. Laboratorier kan oppdage følgende genotyper: 1a og 1b, 2a, 2b og 2c, samt 3, 4, 5a og 6, uavhengig av undertyper. For alle virusmodifikasjoner er deteksjonsspecifikiteten 100%.
PCR kvantitativ analyse
Ved hjelp av en kvantitativ PCR-test bestemmes nivået av konsentrasjon av hepatittviruset i blodprøver (virusbelastning). Denne testen for viremia (viruskonsentrasjon) lar deg bestemme antall enheter av et bestemt genetisk materiale (det mest virale RNA) som detekteres i en viss mengde. I dette tilfellet bestemme konsentrasjonen i 1 ml, som tilsvarer 1 cu. cm.
De kvantitative parametrene til analysen er uttrykt i figurer, for dette formål brukes internasjonale enheter (IE) per ml (ml), referert til som IE / ml, som måleenheter. Nå i noen laboratorier kan mengden av virus bestemmes i andre enheter: Antall kopier per ml er angitt som kopier / ml.
- Datoer. For hepatitt C, gjøres en slik kvantitativ analyse av PCR umiddelbart før starten av behandlingen. Deretter 1., 4., 12. og 24. uke. Evaluering på 12. uke er indikativ, det gjør det mulig å bestemme effektiviteten av terapien.
- Forberedelse for analyse. For å utføre en kvantitativ analyse av PCR, er det ikke nødvendig med spesiell forberedelse av pasienten til studien. En halv time før prøvetaking bør ikke røyke. Venøst blod brukes som laboratoriemateriale.
Evaluering av resultater
For ulike laboratorietestsystemer er det forskjellige konverteringskvoter for denne indikatoren i IE / ml. I gjennomsnitt tar de en konverteringsparameter, der 4 kopier / ml = 1 IE / ml. Det vil si at hvis laboratoriet gir resultatet av PCR-analyse 2,4 * 10 6 kopier / ml, så skal denne parameteren deles inn i 4 og vi får 6 * 10 5 IE / ml.
En belastning på 800.000 IE / ml regnes som høy, noe som tilsvarer omtrent 3.000.000 eksemplarer / ml. Lav viremia, ifølge noen forfattere, tilsvarer parametrene for kvantitativ PCR under 400 000 IE / ml.
Som resultat av den kvantitative testen kan de endelige resultatene ikke leveres i form av en digital verdi, men: "under måleområdet" eller "ikke detektert".
- Vurdering: "under måleområdet." Dette antyder at den kvantitative testen ikke kunne oppdage hepatitt C viral RNA, men selve viruset er tilstede i kroppen i svært lave konsentrasjoner. Dette fremgår av en ytterligere kvalitativ test, som bekrefter faktumet av tilstedeværelsen av viruset.
- Vurdering: ikke oppdaget. Dette resultatet indikerer at den kvantitative testen ikke ble funnet i prøven av virus-RNA.
Parameteren for viral belastning bestemmer først og fremst graden av infeksiøsitet av sykdommen, nivået av "infeksjon" av pasienten. Jo høyere pasientens viruskonsentrasjon er, jo større er sannsynligheten for at den overføres til andre mennesker. For eksempel, under samleie med en syke person, eller vertikalt. Denne kvantitative indikatoren bidrar også til å bestemme effekten av behandlingen av pasienten.
Å gjennomføre en kvantitativ analyse av KKP er viktig for antiviral terapi, vurderer suksess og planlegger varighet på kurset. Med en rask respons fra kroppen til behandling og en lav grad av viremi, kan varigheten av behandlingen forkortes.
Hvis den kvantitative PCR-parameteren reduseres sakte, bør antiviral terapi forlenges eller modifiseres. Hvis nivået av viral belastning er lav, er dette en gunstig faktor for terapi, men hvis forhøyet, er metoden for behandling som brukes, ineffektiv og legemidlene eller metoder for deres bruk bør endres.
Diagnose med PCR for hepatitt C
Ikke alle vet hvorfor de bruker PCR-diagnostikkmetoden for hepatitt C. En av de mest utbredte gruppene av sykdommer er smittsomme sykdommer i mage-tarmkanalen. Vanligvis lider mage (sår), tarmene (kolitt, enteritt) og lever (hepatitt).
Blant alle ovennevnte organer påføres leveren den største byrden. I legemet er leverens rolle ekstremt viktig:
- Nesten alle metabolske reaksjoner finner sted i leveren (dette er hvor alle typer vitale komponenter dannes som gjør at kroppen fullt ut kan fungere).
- Leveren er det viktigste avgiftningsorganet. Med hjelpen (spesielt gjennom galle) fjernes mange substrater som kan forårsake forgiftning og føre til alvorlige konsekvenser.
Dessverre overvåker mange mennesker ikke deres helse på grunn av hva leveren begynner å lide. Hepatitt av ulike etiologier (viral, giftig) utvikler seg vanligvis.
Definisjon av hepatitt
Viral hepatitt okkuperer et viktig sted blant leversykdommer. Alvorlighetsgraden av sykdomsforløpet, kompleksiteten av behandlingen, legger dem i første omgang blant patologien til den andre typen av dette organet.
All hepatitt er delt inn i akutt og kronisk. Hepatitt A og B er klassifisert som akutt. Blant kronisk hepatitt C kommer først.
