Laboratoriediagnostisering av viral hepatitt C, B, A

Share Tweet Pin it

Viral hepatitt er en smittsom inflammatorisk sykdom i leveren, den vanligste patologien i verden blant andre leverskader. Avhengig av typen viral hepatitt er diagnosen av sykdommen basert på kliniske symptomer og laboratorietester. En viktig rolle er spilt av en nøye uttalt historie av sykdommen og en epidemiologisk historie. Det finnes flere former for viral hepatitt, tatt i betraktning typen av patogen, kliniske manifestasjoner, sykdomens sykdom og alvorlighetsgrad. Laboratoriediagnostisering av viral hepatitt er i mange tilfeller den eneste metoden for nøyaktig å bestemme sykdommen. For tiden identifisert og studerte flere typer virus med hepatotrope effekter (A, B, C, D, E), noe som medfører et lignende klinisk bilde. På grunn av mangel på symptomer og vanskeligheten med å diagnostisere hepatitt C, regnes det som det vanskeligste av alle kjente arter.

Viral hepatitt A

Det har en fecal - oral overføring, noe som gjør det til en utbredt infeksjon. Diagnostiserende hepatitt A er ikke vanskelig. Inkubasjonsperioden er relativt kort - fra 7 til 50 dager; preget av et akutt utbrudd: høy feber, markert asthenisk syndrom, smerte i alle leddene - klinisk ligner influensa. Sykdomsvarighet - 1 måned. Mild sykdom krever noen ganger ikke spesielle terapeutiske tiltak, det er tilfeller av selvhelbredelse.

Viral hepatitt B

For en subklinisk kurs er laboratoriediagnose av hepatitt B den eneste nøyaktige metoden for å verifisere en diagnose - virusets antigen og antistoffer mot patogenproteinet og HBV DNA bestemmes i blodet. Fremgangsmåter for overføring:

  • parenteral - gjennom blodet;
  • sex - gjennom sperma;
  • vertikal: fra mor til foster (viruset overføres ikke til babyen gjennom morsmelk).

Infeksjonen kommer inn i kroppen ved bruk av skitne sprøyter (bruk av en enkelt nål av narkomaner), gjennom instrumentene (under operasjon, tatovering, akupunktur, ørepiercing, manikyr, pedikyr) og blodtransfusjon. Den latente perioden er fra 2 måneder til seks måneder. Symptomer ligner påvirkningen av viral hepatitt A: Et influensaliknende syndrom utvikler seg, det er vondt over hele kroppen og i leddene, stor svakhet, ubehag. Noen ganger forekommer utslett. Prognosen for akutt hepatitt er relativt gunstig: gjenoppretting forekommer i 80% av tilfellene. Den subkliniske formen av sykdommen blir ofte kronisk, det er sjelden mulig å oppnå en fullstendig kur i slike tilfeller.

På samme tid, i mange tilfeller av sykdommen, oppdages hepatitt B-satellitten - viruset D (delta), som forårsaker viral hepatitt D og forverrer løpet av den underliggende sykdommen.

Viral hepatitt E er lik i kliniske symptomer til HAV, men har en gradvis utbrudd og er langt mer farlig for gravide kvinner.

Manifestasjoner av HCV

Laboratoriediagnostisering av hepatitt C (HCV) i laboratoriet er spesielt viktig, fordi ca. 3% av verdens befolkning er infisert med det. Hvert år øker forekomsten - dette er knyttet til en jevn økning i narkotikamisbruk i verden.

Advarsel! Viral hepatitt C er blant de mest farlige og alvorlige blant de kjente formene av smittsomme lesjoner i leveren. Det kalles den "milde morderen" på grunn av det subkliniske kurset i lang tid, og deretter et raskt resultat til cirrhose med mulig dødelig utgang. Kombinasjonen av HCV med andre former for smittsom hepatitt forverrer signifikant sykdomsforløpet og akselererer døden.

Akutt HCV er asymptomatisk og diagnostiseres derfor sjelden. Hvis det er mulig å identifisere sykdommen i denne fasen, da behandling med rett tid begynner å bli behandlet med 20%, kan det oppstå utvinning.

