Hva er PCR-analyse og viral belastning?
Polymerasekjedereaksjon (PCR) er en laboratoriemetode for å bestemme DNA og RNA. Det ble først testet for nesten et halvt århundre siden av den amerikanske Carey Mullis. Denne overfølsomme analysen er i stand til å identifisere genombæreren ved et enkeltkildemolekyl inneholdt i blod, spytt eller hud.
PCR-metoden har gode utsikter, brukes ikke bare i medisin, men også innen genteknologi og rettsmedisin. Med det, klone og lage nye typer DNA, bestemme graden av slektskap. En kriminell er identifisert av et epitel som ble funnet på forbrytelsesstedet.
PCR-analyse for hepatitt - hva gjør de og hvorfor?
Hvorfor er en PCR-analyse nødvendig for mistanke om hepatitt C, hva er det?
Hepatitt C-virus er et RNA-virus som inneholder 6 genotyper og opptil 500 undertyper. Av alle hepatitt har dette viruset den høyeste mutasjonskapasiteten og overvinter beskyttelsesbarrieren til immunsystemet. Av det totale antall hepatitt tilfeller forårsaket C-virus 70% av tilfellene av kronisk form og 30% av skrumplever og leverkreft.
Essensen av metoden: En del av genet under studien ved hjelp av spesielle enzymer og forhold som er tvunget til å formere seg in vitro. PCR-analyse tillater å bestemme virusstammen, uten hvilken det er umulig å utføre effektiv behandling: hver genotype er forskjellig følsom for antivirale legemidler. To typer PCR brukes:
Antiviral terapi krever konstant overvåking for raskt å justere behandlingen, og for disse formål brukes polymerasekjedereaksjon også.
Kvalitativ og kvantitativ PCR
PCR-kvalitativ på hepatitt C gir svaret: Er det en stamme av virus C i pasientens blod og hvilken. Genotyping er nødvendig for å klargjøre diagnosen, prognosen for sykdommen og bestemme tidspunktet for behandlingen.
I henhold til den aksepterte klassifiseringen er et gen angitt med et tall, og en undertype er et lite latinsk brev.
Spesiell forberedelse basert på naturlige stoffer.
Prisen på stoffet
Behandling vurderinger
De første resultatene er følt etter en uke med administrasjon.
Les mer om stoffet
Bare 1 gang per dag, 3 dråper
Instruksjoner for bruk
Dekryptere genotype C-virustabellen:
- Genotype 1a, 1b, 1c
- Genotype 2a, 2b, 2c, 2 d
- Genotype 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f
- Genotype 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 4f, 4g, 4h, 4i, 4j
- Genotype 5 a
- Genotype 6 a
De vanligste genotypene 1,2,3. I Russland er de vanligste 1a, 1b, 2 og 3 stammer av virus C.
Genotypen av virus 1b er vanskeligere enn andre å behandle, i 90% blir det kronisk, hvorav 30% gjenfødes som leverkreft eller cirrhose.
Genotyper 2a og 3a har en grad av kroniskitet på 33-50%, mer responsive mot antiviral terapi.
Ved bekreftelse av virusets tilstedeværelse utføres en kvantitativ PCR-test for hepatitt C, som brukes til å beregne antall RNA-molekyler som er tilstede i pasientens laboratorieprøve.
Dekoding analyse
Kvalitets PCR analyse har to svar:
PCR-negativ betyr at patogenet ikke oppdages i blodprøver.
Et positivt svar antyder motsatt: RNA av en eller annen genotype av virus C er funnet.
Sannsynligheten for pålitelighet av resultatet er 95%. De resterende 5% er en feil forårsaket av en person. Denne muligheten er tillatt på grunn av de høye kravene til studien:
- regler for lagring av reagenser;
- passende kvalifikasjoner av medisinsk personale;
- biomaterial renhet.
PCR-settet har 100% diagnostisk nøyaktighet.
Kvantitativ PCR av Hepatitt C RNA gjør det mulig å bestemme virusbelastningen på pasientens kropp. Med sin hjelp:
- stadium av sykdommen er spesifisert (akutt, kronisk);
- bestemmer effekten av antiviral behandling
- Behovet for leverbiopsi undersøkes.
I noen tilfeller føler pasienten ingen tegn på sykdommen, mens HCV-infeksjonen oppdages ved PCR-metoden. Dette betyr at sykdommen er i et tidlig stadium av utvikling eller i kronisk form. Ytterligere studier er nødvendig for å klargjøre diagnosen, for tidlig antiviralbehandling.
Hepatitt C virusvekt
Viral belastning viser aktiviteten til hepatisk virus, hvor aktiv reproduksjonen oppstår.
Hva er dette?
PCR-kvantitativ hepatitt C måles i internasjonale enheter per 1 ml eller IE / ml, hvilket betyr hvor mange kopier av ribonukleinsyre av en bestemt stamme av virus C finnes i 1 ml blod under test.
Hva er høyt, hva er lavt?
Den virale lastanalysen tillater å bestemme tilstedeværelsen av viralt RNA i en konsentrasjon på 50 IE / ml. Normal viral belastning er når ingen HCV RNA-molekyl oppdages av PCR.
Viral load table:
- lav konsentrasjon på 600 IE / ml 3 * 104 IE / ml;
- middels konsentrasjon fra 3 * 104 IE / ml til 8 * 105 MM;
- høyt nivå mer enn 8 * 105 IE / ml.
Lav viral belastning er et signal om at terapeutisk behandling er valgt riktig, og prognosen for en kur for hepatitt C er gunstig.
En høy konsentrasjon av virusceller indikerer at sykdommen er i den akutte fasen. Pasientens blod er en farlig infeksjonskilde.
Viral belastning, indikatorer av hvilke er på gjennomsnittlig nivå, kjennetegner enten den kroniske scenen av HWS, eller kan ha to utviklings trender: å øke eller redusere.
Etter ferdigstillelse, etter 6 måneder, utføres kontroll PCR.
Kostnad for PCR-diagnostikk
Følgende symptomer bør være årsak til bekymring:
- generell svakhet;
- misfarging av hud, øye sclera, utslipp;
- kvalme;
- redusert appetitt;
- smerter i muskler og ledd;
- tyngde i høyre hypokondrium;
- forhøyede blodnivåer av AST og ALT.
I kontakt med infiserte pasienter, i den preoperative perioden, anbefales også hemodialyse undersøkelse.
Offentlige klinikker gjør en blodprøve for PCR gratis hvis det er en henvisning fra en smittsom spesialist eller en hepatolog.
Betalte tjenester for PCR-diagnostikk er gitt i alle større russiske byer. Kostnaden avhenger av type test, tilgjengelig utstyr, timing og andre faktorer.
Høykvalitets PCR analyse i Moskva og St. Petersburg vil koste fra 600 til 900 rubler. I regionene - fra 300 til 800 rubler.
Bestemmelsen av hepatitt C viral belastning vil koste 17 000-22 000 rubler. For andre typer infeksjoner prisen på kvantitativ forskning: 1200-10000 rubler.
Fordeler og ulemper ved PCR-metoden
Hva er fordelene med polymerasekjedereaksjonsmetoden over andre diagnostiske metoder?
- Et bredt spekter av applikasjoner. Ved å bruke PCR, ved hjelp av standardutstyr, kan du identifisere noe virus.
- Nøyaktighet av bestemmelse av patogenet. Ved hjelp av ulike kombinasjoner av enzymer og analyseteknikker oppnås en 100% spesifikasjon av studien for den angitte infeksjonen.
- Høy følsomhet. Metoden gjør det mulig å oppdage tilstedeværelsen av ett virusmolekyl i blodet.
- Effektivitet. Kvalitativ analyse er klar om noen timer, kvantitativ - om to dager.
- Diagnose av viruset i inkubasjonsperioden. Under PCR bestemmes patogenet ikke ved tilstedeværelse av antistoffer, når kroppen har en immunrespons, men før starten av den patologiske prosessen, noe som letter behandlingen.