Denne sykdommen er forårsaket av hepatitt C-viruset. En karakteristisk egenskap er at sykdommen kan vare lenge uten noen kliniske manifestasjoner.
Det overføres hovedsakelig gjennom blodet. Med blodstrømmen kommer viruset i leveren, hvor det begynner å formere seg i sine celler. Som et resultat av virionsakkumulering skjer ødeleggelsen av den infiserte hepatocytten. Som svar begynner antistoffer å bli produsert, som begynner å angripe resterne av hepatocytter. På grunn av dette utvikles et basseng mot leverceller over tid, noe som forverrer sykdomsforløpet.
På grunn av det faktum at sykdommen er asymptomatisk eller asymptomatisk, og kliniske tegn bare opptrer med signifikant celleskader, krever denne sykdommen etableringen av diagnostiske metoder for å oppdage dets tilstedeværelse og treffe hensiktsmessige tiltak.
Diagnose av hepatitt C: kvalitative og kvantitative analyser
For tiden, for diagnostisering av hepatitt C ved bruk av metoder som leverbiopsi, immunogram.
De lar deg direkte bestemme tilstedeværelsen av infiserte hepatocytter (en leverbiopsiprofil) eller spesifikke antistoffer mot berørte celler (immunogram). Det er imidlertid en metode som gjør at du på en pålitelig måte kan bestemme tilstedeværelsen av selve viruset. Denne PCR er en polymerasekjedereaksjon.
Essensen av denne metoden ligger i det faktum at produksjonen av RNA-kjeder under visse forhold oppstår. Dette skyldes det faktum at det er fragmenter av en viral partikkel i blodet eller biopsien i spørsmålet. Når man kobler dem med noen molekyler i mediet, oppstår syntese av kjeder som er komplementære til viralt RNA. I deres etterfølgende analyse og sammenligning med den kjente nukleotidsekvensen av hepatitt C-viruset, er det mulig å avgjøre om viruset er til stede i kroppen og om det foreligger en leverskade.
PCR utføres etter deteksjon av spesifikke antistoffer i blodet mot hepatittviruset. Etter testen blir resultatet gjort - RNA er "detektert" eller "ikke oppdaget". Av og til kan han si "ikke nok materiale" - i dette tilfellet er det nødvendig å gjenta analysen for hepatitt C.
Hvis antall virale partikler er mindre enn nødvendig minimumsbeløp, kan vi si at det ikke er hepatitt, og minimal mengde av genetisk materiale kan være "forvirret" på grunn av etterligning av genetisk materiale eller noen nukleotidsekvenser som kan falle sammen med virusets.
- Med PCR kan et negativt resultat observeres når det er virkelige virale partikler i blodet, men de er så små (infeksjon skjedde nylig eller analysen ble foretatt av langvarig og intensiv antiviral terapi) at testsystemet enkelt ikke kunne riktig bestemme konsentrasjonen. RNA - "ikke oppdaget."
- Hvis PCR har et positivt resultat, så er det så mange viruspartikler i blodet at deres antall overskrider den nedre følsomhetsgrensen for testsystemet. I dette tilfellet er det stor risiko for å utvikle en smittsom prosess (eller den er allerede tilstede i et ganske avansert stadium). Vanligvis er en høy mengde virus allerede en indikasjon på behandling og påfølgende levertransplantasjon.
Noen ganger kan en test bli falsk positiv eller falsk negativ.
Et falskt negativt PCR-resultat av hepatitt observeres når noen komponenter er tilstede i reaksjonsmediet som hemmer produksjonen av kopier av viruspartikkelen. På grunn av dette er det ikke mulig å få et sant bilde av blodtilstanden, noe som bidrar til at viruset passerer og sykdomsprogresjonen. Tilstedeværelsen av heparin i blodet kan også påvirke reaksjonen (ved å redusere blodets relative viskositet). Feil tolkning av analysen er mulig, selv om betingelsene for transport og lagring av det undersøkte materialet ikke ble oppfylt.
Falske positive resultater, når hepatitt C er diagnostisert, oppstår PCR oftest når røret eller arbeidsmiljøet er forurenset. I tillegg kan positive resultater observeres i nærvær av andre grupper av hepatittvirus (på grunn av kryssreaksjon).
Kvalitativ analyse av PCR for deteksjon av hepatitt C
Tilstedeværelsen i blodet av et stort antall kryoglobuliner påvirker også oppførselen av PCR direkte. På grunn av dette er det viktig å bestemme konsentrasjonen i blodet før testing for hepatitt C for å oppdage forvrengning av resultatet på forhånd og forhindre det.
Etter disse testene blir det klart om det er virale partikler i blodet. Når du bestemmer dem, anbefales det å starte antiviral behandling umiddelbart for å redusere prosessens progresjon. Til forskjell fra hepatitt B er det ingen komplett kur for hepatitt C; sykdommen går bare inn i latent stadium og begynner å gå sakte. Leverskader er uunngåelig. På siste stadium av prosessen, når leveren ikke lenger kan takle sin funksjon, kan det være nødvendig å transplantere det.
Behandlingen utføres hovedsakelig med to legemidler - interferon og ribavirin.
Bevist deres effektivitet ved å bremse prosessen med nederlag av hepatocytter. Underveis er infusjonsterapi nødvendigvis foreskrevet for å lette arbeidet i leveren.