HCV observeres oftest i kronisk form, i sine sena stadier. Chroniseringsprosessen skjer i 50% av tilfellene.

Med asymptomatisk transport av viruset C, blir leveren celler gradvis skadet, fibrose utvikler seg. Videre, hvis rettidig behandling ikke utføres, øker risikoen for skrumplever eller leverkreft.

Diagnose av viral hepatitt i noen form er basert på definisjonen av:

  • patogen og dets replikasjon;
  • infeksjonsmarkører.

Diagnostiske metoder inkluderer immunokjemiske og molekylære biologiske reaksjoner, som avslører:

  • patogenantigener;
  • antistoffer mot viruset;
  • nukleinsyrer.

Strukturen av viruset C

C (BC) -viruset har enkeltstrenget RNA i dens genom. Han er den eneste blant de forårsakende midlene av viral hepatitt, som har en slik struktur. Både transportøren og pasienten kan ikke gjette om viruset de har. For å identifisere patologi med en uklar diagnose er det derfor nødvendig å gjennomføre en rekke studier og diagnostiske tester.

Genomet av virus C (dets RNA) består av 10 000 nukleotidbaser. Slike høye heterogeniteter bestemmer egenskapene til HCV. I studien av RNA-nukleotider viste betydelige forskjeller i deres struktur. Med tanke på de oppdagede strukturelle egenskapene er det opprettet en HCV-klassifisering, ifølge hvilken følgende skiller seg ut:

  • alternativer (det er 6 - 9);
  • subtyper;
  • genotyper.

Noen av dem finnes i alle land i verden, uten unntak, noen lokalt i enkelte regioner. Når C-viruset kommer inn i kroppen, settes det inn i nukleotidkjeden av RNA-molekylet. Den muterer hele tiden (modifisert), og en person kan umiddelbart bli en bærer av 50 subtyper av en enkelt virusgenotype. Immunsystemet følger ikke med rask mutasjon: Antistoffer produseres for en virusgruppe, sykdommen blir kronisk.

Definisjon av virus C

Diagnostisering av HCV er blitt en realitet med advent av molekylærbiologi. Dette forklares av det ekstremt lave innholdet av viruset i blodet, som ikke tillater isolering av antigenene ved tidligere tilgjengelige metoder.

Hvis det antas at HCV er antatt, er laboratoriediagnosen rettet mot å bestemme:

  • antistoffer (Ig G, Ig M) ved ELISA (enzymbundet immunosorbentanalyse);
  • RNA-virus ved bruk av PCR (polymerasekjedereaksjon).

Advarsel! Hepatitt C serologiske markører er RNA - HCV og antistoffer som dannes i kroppen.

PCR - Definisjon av hepatitt C-virus

RNA - HCV tilhører de tidlige markørene av HCV: dets utseende i blodet forekommer 10-12 dager etter infeksjon, det vil si mye tidligere enn økningen i aminotransferaser (AST, ALT, GGT). Påvisning av RNA - HCV indikerer aktiv replikasjon (reproduksjon) av viruset. Dette er "gullstandarden" av diagnosen, fordi den klargjør og bekrefter diagnosen selv i løpet av perioden når symptomene på sykdommen er praktisk talt fraværende. PCR bør utføres for å overvåke resultatene av ELISA. Det utføres i kvalitative og kvantitative versjoner.

Viral belastning anses høy med PCR> 800 tusen IE / ml eller 2 millioner eksemplarer / ml; lav - med PCR

Advarsel! PCR er ikke bare kvalitativ analyse (deteksjon av RNA-virus), men bestemmer også antall kopier av RNA i 1 ml blod. Det spiller en viktig rolle for å foreskrive effektiv behandling og evaluering av suksess i terapi. Hvis RNA av virus C detekteres i blodplasmaet, indikerer dette en akutt fase av sykdommen. Omfanget av leverskade og spredning av patologiske forandringer - fibrose og betennelse - er funnet ut etter en biopsi. Denne metoden er den mest informative og pålitelige i diagnosen. Behandling er helt ufarlig for pasienten og varer noen få sekunder.