Ulemper med PCR er resultatet av fordelene:
- Analysens renhet krever høyeste grad av renhet, inkludert luft i laboratoriet, slik at "fremmed" DNA ikke kommer inn i prøven under studien;
- høye krav til personell engasjert i innsamling og analyse av biomateriale.
Hepatitt B-virus DNA, kvalitativ bestemmelse
Alfabetisk søk
Hva er Hepatitt B DNA, en kvalitativ definisjon?
HBV er et komplekst DNA-holdig virus og tilhører Hepadnaviridae-familien av Orthohepadnavirus-slekten.
Hepatitt B er en antroponotisk infeksjon, hovedsakelig med parenteral infeksjonsmekanisme, som kan forekomme i form av viral vogn, akutt og kronisk form og er preget av leverskade med mulig utvikling av akutt leversvikt, kronisk hepatitt, levercirrhose og primær leverkreft (hepatocellulært karcinom).
Infeksjon av menneskekroppen skjer gjennom direkte penetrering av HBV i blodet (med eventuelle invasive inngrep og ved transfusjon av blod og dets preparater), eller gjennom slimhinner og hud under fødsel, under seksuelle og tette husholdninger. En gang i leveren trenger HBV inn i hepatocytten, hvor den begynner å formere seg raskt.
Utviklingen av en smittsom prosess kan forekomme på to måter: replikative og integrerende. Den replikative formen av infeksjonen fører til utvikling av akutt eller kronisk hepatitt og levercirrhose, mens den integrerende formen fører til utvikling av "sunn" virusinfeksjon, inaktiv kronisk hepatitt, levercirrhose og primært hepatokarcinom.
Serologisk diagnose og prognose for HBV-infeksjon er basert på deteksjon av virusantigener og antistoffer mot det. Men som det viste seg, er det funnet nok mutantstammer (HBeAg-negativ) i populasjonen av hepatitt B-viruset, som ikke er påvist ved konvensjonelle serologiske test. Derfor er PCR-metoden for diagnose av HBV-infeksjon ekstremt viktig.
Hvorfor er det viktig å lage DNA av hepatitt B-virus, en kvalitativ definisjon?
PCR gjør det mulig å bestemme DNA i hepatitt B-viruset i testmaterialet både kvalitativt og kvantitativt. Den kvalitative bestemmelsen av hepatitt B-viruset i materialet (helblod, serum, plasma, leverbiopsiprøver) bekrefter tilstedeværelsen av viruset i pasientens kropp og etablerer dermed patogenesen av sykdommen. En kvantitativ metode for å bestemme DNA-innholdet i et virus i plasma gir viktig informasjon om intensiteten i utviklingen av sykdommen, på effektiviteten av behandlingen og på utviklingen av resistens mot antivirale legemidler. PCR i HBV er absolutt nødvendig for å dømme viral replikasjon. Serum viralt DNA påvises hos 50% av pasientene i fravær av HBeAg. Deteksjon av HBV-DNA i blodet er av stor betydning for prognosen for akutt HBV. Det har blitt fastslått at vedvarende HBV DNA i over 8 uker etter debut av sykdommen indikerer en kronisk prosess, mens eliminering av virusets DNA i løpet av de første 2 ukene av sykdommen korrelerer med fullstendig gjenoppretting.
Kvalitativ bestemmelse av DNA fra hepatitt B-virus ved PCR.
Analytiske indikatorer: DNA-deteksjon av hepatitt B-virus (hepatitt B-virus) ved hjelp av polymerasekjedereaksjonen (PCR) i blodplasma.
Det identifiserte fragmentet er den unike DNA-sekvensen av genet for det strukturelle protein i hepatitt B-viruset. Spesifikiteten av bestemmelsen er 98%. Deteksjonsfølsomheten er ikke mindre enn 80 virale partikler i 5 μl av den behandlede (isolering av DNA) -prøven.
Dermed er bestemmelsen av HBV DNA i materialet den viktigste analysen, som sammen med andre laboratorietester gjør det mulig å diagnostisere en infeksjon, bestemme arten av den smittsomme prosessen, fungere som et kriterium ved utførelse av terapi og evaluere effektiviteten.
Ved hvilke sykdommer er DNA i hepatitt B-viruset gjort, en kvalitativ definisjon?
Indikasjoner for analyse:
Forebyggende screeningsstudier (Hepatitt B-virus-DNA er den tidligste markøren for akutt infeksjon).
Studier med HBsAg-negativ infeksjon.
Undersøkelser av kontaktpersoner.
Diagnose av hepatitt av blandet etiologi - identifisering av det ledende viruset.
Identifikasjon av scenen for aktiv replikasjon av viruset i kronisk tilstand.
Kontroll av terapi.
Svakhet, ubehag, tretthet, tap av appetitt, kvalme, tyngde i riktig hypokondrium, forstørret lever og smerte i muskler og ledd.
Gulsot, kløe, utvidelse av milten, vaskulære "edderkopper", i noen tilfeller rødhet av håndflatene og føttene.
Hepatitt B PCR
Tilgjengeligheten av moderne anti-hepatitt B (HBV) medikamenter med klare indikasjoner på deres administrasjon krever en nøyaktig og rask verifisering av diagnosen. På grunn av knappe kliniske data i de første ukene av sykdommen og begrensede immunanalysemetoder for analyse, reduseres diagnosens frekvens.
Tilstedeværelsen av markører anti-HBc IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HBe lar deg bekrefte HBV eller oppdage en tidligere sykdom. Men det er mulig å bestemme tilstedeværelsen av aktive virale partikler i blodet og telle tallet deres på tidspunktet for studien ved hjelp av PCR - en kvantitativ sanntidsprøve for å oppdage hepatitt B. Metoden sammenligner med diagnostiske metoder i ELISA, diagnostiseringsproblemer og lar deg forutsi sykdomsforløpet mens du mottar antivirale legemidler.
Grunnleggende om sykdomsdiagnose
Diagnose av hepatitt B er basert på vurdering av kliniske manifestasjoner, enzymimmunanalyse og instrumentelle metoder for forskning. Sykdommen oppstår i den akutte fasen etter inkuberingsperioden, og avhengig av infeksjonsdosen og effektiviteten av behandlingen, går det inn i et kronisk stadium. Hovedmålet med behandlingen er å forhindre kronisering, det vil si eliminering av alle virale partikler fra blodet. Det kliniske løpet av sykdommen er en kur uten etterfølgende viremi.
Faktumet med å eliminere infeksjonen må bevises ved en kvantitativ metode for forskning.
Siden et immunoassay med kvalitativ enzym gjør det mulig å diagnostisere HBV indirekte, det vil si, det viser ikke tilstedeværelsen av patogenet i kroppens indre miljø, men karakteriserer immunresponsen mot infeksjonen, overvåker effekten av terapi og det faktum at kur blir vanskelig å bevise. Derfor bør pasienten med hepatitt B eller med nærvær av diagnostiske kriterier i sin favør utføres polymerasekjedereaksjon for å kvantifisere antall virale partikler i blodet. Diagnostisk frekvens er mangelen på kopier av DNA fra infeksjonen.
Beskrivelse av diagnostikkmetoden
Den svært følsomme metoden for PCR-diagnostikk av hepatitt B tilhører kategorien genetisk utviklede molekylærbiologiske studier. Gjennom det bestemmes mengden av virus DNA i det biologiske materialet til pasienten og den tillatte hastigheten. I henhold til de oppnådde resultatene er antall viruspartikler per voluminnhold etablert. Materialet til den diagnostiske testen er pasientens venøse blod. Et inntak er ønskelig på tom mage på grunn av den mulige effekten av chyleserum på resultatet av studien.
De oppnådde resultatene må gis til legen for tolkning og bestemmelse av ytterligere taktikk. Selvdekoding representerer ikke diagnostisk verdi.