Alle pasienter som har sett en økning i antall virale partikler i blodet, er nødvendigvis registrert hos en hepatolog. Flere ganger i året, anbefales det å gjennomgå en forebyggende undersøkelse for å bestemme prosessens fremgang og rettidig påvisning av indikasjoner på transplantasjon. I tillegg er det mulig å bruke hepatoprotektorer, selv om doktorgraderne er forskjellige. Noen mener at disse stoffene tillater deg å suspendere prosessen og beskytte de fremdeles upåvirkede hepatocyttene; andre er overbevist om at det ikke er noen mening å ta dem, og intensiv antiviral terapi bør utføres.
Således er hepatitt C tilhørende kategorien sykdommer, som identifiserer noen vanskeligheter. Bedre diagnostiske metoder, samt tidlige forebyggende undersøkelser, vil redusere forekomsten av denne sykdommen. Viktig er forebygging av denne sykdommen. Man bør nøye unngå kontakt med blod, nekte å ta medikamenter, bare da vil denne sykdommen bli utryddet. Det viktigste innen forebygging og behandling er pasientens bevisste holdning til helsen.
PCR ikke oppdaget hepatitt C
PCR-analysen for hepatitt C er en intravenøs blodprøve for å bestemme hepatitt-RNA-viruset deri på genetisk nivå. Analysen fikk navnet sitt basert på forskningsmetoden.
PCR er en polymerasekjedereaksjon, som brukes til å bestemme tilstedeværelsen av hepatitt C i serum. Resultatet kan være positivt og negativt.
Fordelene ved PCR-metoden
Denne diagnostiske metoden har følgende fordeler:
- PCR-metoden gjør det mulig å bestemme følgende resultater:
- tilstedeværelsen av et RNA-virus;
- grad av stråling;
- original genetisk informasjon;
- unikt og unikt av genetiske data.
- Du kan bruke alt nødvendig klinisk materiale:
- blod,
- plasma;
- urin;
- kroppsvæsker og ekskreta;
- sputum og andre.
- Tillater deg å bestemme i blodet av mer enn én mikroorganisme samtidig, i motsetning til andre prøver.
- Få resultater innen 24 timer.
- Forenklede metoder for lagring og transport av analyse, er patogener bestemt selv i et dødt miljø.
- Den unike egenskapen til PCR gjør at du kan identifisere bestemte mikroorganismer som ikke er mottagelige for noen annen prøve.
- Høy grad av følsomhet for reagenser, testen er den mest nøyaktige av sin type.
Egenskaper ved den kvalitative analysen av PCR
En kvalitativ test utføres for å bestemme tilstedeværelsen av et virus i blodet og for å oppnå et negativt eller positivt resultat.
Indikasjonen for denne typen diagnose er deteksjon av antistoffer mot hepatitt C i pasientens kropp.
Mulige utfall:
- detekterte (positive);
- ikke oppdaget (negativ).
En kvalitetstest er ikke egnet for pasienter med svært lavt innhold av virus i blodet, så det har en viss følsomhet.
Detektere at hepatitt C-viruset kan være noen uker etter infeksjon av kroppen, selv i fravær av antistoffer mot dette patogenet. Dette resultatet indikerer tilstedeværelsen i kroppen og blodgruppen av et fragment av RNA som er karakteristisk for hepatitt C.
Pasienten anses som infisert med dette viruset og gjennomgår videre spredning av patogene celler i kroppen.
Resultat "ikke oppdaget"
Dette alternativet indikerer at det ikke er noen RNA-fragmenter som er spesifikke for hepatitt C i prøven av biologisk materiale under test. Dette er et negativt resultat.
Sensitiviteten til testen avslører ikke det lave innholdet av RNA-fragmenter, så det "ikke oppdagede" resultatet er ikke alltid troverdig.
Funksjoner av tolkning av resultater
Hovedtrekk ved tolkning av resultater er terskelfølsomheten til PCR-metoden.
Det avhenger av følgende indikatorer:
- nøyaktigheten av studien;
- type og kvalitet av utstyret som brukes.
Det er kjent at følsomheten kan variere mellom 10-500 IE / ml. Herfra følger at hvis et virus er tilstede i pasientens kropp under en konsentrasjon på mindre enn 10 IE / ml, vil testen vise resultatet "ikke oppdaget". Men dette betyr ikke at patogenet er helt fraværende.
Varianter av diagnostiske systemer
For øyeblikket er det følgende alternativer for diagnostiske systemer:
- Dersom blod tas fra en pasient som gjennomgår antiviral behandling, bør diagnostiske systemer med følsomhet på minst 50 IE / ml brukes. Følgende analysatorer brukes til dette formålet:
- Cobas Ampicolor HCV-Test;
- RealBest HCV RNA.
- For å få en endelig diagnose av "hepatitt C", er det nødvendig å oppdage RNA-viruset i tre ulike biologiske materialprøver. Disse anbefalingene er utviklet av Verdens helseorganisasjon. Hvis resultatet tre ganger er negativt, er diagnosen ikke bekreftet.
- For øyeblikket er det i tillegg til PCR-metoden en mer nøyaktig test, kalt TMA (transkripsjonal amplifikasjonsmetode). Dens terskel for følsomhet er mye høyere enn i andre diagnosemetoder.
Utvalg av detekterbare virusmodifikasjoner
På dette stadiet av genetikkutvikling er flere typer og varianter av virusmodifisering kjent.