ELISA - bestemmelse av antistoffer mot viruset

Menneskeimmunsystemet, når det inntas av et smittsomt middel, produserer antistoffer (Ig G, Ig M) til patogenet. De resulterende immunoglobuliner oppretter et sterkt kompleks med et fremmed protein (med et virusantigen), hvor de kvantitative og kvalitative parametrene bestemmes under ELISA. Det refererer til en indirekte undersøkelsesmetode: Under testen er det ikke viruset som oppdages, men en organismer immunrespons til det invaderende infeksjonsmiddelet forekommer. ELISA utføres for tidlig diagnose, observasjon av prosessen over tid.

Antistoffer oppdages hos 80% av de som er infisert med bare 5-6 uker etter sykdomsstart, i 90% etter 12 uker. Noen ganger gir disse analysene falske positive svar. For slike tilfeller er det spesielle tester - spektrumet av proteiner av antistoffer bestemmes ved rekombinant immunoblotting.

For å oppnå pålitelige resultater utføres screening med PCR og ELISA to ganger med en viss tidsperiode. Tidsperioden er som regel 6 måneder.

Observasjonstaktikk

For å avklare aktiviteten til prosessen i leveren, for å bestemme taktikk for behandling, er levertestene bestemt:

  • blodtransaminaser (ALT, AST, GGT);
  • totalt bilirubin og dets fraksjoner;
  • alkalisk fosfatase (alkalisk fosfatase);
  • totalt protein med fraksjoner.

Avhengig av resultatene fra laboratorieforskningen, brukes ulike taktikker for pasientledelse:

  • Med vanlig antall er pasienten under oppsyn av en lege. Med endringer i trivsel, gjentas analysene.
  • Med en økning på 2 eller flere ganger utføres ELISA for anti-HCV.
  • Hvis enzymimmunoassayet er positivt, brukes PCR - en polymerasekjedereaksjon, hvor resultatene brukes til å velge antiviral terapi.
  • Ved forhøyede 2-ganger eller flere leverfunksjonstester, men negativ ELISA, eller 2 ganger økning i leverprøver, positiv ELISA og negativ PCR, fortsetter dynamisk overvåkning ved inspeksjon og kontroll av biokjemiske blodprøver 1 gang på 3 måneder.
  • Med høye biokjemiske indekser, positive resultater av ELISA og PCR, utføres klinisk diagnostikk, antiviralt medikament velges, og behandling overvåkes.

Studien av biokjemiske parametere

Ifølge resultatene av biokjemisk analyse av blod, vurderes nivået av aminotransferaser.

  • ALT - alaninaminotransferase - er en del av hepatocyttene. Selv et lite overskudd av normen indikerer tilstedeværelsen av hepatitt (inkludert virus) i de tidlige stadier.
  • AST-aspartataminotransferase: Hvis nivået overstiger ALT, er det en indikator på begynnende fibrose (spredning av bindevev).

Høy ALT, AST i blodet er resultatet av levercellenekrose. De er en indirekte indikator på aktiviteten til den inflammatoriske prosessen. Hvis ALT-nivået overskrider normen med 3 ganger, snakker vi om minimumsaktiviteten, 3 til 10 ganger - moderat aktivitet av inflammatorisk prosess, mer enn 10 ganger - hepatitt med høy aktivitet.

Nivået på AST endres også i andre patologier, ALT anses mer spesifikt for leversykdommer.

  • En økning i nivået av totalt og direkte bilirubin oppstår med økt formasjon eller langsom fjerning av det fra kroppen. Viral hepatitt forekommer i strid med fjerning av bilirubin. Ikteriske slimhinner og sclera blir observert ved bilirubinnivåer over 30 - 35 mmol / l, med videre akkumulering blir huden gul. I kronisk forlengelse skjer dette ikke.
  • Økt alkalisk fosfatase (alkalisk fosfatase), gammaglutamintransferase (GGT), kolesterol og gallsyrer er karakteristiske for syndromet. Men leversykdom er ikke den eneste grunnen til økningen.
  • En økning i albumin er assosiert med nedsatt syntetisk leverfunksjon.