Betydningen av resultatet av antall virale partikler oppnådd ved PCR-metoden overstiger verdien av enzymimmunoassays. Siden analysen i sanntidsmodus viser tilstedeværelsen av sykdomsfremkallende middel i blodet, er innholdsinformasjonen høyere enn andre. Hvis ELISA bare indikerer tilstedeværelse av antistoffer, som observeres fra 4 uker av inkubasjonsperioden og varer mer enn 8 uker etter at viruset er eliminert fra blodet, så bekrefter polymerasekjedereaksjonen klart sykdomsaktiviteten eller dens kur, karakteriserer dynamikken til den foreskrevne terapi.
Polymerasekjedereaksjon med kvantitativ bestemmelse av patogenpartikler løser diagnostiske problemer for å stoppe behandlingen på grunn av gjenoppretting eller fortsettende behandling på grunn av manglende effektivitet. Metoden er så spesifikk som mulig for HBV-viruset og preges av en akseptabel nøyaktighet.
Indikasjoner og ytelsesmål
Kvantitativ analyse av hepatitt B er den mest pålitelige og lar deg bekrefte dataene som er oppnådd ved ELISA-metoder. Han er utnevnt når:
- oppnå et positivt diagnostisk resultat av ELISA;
- behandle en pasient med en fast diagnose av viral leverskade
- i diagnosen hepatitt blandet etiologi;
- om nødvendig, bestem virusbelastningen hos en pasient.
Siden enzymet immunoassay-metoden brukes mer omfattende i praksis med en smittsomsspesialist, kan enkelte pasienter med mild sykdom behandles uten å måtte beregne viralbelastningen. Men PCR er generelt betraktet som "gullstandarden" for diagnostikk i Hepatology, da det unngår et resultat av en rekke organisatoriske problemer. Derfor har pasientens retning for kvantitativ analyse følgende mål:
- oppnå data om antall virale partikler i pasientens blod;
- bekreftelse av den akutte løpet av hepatitt og rettidig verifisering av kronisk sykdom;
- konstant deteksjon av latente virusbærere med positive ELISA-tester, overvåking av deres viremia;
- ta beslutninger om foreskrivelse av antiviral behandling, kombinasjon og avslutning.
Det viktigste målet med å anvende en kvantitativ PCR-test for å oppdage HBV er å identifisere mulige kombinasjoner av behandling. I tilfelle av høy viral belastning gir analysens resultat spesialisten muligheten til å fortsette med kombinasjonen av legemidler. Under behandlingen er det enkelt å bestemme effektiviteten av den foreskrevne farmakologiske behandlingen basert på resultat av PCR. Å være guidet bare ved data fra immunofermentale metoder, er det umulig å avgjøre om behandling og dagens effektivitet er rettet. Derfor er en kvantitativ sanntidsprøve en nødvendig analyse før behandling med akutt hepatitt, latent virusinfeksjon med høy viremia og kronisk HBV påbegynnes.
Tolkning av kvantitative PCR-testresultater
Fortolkningen av resultatene av den kvantitative PCR-testen skal utføres av pasientens behandlende lege. Det er nødvendig å evaluere diagnostisk indikator og bestemme terapeutisk taktikk.
En standardanalysator er i stand til å produsere en kvantitativ indikator som reflekterer antall kopier av virus DNA som er tilstede i det studerte venøse blodet. Måleenheter - kopier / ml, IE / ml (kopier per milliliter, internasjonale enheter per milliliter). Tolkningen av resultatene er gitt i tabellen med indikasjon på ulike måleenheter.
Kvalitativ analyse for hepatitt C
Legg igjen en kommentar 7,180
En kvalitativ analyse av polymerasekjedereaksjonen - PCR for hepatitt C bestemmer tilstedeværelsen eller fraværet av HCV i kroppen. I laboratorieforhold studeres strukturen av RNA, som vil inkludere viruset. Ved detektering av viruset C, er det nødvendig å gjennomgå et behandlingsforløp, siden forsømmet tilstand av leveren vil medføre alvorlige konsekvenser. PCR av høy kvalitet utføres også etter utvinning for å bekrefte fraværet av antistoffer. Tilordnet for rutinemessig inspeksjon. Med lav konsentrasjon av kausjonsmiddelet i blodet, kan PCR (kvalitativ) ikke oppdage noe, fordi diagnostikksystemet har sine egne følsomhetsgrenser. I tilfelle av den første fasen av sykdommen eller den milde formen, utføres PCR ultradiagnostikk på ekstremt følsomt utstyr.
Hva er RNA-virus?
Begrepet RNA i hepatitt C-viruset (eller hepatitt C-virus-RNA) er selve leversykdommen. Virus C binder seg til den sunne cellen i kroppen ved å trenge inn i. Over tid, spredt over hele kroppen, er det bare nødvendig å komme inn i blodet. Som et resultat trengs patogenet i leveren, smelter med sine celler og virker hardt. Leverceller (hepatocytter) virker under påvirkning, undergår endringer, og fra dette dør de. Jo lengre viruset C er i leveren, jo større antall celler dør. Over tid utvikler farlige sykdommer som fører til ondartet degenerasjon og død.
Infeksjon av leveren med denne typen virus kan ikke manifestere seg eksternt. I mange år eller flere tiår føler en smittet seg helt sunn, og bare en tilfeldig undersøkelse avslører ofte patologi. Ved donering av blod til hepatitt undersøkes en del av RNA (ribonukleinsyre) kjeden, som er en del av det humane genet (DNA). Resultatene av laboratorietester bør ikke brukes til selvbehandling, fordi dette bare er en indikator. Det nøyaktige bildet og ytterligere diagnose er bedre bestemt av legen.
Når ferdig: indikasjoner på forskning
I bekreftelse på HCV utføres PCR-analyse (polymerasekjedereaksjon). Studier av PCR bidrar til å finne patogenmaterialet i strukturen av RNA og foreskrive en effektiv terapi. Utnevnt i følgende tilfeller:
- påvisning av tegn på betennelse i leveren;
- screening studier for forebygging;
- undersøkelse av personer i kontakt
- diagnose av hepatitt av blandet opprinnelse (bestemmelse av hovedpatogenet);
- bestemme nivået på reproduksjonsaktivitet av viruset i kronisk form;
- levercirrhose;
- for å bestemme effektiviteten av den foreskrevne behandlingen.
Det er en kvalitativ og kvantitativ analyse av PCR. Kvantitativ PCR viser prosentandelen av RNA til virusbærere i blodet, og kvalitativ indikerer viral tilstedeværelse eller fravær. En positiv indikator for kvalitet (tilstedeværelse av hepatitt C RNA) trenger også kvantitativ forskning. Et høyt nivå av konsentrasjon av det forårsakende middelet av hepatitt C er forbundet med risikoen for overføring, det vil si infeksjon av andre. Lavt antall er bedre behandles. Mengden av RNA-virus i blodet er ikke relatert til intensiteten av sykdommen. PCR-analyse gjøres også ved interferonbehandling for å foreskrive varighet og kompleksitet i behandlingsforløpet.
Egenskaper av høy kvalitet PCR analyse for hepatitt C
En kvalitativ analyse med polymerasekjedereaksjonsindeksen er tildelt alle pasienter som har antistoffer mot hepatitt C i blodet. De som har vært syk og gjenopprettet, må ta testen igjen. Det anbefales å bestå testen for hepatitt B, da i en positiv konklusjon, og for hepatitt D. Også kvalitativt analysert reaksjon skal utføres i forbindelse med andre blodprøver. Analyser vil vise et komplett bilde av viral spredning.
Fra testresultatene vil bare en positiv test for hepatitt C være synlig eller negativ, det vil si tilstedeværelse eller fravær av et virus. Hvis utgangen er "detektert", er viruset og fortsetter å være aktivt. Betegnelsen "ikke oppdaget" indikerer fraværet av et virus eller dets lille mengde. Med denne indikatoren bør man huske på at analysens følsomhet for diagnostiske systemer er forskjellig, og at RNA hepatitt C fortsatt kan være i blodet, men ikke manifestert i analysen.