Laboratoriediagnostikk i vårt land med absolutt nøyaktighet kan bestemme følgende genotyper:
Egenskaper av PCR-kvantitativ analyse
Kvantitativ analyse er definisjonen av hepatitt C-virus i menneskekroppen. Under studien bestemmes RNA og viral belastning i utgangsmaterialet av PCR. Ellers kan vi si at testen lar deg identifisere hvor mange virale celler som er i en biologisk væske. For denne typen studier brukes bare venetisk blod. Det er ikke noe spesifikt testpreparat.
Kvantitativ analyse lar deg overvåke på behandlingsstadiet som allerede er startet og evaluere effektiviteten. For evaluering blir testdata tatt før og under terapeutiske inngrep. Ved hjelp av de oppnådde resultatene er det mulig å forutse sykdomsforløpet.
Med suksessen til den valgte behandlingsmetoden etter 3 måneder, bør mengden av RNA reduseres flere ganger. Ifølge anbefalingene utføres kvantitativ analyse etter en, deretter etter tre og seks måneder. Det siste resultatet med vellykket behandling bør være negativ.
Evaluering av resultatene av kvantitativ PCR-test
I vårt land er det 2 mulige alternativer for å vurdere resultatet av en kvantitativ PCR-test:
- Antall kopier per milliliter biologisk væske;
- Antall internasjonale enheter per milliliter.
For å få internasjonale enheter, er antall kopier delt opp med 4.
Det er 2 nivåer av belastning eller viremia:
- høy med PCR over 800.000 IE / ml;
- lav med PCR under 400 000 IE / ml.
Resultatet av den kvantitative testen gir 2 muligheter:
- "Under måleområdet";
- "Ikke oppdaget" (negativ).
Vurdering: "under måleområdet"
En slik konklusjon er gjort når en kvantitativ RNA-test ikke oppdaget det forårsakende middelet til hepatitt C i cellematerialet, men viruset er fortsatt tilstede i blodet. Analysens pålitelighet er bekreftet av den kvalitative metoden, da terskelen for følsomheten til den kvantitative testen kanskje ikke oppdager små verdier og konsentrasjoner av patogenet.
Vurdering: "ikke oppdaget"
En slik konklusjon er gjort når RNA-virus av hepatitt C ikke ble detektert i kildematerialet under diagnosen. Dette er et negativt resultat.
Tolkning av resultatene av analysen av kvantitativ PCR-test
Ved hjelp av indikatoren for virusbelastning bestemmer:
- graden av forsømmelse av sykdommen;
- hvor smittsom pasienten er;
- effektiviteten av antiviral terapi.
Jo høyere frekvensen av hepatitt C-viruset i kroppen er, desto farligere er pasienten til andre mennesker og jo mer progressive hans sykdom.
Hepatitt C PCR er en viktig diagnostisk metode, spesielt under terapeutiske inngrep. Takket være de oppnådde negative eller positive resultatene er det mulig å evaluere effektiviteten, helbrede pasienten eller redusere behandlingstiden.
Forfatter: Petrunina Svetlana Sergeevna,
sykepleier av intensivavdeling
spesialisering - akutt forgiftning, gjenopplivning,
spesielt for nettstedet moizhivot.ru
Nyttig video om polymerasekjedereaksjon
Gastroenterologer i din by
Velg en by:
En kvalitativ analyse av polymerasekjedereaksjonen - PCR for hepatitt C bestemmer tilstedeværelsen eller fraværet av HCV i kroppen. I laboratorieforhold studeres strukturen av RNA, som vil inkludere viruset. Ved detektering av viruset C, er det nødvendig å gjennomgå et behandlingsforløp, siden forsømmet tilstand av leveren vil medføre alvorlige konsekvenser. PCR av høy kvalitet utføres også etter utvinning for å bekrefte fraværet av antistoffer. Tilordnet for rutinemessig inspeksjon. Med lav konsentrasjon av kausjonsmiddelet i blodet, kan PCR (kvalitativ) ikke oppdage noe, fordi diagnostikksystemet har sine egne følsomhetsgrenser. I tilfelle av den første fasen av sykdommen eller den milde formen, utføres PCR ultradiagnostikk på ekstremt følsomt utstyr.
Hva er RNA-virus?
Begrepet RNA i hepatitt C-viruset (eller hepatitt C-virus-RNA) er selve leversykdommen. Virus C binder seg til den sunne cellen i kroppen ved å trenge inn i. Over tid, spredt over hele kroppen, er det bare nødvendig å komme inn i blodet. Som et resultat trengs patogenet i leveren, smelter med sine celler og virker hardt. Leverceller (hepatocytter) virker under påvirkning, undergår endringer, og fra dette dør de. Jo lengre viruset C er i leveren, jo større antall celler dør. Over tid utvikler farlige sykdommer som fører til ondartet degenerasjon og død.
Infeksjon av leveren med denne typen virus kan ikke manifestere seg eksternt. I mange år eller flere tiår føler en smittet seg helt sunn, og bare en tilfeldig undersøkelse avslører ofte patologi. Ved donering av blod til hepatitt undersøkes en del av RNA (ribonukleinsyre) kjeden, som er en del av det humane genet (DNA). Resultatene av laboratorietester bør ikke brukes til selvbehandling, fordi dette bare er en indikator. Det nøyaktige bildet og ytterligere diagnose er bedre bestemt av legen.