Klinisk diagnose

Kliniske manifestasjoner er til fordel for viral hepatitt C. Det kroniske kurset er preget av lite symptomatologi: Angst og økt tretthet ved slutten av dagen, en reduksjon i toleransen mot den vanlige fysiske anstrengelsen, bekymring. I normale biokjemiske analyser er slike kliniske manifestasjoner sjelden forbundet med viral hepatitt. Det utviklede kliniske bildet vises i sena stadier: Telangiectasias og hepatiske "stjerner" vises, hepato- og splenomegali, sclera gulsott, hud og slimhinner i munnen, hud kløe (med svært høyt nivå av bilirubin i blodet), mørk urin, misfarget avføring, blødning, vekttap, leverpalmer.

Advarsel! Hvis det er en kronisk form for HCV, er det høyst sannsynlig å utvikle leverkreft, så det er nødvendig å teste blod for tumormarkører og alfa-fetoproteiner med jevne mellomrom (1 gang i et halvt år).

ultralydundersøkelse

I tillegg til laboratoriemetoder er det flere undersøkelsesmetoder som spiller en viktig rolle i diagnosen HCV. Disse inkluderer ultralyd OBP. Med denne undersøkelsesmetoden undersøkes tilstanden til organene i bukhulen. Størrelsene, tetthet, struktur, arrangement av organer bestemmes, volumlessene, kalkulatene, brudd på utløpet av galle, størrelsen på portalen og miltenvenen avsløres. Splenomegali, hepatomegali, ekspansjon av portalvenen indikerer hepatitt med overgangen til cirrose. Videre undersøkelse er serodiagnose nødvendig for å utelukke eller bekrefte viral hepatitt C.

Fibroscan og andre tester

Metoden for indirekte diagnose, tilsvarende biopsi-fibroscanning (elastometri): Ikke-invasiv, sikker, kan utføres gjentatte ganger for å overvåke behandlingen. Indikasjonene for elastometri mistenkes patologiske prosesser i leveren, inkludert tilstedeværelse av et virus.

Det er også mange diagnostiske tester som er et alternativ til leverbiopsi. Tester gir en mulighet til å bestemme det nøyaktige morfologiske bildet av det berørte organet, eksisterende fibrose, steatose, nekrose eller betennelse. Noen av dem er:

  • FibroTest - med hjelp, en omfattende analyse av 5 biokjemiske parametere og rettidig diagnose av fibrosistrinn.
  • AktiTest - identifiserer 6 biokjemiske parametere og gjør det mulig å diagnostisere den nekroso-inflammatoriske prosessen i leveren.

Advarsel! Prognosen for HCV avhenger av rettidig diagnose, grad av infeksjon og pasientens ønske om å gjenopprette. Moderne terapeutiske metoder med bruk av antivirale legemidler gjør det mulig å kurere sykdommen eller oppnå langvarig remisjon, forlenge livet og forbedre kvaliteten hos en smittet person eller operatør. Viral hepatitt C, til tross for den vanskelige diagnosen og langvarig behandling, er ikke en setning. Det er nødvendig å konsultere en lege i tide for å motta høykvalitets medisinsk behandling og nøye utføre alle sine avtaler.

Diagnose av hepatitt B og hepatitt C. Undersøkelse

Hepatitt er det vanlige navnet på inflammatoriske prosesser i leveren. Oftest forårsaker hepatitt B- og hepatitt C-virus hepatitt. Man kan bli smittet ved gjennomføring av piercinger, tatoveringer, manikyr eller intravenøse legemidler. Det er stor risiko for infeksjon hos tannlegen, under operasjon, blodtransfusjon. Hepatitt B overføres seksuelt og fra mor til barn under graviditet (risikoen er ca 30-40%). For hepatitt C er denne modusen for overføring av liten relevans.