Spesielt sensitiv PCR-metode viser ultra hepatitt C selv i små mengder. En fluorescens hybridiseringsstudie brukes, som er mange ganger høyere enn standard PCR-systemer. Metoden brukes i flere tilfeller:
- mistenkte skjulte former for hepatitt C;
- PCR-diagnostikk bekreftet ikke patogenet, men det er antistoffer;
- i tilfelle gjenoppretting
- å oppdage tidlig infeksjon.
Dekoding analyse
PCR-dekodingen av HCV påvirker den endelige avgjørelsen når man foretar en diagnose, spesielt med ultrametod-metoden. Den største ulempen ved denne studien er streng overholdelse av sterile forhold for prøven og materialene. En liten avvik viser noen ganger unøyaktige analytiske konklusjoner, kompliserer diagnose og etterfølgende behandling. Analyse av PCR for bestemmelse av hepatitt-RNA viser ikke alltid selvtillit et bilde av sykdommen, noen ganger er unøyaktigheter tillatt, og i begge retninger.
Diagnostisering av hepatittvirus, det anbefales å bruke en omfattende undersøkelse.
Norm for indikatorer
Fraværet av JgM antistoffer mot viral hepatitt C i resultatene av studien regnes som normen i analysen av polymerasekjedereaksjonen. Samtidig viser funnene fra den serologiske analysen tilstedeværelsen av antistoffer mot C-viruset, og dette er også innenfor det normale området. En kvalitativ definisjon viser ikke intensiteten av sykdommen, det avslører bare årsaksmedlet til hepatitt C i RNA. Denne analysen gjentas etter behandling for å bekrefte den faktiske utvinningen.
avvik
Hvis JgM antistoffer mot HCV RNA er tilstede, indikerer dette en utviklingsinfeksjon. Sykdommen pågår samtidig akutt eller kronisk, manifestert i forskjellige stadier. Hvis en nedgang i antall antistoffer registreres, vil analysen indikere at resultatene av behandlingen ble oppnådd under utvinning. Det er bare svært sjeldne tilfeller av falske positiver som finnes i diagnosen. De finnes hos kvinner under graviditet og hos personer med andre smittsomme sykdommer.
Pcr for hepatitt i kvalitet
PCR-diagnostikk gjør det ikke bare mulig å bestemme tilstedeværelsen av hepatitt B-virus i blodet og dets etiologi, men også for å evaluere aktiviteten. Påvisning av viral belastning er spesielt viktig for valg av effektiv behandling, hvis den er for høy, så reduseres sannsynligheten for utvinning. Hva er kjernen i polymerasekjedereaksjonsmetoden?
Essensen av PCR-diagnostikk
Ved hepatitt utføres PCR for å sikre at diagnosen blir gjort. Ved hjelp av denne metoden kan du identifisere virusets DNA, samt bestemme mengden i blodet.
DNA-virus i blodet ved PCR-metoden for hepatitt kan påvises ved slutten av inkubasjonsperioden, på dette tidspunkt kan HBsAg detekteres mot bakgrunnen av et økt nivå av transaminaser, hvoretter HBeAg fremkommer.
Med en kvalitativ definisjon kan du nøyaktig fastslå diagnosen, det er eller det er ingen hepatitt. Normalt bør det ikke være noe DNA i blodet. Den kvantitative metoden tillater å bestemme intensiteten i utviklingen av sykdommen og reproduksjonen av viruset.
Analysen har en svært høy følsomhet og pålitelighet. Som biologisk materiale tar venøst blod. Takket være moderne teknologi kan PCR oppdage viruset i en konsentrasjon på 5 × 103-104 kopier / ml i blodet. Ifølge resultatene fra analysen, å vite normen, er det mulig å bedømme virusbelastningen og forutsi behandlingen.
Det er viktig! Det er virusets DNA bidrar til utviklingen av cirrose og andre kroniske leversykdommer.
DNA-deteksjon med PCR er nødvendig i følgende tilfeller:
Tviler på formuleringen av den endelige analysen etter testing. Bestemmelse av akutt stadium av sykdommen. Påvisning av latente former for hepatitt. Evaluering av effekt etter antiviral terapi.
Hvordan deklarere resultatene oppnådd etter PCR-diagnostikk?
PCR kvantitativ
Ved kvantitativ vurdering kan du ikke bare bestemme tilstedeværelsen av et virus, men også finne ut den virale belastningen hvis PCR viser et positivt resultat.
En kvantitativ metode er nødvendig for å finne ut slik informasjon:
Intensiteten av utviklingen av sykdommen. Effektiviteten av behandlingen. Utviklingen av resistens mot antivirale legemidler.
Kvantifisering er svært viktig når man foretar en diagnose av kronisk hepatitt. I dette tilfellet vil alle indikatorene ikke ligge innenfor det normale området. Transaminase-nivået vil bli økt, virusaktivitetsindeksen vil være mer enn 4, og virus-DNA-konsentrasjonen vil være over 105 kopier av DNA / ml. Hvis viruskonsentrasjonen er lavere og transaminase nivået er normalt, kan vi snakke om passiv bærer.
Før utnevnelse av antiviral behandling, er gjennomføringen av PCR-diagnostikk, nemlig kvantitativ undersøkelse, avgjørende for å bestemme virusbelastningen.
Gjør analysen hver 3. måned, og hvis virusbelastningen øker 10 ganger, så kan vi snakke om motstanden til viruset til behandling.
Kvantitativ analyse gir svært viktig informasjon, fordi du kan bestemme hvor mye patogenets DNA er i blodet. Jo større mengden er, jo større er viralbelastningen og jo mer alvorlig pasientens tilstand. Ved å redusere viral belastning etter behandling, kan man dømme effektiviteten. I noen tilfeller er PCR for hepatitt en indikasjon på ytterligere testing, for eksempel en leverbiopsi. Ved forhøyede nivåer av ALT utføres PCR. Dekryptering av tester er som følger: Hvis virusbelastningen er over 105 kopier av DNA / ml, og ALT-nivået overskrider normen, men ikke mer enn 2 ganger over et halvt år, trenger en slik pasient en biopsi. Ved sterk betennelse eller fibrose er antiviral behandling indikert. Hvis ALT-nivået overskrider normen med mer enn 2 ganger med høy viral belastning, foreskrives behandlingen umiddelbart uten tilleggsdiagnostikk.
Kun gode spesialister vil kunne dechifisere resultatene av kvantitativ PCR på riktig måte.
PCR-kvalitet
Kvalitativ analyse gjør det mulig å bestemme tilstedeværelsen av hepatitt B i blodet. Normalt bør det være fraværende. Med denne metoden kan du nøyaktig etablere diagnosen.
HPR-analyse av høy kvalitet gir et 100% nøyaktig resultat.
Ingen annen metode gir slike pålitelige data. I mer enn halvparten av tilfellene etter å ha bestått diagnosen, blir DNA av viruset detektert, i fravær av antigen. Det er svært viktig å etablere diagnosen ved den første fasen av sykdommen.
Det er bevist at hvis DNA i hepatitt B-viruset reagerer aktivt i menneskekroppen i to måneder, blir sykdommen kronisk. Hvis vi begynner å bekjempe viruset allerede i de første ukene etter infeksjon, er sjansene for en fullstendig gjenoppretting veldig høy.
Hvordan er dekoding av de oppnådde resultatene fra undersøkelsen ved hjelp av den kvalitative metoden?
Dekoding analysen er veldig enkel:
Normalt bør resultatet være negativt, det vil si at virusets DNA ikke ble detektert. Et positivt resultat indikerer tilstedeværelsen av hepatitt.
Analysen bidrar til å identifisere viruset, bestemme genotypen og starte behandling i tide. Svært ofte, i nærvær av DNA, sammen med en kvalitativ vurdering, utfører de også en kvantitativ.