Når ferdig: indikasjoner på forskning
I bekreftelse på HCV utføres PCR-analyse (polymerasekjedereaksjon). Studier av PCR bidrar til å finne patogenmaterialet i strukturen av RNA og foreskrive en effektiv terapi. Utnevnt i følgende tilfeller:
- påvisning av tegn på betennelse i leveren;
- screening studier for forebygging;
- undersøkelse av personer i kontakt
- diagnose av hepatitt av blandet opprinnelse (bestemmelse av hovedpatogenet);
- bestemme nivået på reproduksjonsaktivitet av viruset i kronisk form;
- levercirrhose;
- for å bestemme effektiviteten av den foreskrevne behandlingen.
Studier av PCR foreskrives av en lege for å bestemme effektiviteten av et behandlingsforløp for hepatitt.
Det er en kvalitativ og kvantitativ analyse av PCR. Kvantitativ PCR viser prosentandelen av RNA til virusbærere i blodet, og kvalitativ indikerer viral tilstedeværelse eller fravær. En positiv indikator for kvalitet (tilstedeværelse av hepatitt C RNA) trenger også kvantitativ forskning. Et høyt nivå av konsentrasjon av det forårsakende middelet av hepatitt C er forbundet med risikoen for overføring, det vil si infeksjon av andre. Lavt antall er bedre behandles. Mengden av RNA-virus i blodet er ikke relatert til intensiteten av sykdommen. PCR-analyse gjøres også ved interferonbehandling for å foreskrive varighet og kompleksitet i behandlingsforløpet.
Egenskaper av høy kvalitet PCR analyse for hepatitt C
En kvalitativ analyse med polymerasekjedereaksjonsindeksen er tildelt alle pasienter som har antistoffer mot hepatitt C i blodet. De som har vært syk og gjenopprettet, må ta testen igjen. Det anbefales å bestå testen for hepatitt B, da i en positiv konklusjon, og for hepatitt D. Også kvalitativt analysert reaksjon skal utføres i forbindelse med andre blodprøver. Analyser vil vise et komplett bilde av viral spredning.
Fra testresultatene vil bare en positiv test for hepatitt C være synlig eller negativ, det vil si tilstedeværelse eller fravær av et virus. Hvis utgangen er "detektert", er viruset og fortsetter å være aktivt. Betegnelsen "ikke oppdaget" indikerer fraværet av et virus eller dets lille mengde. Med denne indikatoren bør man huske på at analysens følsomhet for diagnostiske systemer er forskjellig, og at RNA hepatitt C fortsatt kan være i blodet, men ikke manifestert i analysen.
Spesielt sensitiv PCR-metode viser ultra hepatitt C selv i små mengder. En fluorescens hybridiseringsstudie brukes, som er mange ganger høyere enn standard PCR-systemer. Metoden brukes i flere tilfeller:
- mistenkte skjulte former for hepatitt C;
- PCR-diagnostikk bekreftet ikke patogenet, men det er antistoffer;
- i tilfelle gjenoppretting
- å oppdage tidlig infeksjon.
Dekoding analyse
Bestemmelse av hepatitt C-virus-RNA ved polymerasekjedereaksjon.
PCR-dekodingen av HCV påvirker den endelige avgjørelsen når man foretar en diagnose, spesielt med ultrametod-metoden. Den største ulempen ved denne studien er streng overholdelse av sterile forhold for prøven og materialene. En liten avvik viser noen ganger unøyaktige analytiske konklusjoner, kompliserer diagnose og etterfølgende behandling. Analyse av PCR for bestemmelse av hepatitt-RNA viser ikke alltid selvtillit et bilde av sykdommen, noen ganger er unøyaktigheter tillatt, og i begge retninger.
Diagnostisering av hepatittvirus, det anbefales å bruke en omfattende undersøkelse.
Norm for indikatorer
Fraværet av JgM antistoffer mot viral hepatitt C i resultatene av studien regnes som normen i analysen av polymerasekjedereaksjonen. Samtidig viser funnene fra den serologiske analysen tilstedeværelsen av antistoffer mot C-viruset, og dette er også innenfor det normale området. En kvalitativ definisjon viser ikke intensiteten av sykdommen, det avslører bare årsaksmedlet til hepatitt C i RNA. Denne analysen gjentas etter behandling for å bekrefte den faktiske utvinningen.
avvik
Hvis JgM antistoffer mot HCV RNA er tilstede, indikerer dette en utviklingsinfeksjon. Sykdommen pågår samtidig akutt eller kronisk, manifestert i forskjellige stadier. Hvis en nedgang i antall antistoffer registreres, vil analysen indikere at resultatene av behandlingen ble oppnådd under utvinning. Det er bare svært sjeldne tilfeller av falske positiver som finnes i diagnosen. De finnes hos kvinner under graviditet og hos personer med andre smittsomme sykdommer.
PCR-studie for hepatitt C: typer, indikasjoner, transkripsjon
Viral hepatitt C er en alvorlig sykdom som oppstår med skade på leveren. I åtti prosent av pasientene blir det kronisk. Viruset multipliserer i leveren celler - hepatocytter - og forårsaker deres død. Dødt vev erstattes av bindevev, fibrose utvikler seg.
Etter hvert som fibrose utvikler seg, lever ikke i stand til å utføre sine funksjoner, begynner levercirrhose, noe som er farlig på grunn av komplikasjoner: økt trykk i portalveinsystemet, gastrointestinal blødning, nedsatt blodkoagulasjon, mentale forandringer på grunn av skade på hjernekjerner ved giftige produkter.