Symptomer på viral hepatitt B og hepatitt C er like.

Det kliniske bildet er forskjellig i akutte og kroniske former.

Akutt viral hepatitt er en inflammatorisk prosess i leveren vev forårsaket av en nylig (mindre enn 6 måneder) infeksjon. Kronisk viral hepatitt er en inflammatorisk dystrofisk leverskade med moderat fibrose på mer enn 6 måneder.

Symptomer på viral hepatitt skyldes forgiftning på grunn av nedsatt avgiftning av leveren og kolestasen (brudd på galleutstrømning). Først og fremst er det en cerebrotoksisk effekt, noe som fører til økt tretthet, søvnforstyrrelser (i mild form for akutt hepatitt og ved kronisk hepatitt).

I tilfelle av en akutt sykdom i sykdommen varer den opprinnelige perioden ca 2-3 uker. Det er ledsaget av felles smerte, svakhet, fordøyelsesbesvær (kvalme, oppkast, appetittløp), feber, spesielt ofte med viral hepatitt B. Gulsot på grunn av kolestase er også mer karakteristisk for hepatitt B. Dette forandrer fargen på urin (mørkere) og avføring (lyser ). Ofte er den akutte formen generelt asymptomatisk, spesielt i hepatitt C.
Akutt viral hepatitt B i 80% av tilfellene slutter med utvinning, og i 20% blir det kronisk. Med hepatitt C utvikler kronisk kurs i ca 90% av voksne pasienter og hos 20% av barn. Den kroniske formen er den farligste, da det ofte blir til skrumplever i leveren.

Hos ubehandlede pasienter kan psykisk depresjon og tretthet være de eneste manifestasjonene av kronisk viral hepatitt selv før en diagnose er utført. I de senere stadiene av kronisk hepatitt, med omfattende fibrose og skrumplever, kommer portalhypertensjonssyndrom, som er livstruende på grunn av væskeakkumulering i bukhulen (ascites) og mulig intern blødning, i forkant.

Ved det første utseendet av symptomer som er karakteristiske for hepatitt, er det nødvendig å gjennomgå en diagnostisk undersøkelse for hepatitt B (B) og C-virus. I betraktning av at et asymptomatisk sykdomsforløp er mulig, samt smidig infeksjon, bør testing av hepatittvirus utføres regelmessig, og for viral hepatitt B vaksinert.

Metoder som brukes til å oppdage infeksjon med hepatitt C

Den mest alvorlige formen for viral hepatitt er hepatitt C. Bare dette viruset er preget av tilstedeværelsen av RNA i sammensetningen. Mistanke om penetrasjon og spredning av viruset i kroppen fremkommer ved økt aktivitet av leverenzymer. En tilleggsfaktor som indikerer behovet for diagnostikk, tilhører en mulig transportør til en risikogruppe.

Råd fra hepatologer

I 2012 var det et gjennombrudd i behandlingen av hepatitt C. Nye direktevirkende antivirale legemidler ble utviklet, som med en 97% sannsynlighet fullstendig befri deg fra sykdommen. Helt fremdeles er hepatitt C offisielt ansett som en fullstendig behandlingsbar sykdom i det medisinske samfunnet. I Russland og CIS-landene er stoffene representert av sofosbuvir, daclatasvir og ledipasvir. For øyeblikket er det mange feil på markedet. Legemidler av god kvalitet kan kun kjøpes fra lisensierte selskaper og relevant dokumentasjon.
Gå til nettsiden til den offisielle leverandøren >>

I de fleste tilfeller går sykdommen bort uten noen spesielle tegn, og transportøren kan ikke være klar over at kroppen er infisert med HCV. For å oppdage en sykdom er det nødvendig å gjennomføre en rekke studier og tester.

Hvis resultatet av slike tester er tvilsomt, kan spesialisten bestille en ny undersøkelse av pasienten.

Hos mennesker utfører leveren funksjonene til et mini-laboratorium. Når virusene trer inn, gir det et signal om dette - et brudd på produksjonen av visse enzymer eller en reduksjon i deres aktivitet oppstår, de biokjemiske parametrene for blodet endres på grunn av erstatning eller utseende av nye stoffer.