Hvordan forberede seg på undersøkelsen?
Når du analyserer hepatitt ved hjelp av PCR-diagnostikk, tas blod fra en blodåre. Det er best å bli undersøkt om morgenen, siden blodet alltid skal doneres på tom mage (etter siste måltid skal minst 8 timer passere).
For at analysen skal være så pålitelig som mulig, må pasienten være oppmerksom på noen faktorer som kan påvirke sluttresultatet:
Før du donerer blod fra en vene, må du hvile i 20 minutter. I tillegg er analysen gitt på tom mage, så i ytterligere 12 timer kan du ikke drikke alkohol, røyk, leke sport og spise fettstoffer. Noen medisiner som pasienten må ta kan påvirke sluttresultatet. Laboratorietekniker skal være oppmerksom på tilfelle av narkotikabehandling. Hvis blodet må doneres til et barn under 5 år, så er det i dette tilfellet nødvendig å drikke det hvert 10. minutt, en halv time før diagnosen. på et glass kokt vann.
Det er svært viktig å gjennomgå PCR i en klinikk som har fungert bra. Faktisk, til tross for at PCR bestemmer tilstedeværelsen av et virus med en nøyaktighet på opptil 100%, kan dette tallet falle til 95%, hvis vi vurderer den menneskelige faktoren.
Ukvalifiserte teknikere eller dårlig rykte kan resultere i falske resultater.
HBV er et komplekst DNA-holdig virus og tilhører Hepadnaviridae-familien av Orthohepadnavirus-slekten.
Hepatitt B er en antroponotisk infeksjon, hovedsakelig med parenteral infeksjonsmekanisme, som kan forekomme i form av viral vogn, akutte og kroniske former og er preget av leverskade med mulig utvikling av akutt leversvikt, kronisk hepatitt, levercirrhose og primær leverkreft (hepatocellulært karcinom).
Infeksjon av menneskekroppen skjer gjennom direkte penetrering av HBV i blodet (med eventuelle invasive inngrep og ved transfusjon av blod og dets preparater), eller gjennom slimhinner og hud under fødsel, under seksuelle og tette husholdninger. En gang i leveren trenger HBV inn i hepatocytten, hvor den begynner å formere seg raskt.
Utviklingen av en smittsom prosess kan forekomme på to måter: replikative og integrerende. Den replikative formen av infeksjonen fører til utvikling av akutt eller kronisk hepatitt og levercirrhose, mens den integrerende formen fører til utvikling av "sunn" virusinfeksjon, inaktiv kronisk hepatitt, levercirrhose og primært hepatokarcinom.
Serologisk diagnose og prognose for HBV-infeksjon er basert på deteksjon av virusantigener og antistoffer mot det. Men som det viste seg, er det funnet nok mutantstammer (HBeAg-negativ) i populasjonen av hepatitt B-viruset, som ikke er påvist ved konvensjonelle serologiske test. Derfor er PCR-metoden for diagnose av HBV-infeksjon ekstremt viktig.
Kvalitativ og kvantitativ analyse av PCR for hepatitt C: negativ, positiv, transkripsjon
Hepatitt C er en viral leversykdom forårsaket av flavivirus HCV (fra det engelske ordet hepatitt C-virus), hvis struktur inneholder et ribonukleinsyremolekyl (RNA). RNA bærer virusets genetiske kode. Dens tilstedeværelse tillater analyse av PCR for hepatitt C.
Faren for HCV for en person ligger i det faktum at det såkalte serologiske vinduet (tiden mellom infeksjon og utseendet av en reaksjon fra immunsystemet) kan være ganske lang - fra flere uker til seks måneder.
Det registrerer ikke infeksjon og starter behandling i tide.
Avhengig av organismens individuelle egenskaper kan bæreren av HCV manifestere seg i en akutt form, så vel som oppstå som en kronisk sykdom som vil kreve en lang og kostbar behandling. Når antistoffer mot HCV oppdages, utføres en rekke laboratorietester, inkludert PCR for hepatitt C. Denne testen er utført for alle personer i hvis blodantistoffer mot HCV er funnet.
Hva er PCR-analyse?
Laboratorieanalyse av PCR for hepatitt C - studiet av biologisk materiale for å oppdage nærvær av flavavirus.
Polymerasekjedereaksjonen (som forkortelsen står for) viser den kvantitative verdien av kroppens virale lesjon, dets kvalitative egenskaper, samt genotypen av viruset som inneholder RNA.
På grunnlag av dem, samt på grunnlag av ytterligere analyser, bestemmes metoden og varigheten av behandlingen, samt den epidemiologiske faktoren (grad av risiko for overføring til en annen bærer).
Hva er Hepatitt C RNA-analyse?
Hepatitt C-PCR kalles også RNA-analyse (HCV RNA), fordi Flavaviruset inneholder en RNA-partikkel med en virionsstørrelse på 30-60 nm. En av egenskapene til denne mikroorganismen er en høy tilbøyelighet til mutasjoner.
Hver av virusens underarter (genotyper) har en annen motstand, noe som medfører forskjellige behandlingsmetoder og arten av den videre prognosen for pasienten.
Biologisk materiale (venøst blod) er gitt på tom mage og er som regel undersøkt med realtids-PCR-metoden (svært sensitiv sanntidsdiagnostikk med en lavere deteksjonsgrense på 15 IE / ml ved bruk av lukkede automatiserte systemer).
Det finnes andre tester, for eksempel COBAS AMPLICOR med en følsomhet på 50-100 IE / ml. For enhver laboratorietest er terskelen for følsomhet viktig, dvs. Reagens evne til å oppdage minimal konsentrasjon av virus i biologisk materiale.
Typer av analyse for hepatitt C ved PCR
Hepatitt C PCR inneholder tre viktige komponenter:
- kvalitativ analyse;
- kvantitativ analyse;
- genotyping.
Disse tester tillater deg å bestemme arten av viremia, samt patogenens genetiske egenskaper. Avhengig av diagnostikkens følsomhet utføres studien en gang, og noen ganger utføres en andre test med et mer sensitivt reagens for å bekrefte eller finjustere resultatene.
Høykvalitets PCR av hepatitt C
Hepatitt C PCR-analyse kvalitativ er et annet vanlig navn for analysen av polymerasekjedereaksjonen. Standard følsomhet av testen, som gjør det mulig å oppdage tilstedeværelsen av virale lesjoner, ligger i området 10-500 IE / ml.
En negativ PCR-analyse for hepatitt C viser at viruskonsentrasjonen i pasientens blod er under følsomhetstrømen til diagnosesystemet.
Hvis høyverdig PCR ga svaret "ikke oppdaget", så for etterfølgende behandling er det viktig å finne ut av terskelen for følsomheten til reagenset.
Proteinfraksjoner til flavavirus fremkommer mye senere.
Hepatitt C Kvantitativ PCR
PCR hepatitt C kvantitativ er en indikator på virusbelastning, som reflekterer nivået av RNA-konsentrasjon av flavavirus i kroppen. Dette er en indikator som viser hvor mange fragmenter av virus RNA som finnes i kubikkcentimeter av blod. Resultatene av PCR av hepatitt C RNA i en kvantitativ test i det konvensjonelle systemet er indikert i internasjonale enheter per milliliter (IE / ml) og kan registreres på forskjellige måter, for eksempel 1,7 millioner eller 1,700,000 IE / ml.
Kvantitativ PCR-diagnostikk av hepatitt C er foreskrevet for pasienter før behandling med antiviralbehandling, og i uke 12 i behandling, for å evaluere resultatene av den valgte metoden for behandling av HCV. Viral belastning gjør det mulig å bestemme tre viktige indikatorer for sykdommen:
- smittsomhet, dvs. graden av risiko for virusoverføring fra en bærer til en annen (jo høyere konsentrasjonen av flavavirus-RNA, desto større er sannsynligheten for å infisere en annen person, for eksempel gjennom seksuell kontakt);
- metode og effektivitet av behandlingen;
- Varighet og prognose for antiviral terapi (jo høyere viral belastning, jo lenger behandling varer).