Årsaken til sykdommen er infeksjon av et virus fra familien Flaviviridae, som tilhører typen RNA-virus. Dette betyr at det genetiske materialet ved hvilket patogenene av patogenet syntetiseres, er kodet i ribonukleinsyremolekylet. Infeksjon skjer gjennom blod, seksuelt, og fra en gravid kvinne til fosteret. Dessverre kan en tilstrekkelig stor mengde tid passere mellom infeksjon og begynnelsen av antistoffproduksjonen - fra to uker til seks måneder. Dette tillater ikke å bestemme infeksjonen ved hjelp av metoden for immunoassay og begynne behandling i de tidlige stadier.
Hva er PCR-analyse?
PCR er en metode for molekylær analyse, som gjør det mulig å oppdage patogenes genetiske materiale allerede i den første uken etter infeksjon ved bruk av polymerasekjedereaksjon. Studien har høy spesifisitet, nøyaktighet, og tillater ikke bare å bestemme tilstedeværelsen eller fraværet av viruset, men også dets konsentrasjon og genotype.
For studien tas en pasients blod der virus-RNA kan være lokalisert. Primerer legges til de kunstig syntetiserte regioner av det ønskede gen av liten lengde, og RNA-polymerase er et spesielt enzym som øker mengden av genetisk materiale av patogenet flere ganger. Ved hjelp av et spesielt apparat, utføres flere sykluser av oppvarming og kjøling. Deretter analyseres materialet og sammenlignes med de kjente genene til viruset, på basis av hvilket det dannes en konklusjon om nærvær eller fravær av infeksjon.
Typer av PCR-analyse for hepatitt C
Det finnes tre typer PCR-analyse:
- Kvalitativ analyse av PCR. Den første fasen av studien. Det lar deg identifisere genetisk materiale av viruset i blodet.
Indikasjoner for PCR-analyse for hepatitt C
PCR-studien er foreskrevet i følgende tilfeller:
- kontakt med en syk person der infeksjon kan oppstå;
- positiv enzymimmunoassay;
- tegn på skrumplever: endringer i leverens størrelse, utbredelse av milten, utseende på underlivet av subkutan venøs plexus;
- Utseendet på symptomer på leverskade: smerte i høyre underliv, guling av huden;
- økt aktivitet av ALT og AST i den biokjemiske analysen av blod;
- før behandling begynner å bestemme viral belastning;
- å overvåke effekten av antiviral terapi;
- etter behandling for å kontrollere tilbakefall
- i nærvær av diagnostisert hepatitt B, for å utelukke blandet leverskade.
Forklaring av PCR-studier på hepatitt C
Dekoding av PCR-analyse og enzymimmunoassay for hepatitt C skal utføres av en spesialist på hepatolog eller smittsomme sykdommer. Analysere resultatene av PCR er nødvendig i kombinasjon med data om biokjemisk analyse av blod, biopsi og ultralyd. Kun en kvalifisert lege vil kunne analysere resultatene av forskning og, basert på dem, foreskrive riktig behandling.
Dekoding av kvalitativ analyse.
I det analyserte biologiske materialet fant det genetiske materialet til patogenet. Infeksjon bekreftet.
Infeksjon er fraværende, eller mengden av patogenens RNA er under følsomhetsgrensen.
Dekoding av kvantitativ analyse.
Normal sats for friske mennesker. Det betyr at det ikke finnes hepatitt C-RNA i materialet som er studert, eller konsentrasjonen er under følsomhetsgrensen for studien.
RNA-konsentrasjonen er under rekkevidden av kvantifisering. Disse resultatene tolkes svært nøye, korrelerer dem med data fra andre studier, ofte gjenstudier.
Nivået av viral belastning ved en gitt konsentrasjon regnes som lav. Vanligvis betyr en reduksjon i mengden virus at terapien er vellykket.
Mer enn 8 * 10 ^ 5 IE / ml
Nivået av viral belastning ved en gitt konsentrasjon anses høy.
Mer enn 2,4 * 10 ^ 7 IE / ml
Mengden av RNA er over den øvre grense for kvantifikasjonsområdet. Det er umulig å trekke konklusjoner om graden av virusbelastning med dette resultatet. Vanligvis i slike tilfeller gjentas testen med fortynning av en blodprøve.
Dekoding av genotyping.
Oppdaget RNA av en bestemt genotype
Hepatitt C-virus av en bestemt genotype og subtype ble påvist i biomaterialet. Resultatet er kodet i romerske tall og latinske bokstaver, for eksempel - 1a, 2b. Totalt er det syv genotyper og sekstisju subtyper, men i Russland er det bare tre første typer.
Hepatitt C virus RNA oppdaget
RNA ble funnet i blodet av en sjelden genotype for Russland, som ikke kan tilskrives den første, andre eller tredje typen. Mer forskning er nødvendig.
Dette resultatet indikerer at pasienten er sunn, eller at mengden av patogen-RNA er for liten.
Det er mulig at PCR-analyse for hepatitt C er negativ, og enzymbundet immunosorbentanalyse gjenkjenner antistoffer mot viruset. Dette betyr at pasienten hadde akutt hepatitt C og gjenopprettet alene. Omtrent tjue tilfeller av infeksjon resulterer i spontan utvinning dersom pasientens kropp har tilstrekkelig motstand mot infeksjonen.