For eksempel kan et indirekte tegn på tilstedeværelsen av HCV i kroppen være en forandring i aktiviteten til enzymene ALT og AST-overføringer, som slippes ut i blodet på grunn av levervevssykdommer.

Men denne faktoren kan indikere andre sykdommer i leveren og indre organer, slik at eksperter har utviklet spesielle, svært effektive måter å diagnostisere hepatitt C-viruset.

For å sjekke om det er en sykdom, er det nødvendig å foreta studier av laboratorie-, laboratorie- og klinisk natur.

Generelle symptomer på sykdommen

Sykdommen kan forekomme i latent form og gå inn i kronisk stadium, og dette alternativet er løst i de fleste tilfeller. Men etter slutten av inkubasjonstiden av viruset, som kan vare opptil en måned, kan det oppstå visse tegn som ligner influensa symptomer. Det er viktig å være oppmerksom på dem i tide og se etter tilstedeværelse av HCV.

Disse tegnene inkluderer:

  • generell forverring av helse
  • økt kroppstemperatur;
  • smerter i muskler og ledd;
  • sjeldnere - utseendet av hudreaksjoner.

Disse symptomene vises gradvis, slik at pasienten lett kan forveksle sin tilstand med forkjølelse eller samme influensa.

Men etter noen dager endres sykdomsforløpet. vises:

  • smerte i riktig hypokondrium;
  • forverring eller fullstendig tap av matlyst;
  • mørk urin;
  • avklaring av avføring;
  • kvalme, oppfordring til å kaste opp.

Hvis tiden ikke begynner behandling, går sykdommen inn i et kronisk stadium.

Tegn på en slik endring i sykdommens natur er noen ganger så usynlig at en infisert person ikke legger noen betydning for dem, skriver alt som banalt tretthet. Men faktisk krever de nøye oppmerksomhet og undersøkelse av spesialister.

Nylig leste jeg en artikkel som forteller om bruk av komplekset av stoffer "SOFOSBUVIR DAKLATASVIR "for behandling av hepatitt C. Ved hjelp av dette komplekset kan du ALTID bli kvitt HEPATITIS C.

Jeg var ikke vant til å stole på noen informasjon, men bestemte seg for å sjekke og bestilte. Narkotika er ikke billig, men livet er dyrere! Jeg følte ikke noen bivirkninger fra resepsjonen, jeg trodde allerede at alt var forgjeves, men en måned senere passerte jeg testene og PCR ble ikke detektert, ikke oppdaget etter en måned med behandling. Dramatisk forbedret stemning, igjen var det et ønske om å leve og nyte livet! Jeg tok medisiner i 3 måneder, og som et resultat ble viruset gjort. Prøv det og deg, og hvis noen er interessert, så lenken til artikkelen under.

Dette er symptomer som:

  • rask utmattelse av tretthet;
  • fysisk ulempe og manglende evne til å takle vanlige belastninger;
  • ubehag i magen;
  • hyppig oppkast og kvalme;
  • muskel- og ledsmerter;
  • tarmdysfunksjon.

Hvis sykdommen oppnår et kronisk kurs, vises utseendet på gulsott, en økning i lever og miltens størrelse, blødningens utseende, vekttap. Det truer med levercirrhose eller utseende av kreft.

Tilstedeværelsen av de ovennevnte tegnene eller bekymringene om penetrering av HCV i blodet tyder på at det er nødvendig å gjennomgå en helhetlig undersøkelse av helsetilstanden og få god medisinsk behandling. Slike inngrep innebærer laboratorietester for å bekrefte infeksjon og spredning av viruset i kroppen.

Laboratorietester

Diagnose av hepatitt C og påfølgende behandling av behandlingsregime er inkludert i den faglige kompetansen til smittsomme sykdoms spesialisten som spesialiserer seg på å gjenkjenne den akutte sykdommen. Hvis pasienten har en kronisk form for sykdommen, bør han konsultere en hepatolog.