Kvantitativ PCR-diagnostikk av hepatitt C er avhengig av type laboratorietest og terskelen for følsomheten. Den nedre grensen til normen anses å være indikatoren opptil 600.000 IE / ml, gjennomsnittsverdien er innenfor 600.000-700.000 IE / ml. Resultater på 800.000 IE / ml og over anses høye nivåer av RNA-holdig virus.
genotyping
På grunn av den høye mutasjonsaktiviteten til HCV i naturen, er det viktig å identifisere hvilken virusgenotype som er i pasientens blod ved testing. Totalt har 11 genotyper av hepatitt C-viruset blitt registrert på planeten, som inkluderer mange underarter (undertyper). På territoriet i Russland distribuert 1,2 og 3.
Hepatitt C PCR RNA sammen med genotyping er en svært viktig del av analysen siden gjør det mulig for legen å bestemme motstanden (motstanden) av viruset, velg de aktuelle legemidlene og foreskrive et behandlingsforløp.
Genotyping lar deg også indirekte bestemme tilstanden i leveren. For eksempel er 3 genotypen av HCV ofte ledsaget av steatosis, hvor fett akkumuleres i organets celler.
En blodprøve for PCR for hepatitt C bør produsere en figur som bestemmer genotypen. Laboratorie svar kan si "ikke skrevet" - og det betyr at et virus er i humant blod som ikke oppdages av testsystemet. Dette kan tyde på at genotypen ikke er typisk for et gitt geografisk område. I dette tilfellet bør du gjenta analysen med en høyere følsomhet for diagnosesystemet.
Dekoding av PCR-analyse for hepatitt C
Testen for hepatitt C PCR kvantitativ dekryptering kan baseres på dataene ovenfor. Når man får resultater fra laboratorietester, skrives vanligvis følgende data:
- "Found" / "not found" (høy kvalitet PCR for hepatitt C);
- antall RNA-holdige fraksjoner, for eksempel 831,680 ME / ml (kvantitativ PCR-analyse);
- figuren som bestemmer genotypen for HCV, for eksempel - 1, 2, 3, 4;
- Navnet på testen er oftest sanntid.
Det viktigste ved å dekode analysen av PCR for hepatitt C er andre leddet, som viser virusbelastningen, som bestemmer prognosen, metoden og varigheten av behandlingen.
Hvis PCR-testen for hepatitt C er negativ, og ELISA er positiv - hva betyr dette?
For å dekode laboratorietester, er det viktig å kontakte en hepatolog eller en smittsom sykdomsspesialist som vil forklare informasjonen som er oppnådd i henhold til type diagnostisk system og dens følsomhetsgrense. I medisinsk praksis er det mange data om blodprøver som kan villede en person uten medisinsk utdanning.
For eksempel, hvis testen for hepatitt C-PCR er negativ, og ELISA er positiv, kan det bety at det ikke er noen HCV i pasientens blod for øyeblikket, men tidligere har han hatt en akutt form for hepatitt C. Det antas at en positiv enzymbundet immunosorbentanalyse (ELISA) viser at Det er antistoffer i blodet som er produsert etter invasjonen av viruset tidligere. Men i moderne medisinsk praksis anses ELISA-analyse å være utilstrekkelig pålitelig og gir ofte ujevne resultater, slik at leger bruker det som en primær screening. Ved diagnostisering av en sykdom styres spesialister nettopp ved PCR-test.
Nyttig video
Følgende video gir en svært detaljert og interessant beskrivelse av essensen av PCR-metoden, hvordan analysen utføres:
konklusjon
For analyse av PCR for hepatitt C, er vanligvis venøs blod tatt. Ofte er det et dobbelt inntak av biologisk materiale - for ELISA, og direkte for PCR-test. For riktige testresultater kreves det i samsvar med grunnleggende regler for laboratorieprøvetaking av biologisk materiale:
- Blod for analyse er gitt i første halvdel av dagen på tom mage;
- mellom måltid og blodprøver bør ta minst 8 timer;
- alkohol og stekt mat bør også utelukkes før testen utføres;
- i løpet av dagen før du donerer blod, er det nødvendig å unngå høy fysisk anstrengelse.
Blodtestresultater er vanligvis klare neste dag.
Hepatitt B PCR
PCR-diagnostikk gjør det ikke bare mulig å bestemme tilstedeværelsen av hepatitt B-virus i blodet og dets etiologi, men også for å evaluere aktiviteten. Påvisning av viral belastning er spesielt viktig for valg av effektiv behandling, hvis den er for høy, så reduseres sannsynligheten for utvinning. Hva er kjernen i polymerasekjedereaksjonsmetoden?
Essensen av PCR-diagnostikk
DNA-virus i blodet ved PCR-metoden for hepatitt kan påvises ved slutten av inkubasjonsperioden, på dette tidspunkt kan HBsAg detekteres mot bakgrunnen av et økt nivå av transaminaser, hvoretter HBeAg fremkommer.
- Med en kvalitativ definisjon kan du nøyaktig fastslå diagnosen, det er eller det er ingen hepatitt. Normalt bør det ikke være noe DNA i blodet.
- Den kvantitative metoden tillater å bestemme intensiteten i utviklingen av sykdommen og reproduksjonen av viruset.
Analysen har en svært høy følsomhet og pålitelighet. Som biologisk materiale tar venøst blod. Takket være moderne teknologi kan PCR oppdage viruset i en konsentrasjon på 5 × 10 3 -10 4 kopier / ml i blodet. Ifølge resultatene fra analysen, å vite normen, er det mulig å bedømme virusbelastningen og forutsi behandlingen.
Det er viktig! Det er virusets DNA bidrar til utviklingen av cirrose og andre kroniske leversykdommer.
DNA-deteksjon med PCR er nødvendig i følgende tilfeller:
- Tviler på formuleringen av den endelige analysen etter testing.
- Bestemmelse av akutt stadium av sykdommen.
- Påvisning av latente former for hepatitt.
- Evaluering av effekt etter antiviral terapi.
Hvordan deklarere resultatene oppnådd etter PCR-diagnostikk?
PCR kvantitativ
Ved kvantitativ vurdering kan du ikke bare bestemme tilstedeværelsen av et virus, men også finne ut den virale belastningen hvis PCR viser et positivt resultat.
En kvantitativ metode er nødvendig for å finne ut slik informasjon:
- Intensiteten av utviklingen av sykdommen.
- Effektiviteten av behandlingen.
- Utviklingen av resistens mot antivirale legemidler.
Kvantifisering er svært viktig når man foretar en diagnose av kronisk hepatitt. I dette tilfellet vil alle indikatorene ikke ligge innenfor det normale området. Transaminase-nivået vil bli økt, virusaktivitetsindeksen vil være mer enn 4, og virus-DNA-konsentrasjonen vil være over 105 kopier av DNA / ml. Hvis viruskonsentrasjonen er lavere og transaminase nivået er normalt, kan vi snakke om passiv bærer.
Før utnevnelse av antiviral behandling, er gjennomføringen av PCR-diagnostikk, nemlig kvantitativ undersøkelse, avgjørende for å bestemme virusbelastningen.
Gjør analysen hver 3. måned, og hvis virusbelastningen øker 10 ganger, så kan vi snakke om motstanden til viruset til behandling.
- Kvantitativ analyse gir svært viktig informasjon, fordi du kan bestemme hvor mye patogenets DNA er i blodet. Jo større mengden er, jo større er viralbelastningen og jo mer alvorlig pasientens tilstand.
- Ved å redusere viral belastning etter behandling, kan man dømme effektiviteten.