Selv om PCR er en svært nøyaktig analyse, kan resultatet bli forvrengt i følgende situasjoner:
- blodet ble transportert til laboratoriet under upassende forhold, temperaturen ble brutt;
- biomaterialprøven var forurenset;
- det var rester av heparin og andre antikoagulantia i blodet;
- Undersøkere ble funnet å være inhibitorer - stoffer som reduserer eller stopper polymerasekjedereaksjonen.
Fordelene med PCR over andre metoder
- Diagnose i de tidlige stadier. PCR detekterer det genetiske materialet til det forårsakende middel. Ved hjelp av immunfluorescensanalyse kan bare immunoglobuliner bestemmes - stoffer som kroppen produserer som svar på en infeksjon. I tilfelle infeksjon med hepatitt C, kan intervallet mellom infeksjon og utbruddet av immunresponsen være flere uker og måneder, da vil ELISA være ineffektivt. PCR vil gi svar i den første uken etter infeksjon.
Hvordan forberede seg på bloddonasjon for PCR-studier
For PCR-analysen av hepatitt C samles venøs blod. Vanligvis tas to porsjoner blod fra pasientens vene om gangen: den første sendes til PCR og den andre av ELISA. Dette er gjort for å mer nøyaktig vurdere hvor mye en pasient er infisert med et virus, og hvordan immunitet bekjemper den.
Vanligvis er pasienten pålagt å følge følgende regler:
- en blodprøve blir tatt om morgenen;
- Intervallet mellom det siste måltidet og bloddonasjonen skal være åtte til ti timer;
- to eller tre dager før analysen, er det nødvendig å forlate stekte og fete matvarer og alkohol;
- i tjuefire timer før analysen, bør pasienten unngå fysisk anstrengelse: ikke bære vekter, ikke gå til treningsstudio eller svømmebasseng.
PCR ikke oppdaget hepatitt C
"Identifisering av gener av hepatitt C-viruset (HVC) i pasientens blod er den andre fasen av laboratoriediagnosen av denne smittsomme patologien. For å oppdage et patogen som ikke har en cellemembran og følgelig overflateantigener, anvendes fremgangsmåten for polymerasekjedereaksjon. Ved hjelp av denne metoden er molekylet direkte bestemt, der all dens genetiske informasjon er kodet - RNA.
RNA - Ribonukleinsyre, sammen med DNA, er en del av cellene i alle levende organismer. Hepatitt C-viruset inneholder et RNA-molekyl og har evnen til å mutere det.
En HVC-genomprøve er vanligvis foreskrevet etter at en generell, biokjemisk blodprøve er utført og en positiv respons på antistoffer (anti-HVC) er oppnådd.
Hva betyr dette?
Studien av antistoffer mot HVC er en screening, det vil si det kan brukes til å undersøke store populasjoner av mennesker (leger, gravide, sykehuspasienter, givere, injeksjonsbrukere, HIV-smittet). Et negativt resultat av laboratorieanalyse av anti-HVC indikerer at ingen immunrespons på viruset ble oppdaget i pasientens blod. Et negativt resultat kan oppnås i slike tilfeller:
Hvis en person aldri har blitt smittet med hepatitt C.
Hvis følsomheten til laboratorietestsystemet var lavere enn konsentrasjonen av anti-HVC.
Hvis infeksjonen skjedde mindre enn 2 måneder siden, og anti-HVC i blodet ikke er nok til å bestemme. Når en falsk negativ respons på grunn av menneskelige faktorer.
Hvis resultatet er at antistoffene til HVC ble funnet i pasienten, betyr dette at hepatitt C-viruset var i pasientens kropp på tidspunktet for studien eller var i blodet for en tid siden. Med et positivt resultat på anti-HVC er det behov for ytterligere laboratorieundersøkelser som vil påvise det genetiske materialet til selve patogenet, bestemme konsentrasjonen av dets gener (viral load, viremia) og etablere genotypen.
Analyse av Hepatitt C Virus RNA
HVC-genomet under laboratorieforhold kan påvises ved å bruke flere studier:
forgrenet DNA (p-DNA);
transkripsjonal amplifikasjon (TMA);
polymerasekjedereaksjon (PCR).
P-DNA-metoden er en billig og enkel måte å oppdage virusgenomet hos et stort antall undersøkte personer. Dens viktigste ulempe er lav følsomhet: det viser kun HVC når konsentrasjonen overstiger 500 IE / ml.
Metoden for transkripsjonal amplifikasjon detekterer virusnukleinsyrer i serum. Analysen har en høy følsomhet (5-10 IE / ml), men den er ennå ikke tilstrekkelig innarbeidet i allestedsnærværende laboratoriepraksis.
PCR-metoden i Russland er den vanligste og tilgjengelige laboratorieundersøkelsen med høy følsomhet (fra 50-60 IE / ml).
PCR-studien utføres i et hvilket som helst klinisk laboratorium som har riktig akkreditering. En svært viktig nyanse av denne diagnostiske metoden, som påvirker resultatet av analysen, er følsomheten til testsystemet som brukes i laboratoriet. For eksempel tillater diagnostisk følsomhet på 60 IE / ml, som i Invitro Laboratories, deteksjon av viralt RNA 3 måneder etter infeksjon. Ved lav følsomhet i testsystemet, kan patogenene ikke bli detektert selv 4 måneder etter infeksjon.