- I noen tilfeller er PCR for hepatitt en indikasjon på ytterligere testing, for eksempel en leverbiopsi. Ved forhøyede nivåer av ALT utføres PCR. Dekryptering av tester er som følger: Hvis virusbelastningen er mer enn 10 5 kopier av DNA / ml, og ALT-nivået overskrider normen, men ikke mer enn 2 ganger i løpet av et halvt år, trenger en slik pasient en biopsi. Ved sterk betennelse eller fibrose er antiviral behandling indikert. Hvis ALT-nivået overskrider normen med mer enn 2 ganger med høy viral belastning, foreskrives behandlingen umiddelbart uten tilleggsdiagnostikk.
Kun gode spesialister vil kunne dechifisere resultatene av kvantitativ PCR på riktig måte.
PCR-kvalitet
Kvalitativ analyse gjør det mulig å bestemme tilstedeværelsen av hepatitt B i blodet. Normalt bør det være fraværende. Med denne metoden kan du nøyaktig etablere diagnosen.
HPR-analyse av høy kvalitet gir et 100% nøyaktig resultat.
Ingen annen metode gir slike pålitelige data. I mer enn halvparten av tilfellene etter å ha bestått diagnosen, blir DNA av viruset detektert, i fravær av antigen. Det er svært viktig å etablere diagnosen ved den første fasen av sykdommen.
Det er bevist at hvis DNA i hepatitt B-viruset reagerer aktivt i menneskekroppen i to måneder, blir sykdommen kronisk. Hvis vi begynner å bekjempe viruset allerede i de første ukene etter infeksjon, er sjansene for en fullstendig gjenoppretting veldig høy.
Hvordan er dekoding av de oppnådde resultatene fra undersøkelsen ved hjelp av den kvalitative metoden?
Dekoding analysen er veldig enkel:
- Normalt bør resultatet være negativt, det vil si at virusets DNA ikke ble detektert.
- Et positivt resultat indikerer tilstedeværelsen av hepatitt.
Analysen bidrar til å identifisere viruset, bestemme genotypen og starte behandling i tide. Svært ofte, i nærvær av DNA, sammen med en kvalitativ vurdering, utfører de også en kvantitativ.
Hvordan forberede seg på undersøkelsen?
Når du analyserer hepatitt ved hjelp av PCR-diagnostikk, tas blod fra en blodåre. Det er best å bli undersøkt om morgenen, siden blodet alltid skal doneres på tom mage (etter siste måltid skal minst 8 timer passere).
For at analysen skal være så pålitelig som mulig, må pasienten være oppmerksom på noen faktorer som kan påvirke sluttresultatet:
- Før du donerer blod fra en vene, må du hvile i 20 minutter.
- I tillegg er analysen gitt på tom mage, så i ytterligere 12 timer kan du ikke drikke alkohol, røyk, leke sport og spise fettstoffer.
- Noen medisiner som pasienten må ta kan påvirke sluttresultatet. Laboratorietekniker skal være oppmerksom på tilfelle av narkotikabehandling.
- Hvis blodet må doneres til et barn under 5 år, så er det i dette tilfellet nødvendig å drikke det hvert 10. minutt, en halv time før diagnosen. på et glass kokt vann.
Det er svært viktig å gjennomgå PCR i en klinikk som har fungert bra. Faktisk, til tross for at PCR bestemmer tilstedeværelsen av et virus med en nøyaktighet på opptil 100%, kan dette tallet falle til 95%, hvis vi vurderer den menneskelige faktoren.
Ukvalifiserte teknikere eller dårlig rykte kan resultere i falske resultater.
Studier av hepatitt B-viruset (ELISA og PCR)
Hepatitt B-virus "s" antigen (HBsAg)
Hepatitt B overflateantigen i serum er normalt fraværende.
Påvisning av hepatitt B overflateantigen (HBsAg) i serum bekrefter akutt eller kronisk infeksjon med hepatitt B-viruset.
Ved akutt sykdom detekteres HBsAg i serum i de siste 1-2 ukene av inkubasjonsperioden og de første 2-3 ukene i klinisk periode. Sirkulasjon av HBsAg i blodet kan være begrenset til noen dager, så du bør streve for en tidlig innledende undersøkelse av pasienter. ELISA-metoden gjør det mulig å oppdage HBsAg hos mer enn 90% av pasientene. Hos nesten 5% av pasientene oppdager de mest sensitive undersøkelsesmetodene ikke HBsAg, i slike tilfeller er etiologien for viral hepatitt B bekreftet ved tilstedeværelse av anti-HBcAg JgM eller PCR.
Konsentrasjonen av HBsAg i serum i alle former for hepatitt B-alvorlighetsgrad ved sykdommens høyde har et betydelig spekter av svingninger, men det er et visst mønster: I den akutte perioden er det et invers forhold mellom serum HBsAg og alvorlighetsgrad av sykdommen.
Høye konsentrasjoner av HBsAg er mer vanlige i milde og moderate former av sykdommen. I alvorlige og ondartede former er konsentrasjonen av HBsAg i blodet ofte lav, og i 20% av pasientene med alvorlig form og i 30% med et malignt antigen i blodet, kan det ikke oppdages i det hele tatt. Utseendet på denne bakgrunn hos pasienter med antistoffer mot HBsAg betraktes som et ugunstig diagnostisk tegn; Det er bestemt i ondartede former for hepatitt B.
I den akutte løpet av hepatitt B, reduseres konsentrasjonen av HBsAg i blodet gradvis til fullstendig forsvunnelse av dette antigenet. HBsAg forsvinner hos de fleste pasienter innen 3 måneder fra begynnelsen av akutt infeksjon.
En reduksjon i konsentrasjonen av HBsAg med mer enn 50% ved slutten av den tredje uken av den akutte perioden, som regel, indikerer en tett fullføring av infeksjonsprosessen. Vanligvis hos pasienter med høy konsentrasjon av HBsAg ved sykdommens høyde, det oppdages i blodet i flere måneder.
Hos pasienter med lave konsentrasjoner av HBsAg forsvinner mye tidligere (noen ganger flere dager etter sykdommens begynnelse). Generelt varierer tidspunktet for deteksjon av HBsAg fra flere dager til 4-5 måneder. Maksimal deteksjonsperiode for HBsAg med en jevn løpet av akutt hepatitt B, overstiger ikke 6 måneder fra sykdomsbegyndelsen.
HBsAg kan finnes hos friske mennesker, som regel i profylaktiske eller utilsiktede studier. I slike tilfeller blir andre markører av viral hepatitt B, anti-HBcAg JgM, anti-HBcAg JgG og anti-HBeAg undersøkt, og leverfunksjonen studeres.
Når negative resultater trengs, gjentas studier på HBsAg.
Hvis gjentatte blodprøver i mer enn 3 måneder avslører HBsAg, klassifiseres denne pasienten som en kronisk pasient med viral hepatitt B.
Tilstedeværelsen av HBsAg er ganske vanlig. Det er mer enn 300 millioner luftfartsselskaper i verden, og i vårt land er det rundt 10 millioner transportører.
Oppsigelse av HBsAg-sirkulasjon med etterfølgende serokonversjon (dannelse av anti-HBs) indikerer alltid gjenoppretting - sanering av kroppen.
En blodprøve for HBsAg brukes til følgende formål:
- inkubasjonsperiode;
- akutt sykdom;
- tidlig utvinning;
- vedvarende kronisk hepatitt;
- levercirrhose;
for screening og identifisering av pasienter i risikogrupper:
Evaluering av forskningsresultater
Resultatene av studien uttrykkes kvalitativt - positivt eller negativt. Et negativt resultat indikerer mangel på serum HBsAg. Et positivt resultat - identifisering av HBsAg indikerer en inkubasjon eller akutt periode med akutt viral hepatitt B, så vel som hos kronisk viral hepatitt B.
Antistoffer mot nukleært antigen av hepatitt B-virus JgG (anti-HBcAg JgG)
Normalt er serum anti-HBcAg fraværende i serum.