Hepatitt C-virus RNA: PCR-metode
PCR-metoden har mange fordeler i forhold til andre laboratorietester for påvisning av HVC-gener:
høy følsomhet. Metoden tillater å bestemme patogenets genetiske materiale selv med minimumskonsentrasjonen i prøven;
stor spesifisitet. Identifiserer gener av et virus av en bestemt genotype blant en rekke DNA og RNA av andre patogener, som tillater genotyping av patogenet;
fartshastighet. Fraværet av en lang prosess med dyrking av patogenet forkorter tiden for å oppnå resultatet opptil flere timer; universality of analysis.
Den universelle forskningsmetoden muliggjør samtidig bruk av en human blodprøve for å detektere det genetiske materialet til forskjellige patogener. Disse fordelene gjør det mulig å vurdere PCR som "gullstandard" for laboratoriediagnostisering av viral hepatitt C sammen med en enzymimmunanalyse for anti-HVC.
PCR er en studie som brukes til å bestemme HVC-gener i et individs blod. Studien består av flere faser:
Prøvetaking av biomaterialet.
Gjentatt økning av konsentrasjonen av RNA-kopier i den utvalgte prøve.
Påvisning av genetisk materiale ved hjelp av spesielle testsystemer.
Etter å ha tatt det venøse blod fra pasienten, utføres kunstig initiering av prosessen med multiple replikasjoner (amplifisering, kopiering) av HVC-gener.
For å gjøre dette må du på en bestemt måte endre temperaturen inne i røret med biomaterialet flere ganger. Når antall kopier av RNA i testrøret når ønsket verdi, utfør deteksjonen av patogenet ved hjelp av spesiell testdiagnostikk.
kvalitativ (oppdager tilstedeværelsen av et virus),
kvantitativ (bestemmer konsentrasjonen av virale gener per volumdel)
genotypisk (etablerer genotypen av patogenet).
Hepatitt C RNA: Kvalitativ analyse
Oppgaven med kvalitets-PCR er å bestemme tilstedeværelsen av HVC i det presenterte biomaterialet. Denne studien utføres vanligvis for screening diagnose av sykdommen eller påvisning av vogn. Tilordne det etter at et anti-HVC er detektert av ELISA.
For å diagnostisere hepatitt C er det tilstrekkelig å oppdage det genetiske materialet HCV kvalitativt, det vil si uten å telle sin konsentrasjon i blodvolumet. Resultatet av høyverdig PCR kan være: "RNA er detektert" eller "RNA er ikke detektert."
Nøyaktigheten av metoden tilsvarer 95%. Samtidig når nøyaktigheten til testdiagnosen seg selv 100%, og 5% er den menneskelige faktoren, som alltid er tilstede i laboratorieundersøkelser. For å unngå en falsk-negativ analyse, særlig hos personer med lav viremi, er en høy følsomhet av det diagnostiske systemet som brukes i studien, nødvendig. Sensibiliteten til testsystemet bør ikke være mindre enn 60 IE / ml.
Hepatitt C RNA: Kvantitativ analyse
Kvantitativ analyse er foreskrevet når du trenger å vite nivået av viremia i menneskekroppen. Indikasjonene for å gjennomføre denne studien er:
positivt resultat av høyverdig PCR, gitt deteksjon av antistoffer mot viruset;
etablere scenen av patologi;
bestemmelse av viral belastning i hepatitt;
valget av kombinasjons antivirale legemidler;
overvåke en virologisk respons på antiviral terapi;
vurdering av sannsynligheten for overgang fra akutt hepatitt C til kronisk.
Resultatet av analysen er uttrykt i IE / ml (internasjonale enheter i 1 ml serum) eller i kopier / ml (antall kopier av virusgener i 1 ml serum). Kvantitativ PCR er ikke normal: HVC-genet i humant blod bør normalt ikke oppdages. Resultatene fra undersøkelsen sammenlignes med referanseverdiene som er fastlagt for en varierende grad av viral belastning.
Dermed er indikatorene (i IE / ml):
under 4 × 10 * 5 betraktes som lav viremia;
fra 4 × 10 * 5 til 8 × 10 * 5 - gjennomsnittlig;
over 8 × 10 * 5 - høy.
Jo flere kopier av virus RNA i blodet, jo mer aggressive sykdommen og jo større er risikoen for overføring av viruset til andre. Men nivået av viral belastning er ikke den eneste indikatoren som påvirker patologiens alvorlighetsgrad og den videre prognosen for pasienten: Genotypen av patogenet er også viktig.
Etablering av en genotype er nødvendig for å tilordne riktig behandlingsregime. Det bestemmer også prognosen for pasientens helse og liv. For eksempel fører virusgenotype 3 ofte til fibrose eller skrumplever i leveren, sammenlignet med pasienter med bærere av genotype 1.
Hepatitt C: analyser og transkripsjon
RNA Diagnosen av hepatitt C kan ikke bare gjøres ved resultatene av kun kvalitativ og / eller kvantitativ analyse av PCR: bestemmelsen av HVC og nivået av viral belastning er ikke nok til å foreskrive tilstrekkelig antiviral terapi. En potensiell pasient bør undersøkes grundig (klinisk, laboratorium, instrumentelt) for å få et objektivt bilde av patologien. Riktig tilordne et sett med undersøkelser for å etablere diagnosen hepatitt C, og så kan legen kun dekode resultatene riktig.