Hos pasienter med anti-HBcAg forekommer JgG i den akutte perioden med viral hepatitt B og vedvarer hele livet. Anti-HBcAg JgG er den ledende markøren for overført HBV.
Blodprøver for anti-HBcAg JgG brukes til å diagnostisere:
Evaluering av forskningsresultater
Resultatet av studien er uttrykt kvalitativt - positivt eller negativt. Et negativt resultat indikerer fraværet av serum anti-HBcAg JgG. Et positivt resultat - identifiseringen av anti-HBcAg JgG indikerer akutt infeksjon, konvalescens eller tidligere overført viral hepatitt B.
Hepatitt B-virus "e" antigen (HBeAg)
Normalt er HBeAg i serum fraværende.
HBeAg kan detekteres i serum hos de fleste pasienter med akutt viral hepatitt B. Det forsvinner vanligvis i blodet før HBs-antigenet. Et høyt nivå av HBeAg i de første ukene av sykdommen eller påvisning av det i mer enn 8 uker gir grunn til å mistenke en kronisk infeksjon.
Dette antigenet oppdages ofte i kronisk aktiv hepatitt av viral etiologi. Av spesiell interesse for definisjonen av HBeAg er det faktum at dets deteksjon karakteriserer den aktive replikative fase av den smittefarlige prosessen. Det er fastslått at høye konsentrasjoner av HBeAg korresponderer med høy DNA-polymeraseaktivitet og karakteriserer den aktive replikasjon av viruset.
Tilstedeværelsen av HBeAg i blodet indikerer sin høye infektivitet, dvs. Tilstedeværelsen av aktiv hepatitt B-infeksjon i kroppen blir undersøkt, og detekteres kun i nærvær av HBs-antigen i blodet. Hos pasienter med kronisk aktiv hepatitt brukes antivirale legemidler kun når HBeAg påvises i blodet. HBeAg - antigen - en markør for den akutte fasen og replikasjon av hepatitt B-viruset.
En blodprøve for tilstedeværelse av HBe-antigen brukes til å diagnostisere:
Evaluering av forskningsresultater
Resultatet av studien er uttrykt kvalitativt - positivt eller negativt. Et negativt resultat indikerer mangel på serum HBeAg. Et positivt resultat - detektering av HBeAg indikerer en inkubasjon eller akutt periode med akutt viral hepatitt B eller den fortsatte replikasjonen av viruset og infeksjonen hos pasienten.
Antistoffer mot antigenet "e" av hepatitt B-viruset (anti-HBeAg)
Anti-HBeAg i serum er normalt fraværende. Utseendet til anti-HBeAg-antistoffer indikerer vanligvis intensiv fjerning fra kroppen av hepatitt B-viruset og liten infeksjon av pasienten.
Disse antistoffene opptrer i den akutte perioden og varer ved opptil 5 år etter infeksjonen. Ved kronisk vedvarende hepatitt er anti-HBeAg funnet i pasientens blod sammen med HBsAg. Serokonversjon, dvs. Overgangen av HBeAg til anti-HBeAg, med kronisk aktiv hepatitt, er oftere prognostisk gunstig, men den samme serokonversjonen forbedrer ikke prognosen for alvorlig cirrotisk levertransformasjon.
Blodprøver for tilstedeværelse av anti-HBeAg brukes i følgende tilfeller i diagnosen av viral hepatitt B:
Evaluering av forskningsresultater
Resultatet av studien er uttrykt kvalitativt - positivt eller negativt. Et negativt resultat indikerer fraværet av antistoffer mot HBeAg i serum. Et positivt resultat er deteksjon av antistoffer mot HBeAg, noe som kan indikere begynnelsestrinnet av akutt viral hepatitt B, den akutte infeksjonsperioden, tidlig stadium av konvalescens, konvalescens, nylig overført viral hepatitt B eller vedvarende viral hepatitt B.
Kriteriene for tilstedeværelse av kronisk hepatitt B er:
Deteksjon av hepatitt B-virus ved PCR (kvalitativt)
Hepatitt B-virus i blodet er normalt fraværende.
Den kvalitative bestemmelsen av hepatitt B-viruset ved PCR-metoden i blodet gjør det mulig å bekrefte tilstedeværelsen av viruset i pasientens kropp og derved fastslå sykdommens etiologi.
Denne studien gir nyttig informasjon for diagnostisering av akutt viral hepatitt B i inkubasjon og tidlig utviklingsstadier av sykdommen, når pasientens viktigste serologiske markører i blodet kan være fraværende. Serum viralt DNA påvises hos 50% av pasientene i fravær av HBeAg. Den analytiske følsomheten til PCR-metoden er ikke mindre enn 80 viruspartikler i 5 μl, den siste DNA-deteksjonsprøven, spesifisitet - 98%.
Denne metoden er viktig for å diagnostisere og overvåke løpet av kronisk HBV. Ca 5-10% av tilfeller av cirrhosis og andre kroniske leversykdommer er forårsaket av kronisk bærer av hepatitt B-virus. Markører av aktiviteten til slike sykdommer er tilstedeværelsen av HBeAg og DNA av hepatitt B-virus i blodet.
PCR-metoden lar deg bestemme DNA fra hepatitt B-viruset i blodet både kvalitativt og kvantitativt. Det fastlagte fragmentet i begge tilfeller er den unike DNA-sekvensen av genet for det strukturelle protein i hepatitt B-viruset.
Hepatitt B-virus DNA-deteksjon i biomaterialer ved bruk av PCR er nødvendig for:
Forsvinnelsen av hepatitt B-virus DNA fra blodet er et tegn på effektiviteten av behandlingen
Påvisning av hepatitt B-virus ved PCR (kvantitativ)
Denne metoden gir viktig informasjon om intensiteten av sykdomsutviklingen, effektiviteten av behandlingen og utviklingen av resistens mot aktive stoffer.
For diagnostisering av viral hepatitt ved PCR i serum, brukes testsystemer, hvor følsomheten er 50-100 eksemplarer i prøven, som tillater deteksjon av viruset i en konsentrasjon på 5 x 10 ^ 3 -10 ^ 4 kopier / ml. PCR i viral hepatitt B er absolutt nødvendig for å bedømme viral replikasjon.
Serum viralt DNA påvises hos 50% av pasientene i fravær av HBeAg. Serum, lymfocytter og hepatobioptater kan tjene som materiale for å detektere DNA fra hepatitt B-viruset.
- Vurdering av nivået av viremia er som følger:
- mindre enn 2,10 ^ 5 kopier / ml (mindre enn 2,10 ^ 5 IE / ml) - lav viremi;
- fra 2,10 ^ 5 kopier / ml (2,10 ^ 5 IE / ml) til 2,10 ^ 6 kopier / ml (8,10 ^ 5 IE / ml) - medium viremi;
- mer enn 2,10 ^ 6 kopier / ml - høy viremi.
Det er et forhold mellom utfallet av akutt viral hepatitt B og konsentrasjonen av HBV DNA i pasientens blod. Med lavt nivå av viremia er prosessen med kronisering av infeksjonen nær null, med gjennomsnitt - prosessen er kronet hos 25-30% av pasientene, og med høyt nivå av viremia blir akutt viral hepatitt B oftest kronisk.
Indikasjonene for behandling av kronisk HBV interferon-alfa bør betraktes som tilstedeværelse av markører med aktiv viral replikasjon (deteksjon av HBV HBV, HBeAg og HBV DNA i serum i løpet av de foregående 6 månedene.).
Kriteriene for evaluering av effektiviteten av behandlingen er forsvinden av HBeAg og HBV DNA i blodet, som vanligvis ledsages av normalisering av transaminase nivåer og langvarig remisjon av sykdommen, HBV DNA forsvinner fra blodet ved den femte behandlingsmåneden hos 80% av pasientene. Å redusere nivået av viremia med 85% eller mer innen tredje dag fra starten av behandlingen sammenlignet med baseline er et raskt og forholdsvis nøyaktig kriterium for å forutsi effektiviteten av behandlingen.