For å studere prosessen med å endre levertilstanden, anbefales pasienten å gjennomgå slike studier som tester for nivået av bilirubin og leverenzymer (ALT).

Det er også obligatorisk å ta leverprøver for biokjemi, hvorav studien gjør det mulig å sjekke for sykdommens tilstedeværelse og graden av skade på leverceller. Oppdagede abnormiteter i kroppen foreslår en blodprøve for tilstedeværelse av HCV.

Eksistensen av et virus og dets egenskaper oppdages ved bruk av spesielle markører. Disse er markører for anti-IgM / G og HCV RNA. Slike analyser presenteres av to typer studier:

Immunologisk (ELISA). Denne arten er basert på bestemmelsen av eksistensen av antistoffer mot viruset i blodet. Tilstedeværelsen av antistoffer er en gyldig indikator for HCV. De produseres av kroppen (nemlig blodleukocytter) for å ødelegge viruset. Etter at en person har vært syk, forblir antistoffene i blodet for livet. Dette er en beskyttende reaksjon av immunsystemet.

Hvis denne testen er positiv, oppstår en mistanke om infeksjon. Deretter må den potensielle transportøren gjennomgå et sett med bekreftende diagnostiske metoder. Dette skyldes at eksistensen av antistoffer ikke er direkte bevis på forekomsten av sykdommen. Kanskje har kroppen en gang interaksjon med viruset, for eksempel under vaksinering. Eller, for eksempel, kan et falskt positivt resultat ofte registreres hos gravide kvinner.

For å kunne gjøre en nøyaktig diagnose, må en spesialist kontrollere verneundersøkelsens resultater. Den ubestridelige fordelen ved slike tester er evnen til å diagnostisere det tidlige stadium av sykdommen, brukervennlighet, evne til å kontrollere infeksjonsprogresjonen. Ulempene ved ELISA kan tilskrives manglende evne til å bestemme tilstedeværelsen av et virus, og bare de tilsvarende antistoffer mot det;

Genetisk (PCR). Denne arten er basert på bestemmelse av HCV-genetisk materiale i blodet ved PCR (polymerasekjedereaksjonsmetode). Tilstedeværelsen av virus-RNA er bestemt. Som et resultat blir data om konsentrasjonen av viruset, dets tilknytning til en bestemt type, tilgjengelig. Denne metoden er i stand til å oppdage enda en liten konsentrasjon av HCV.

Siden sykdommen kan ha en annen art av forekomst og dermed de forskjellige virusene som forårsaket det, kan en PCR-studie gi deg den mest komplette informasjonen om de etiologiske egenskapene til det bestemte viruset som provoserte sykdommen. Fordelene ved denne typen analyse anses å være kvalitativ og kvantitativ studie av HCV i serum. Dette gjør at legen kan foreskrive den optimale ordningen for å kvitte seg med sykdommen, overvåke dynamikken i sykdomsutviklingen, evaluere effekten av de valgte behandlingsmetodene.

Denne analysen består av tre faser - dette er en kvalitativ PCR, deretter - kvantitativ PCR, og bestemmelsen av genotypen. Takket være den nyeste forskningen, kan spesialisten mest effektivt utføre terapien av sykdommen og bruke legemidler som passer til den spesifikke typen virus. Dette vil bidra til å kvitte seg med sykdommen så snart som mulig.

Etter å ha fullført et sett med laboratorietester, foreskriver legen det optimale behandlingsregimeet:

  • Hvis de biokjemiske parametrene er innenfor det normale området, er observasjon av pasientens tilstand etablert og periodiske repetisjoner av studier tildelt;
  • I tilstedeværelse av unormale leverfunksjonstester, positive resultater av ELISA og PCR, foreskriver spesialisten kliniske studier, karakteriserer behandlingsordningen og kontroll over sykdommens dynamikk og effektiviteten av de valgte stoffene og legemidlene.

Hva er karakteristikken ved klinisk diagnose? Å identifisere omfanget av skade på leveren ved hjelp av ultralydssystemet. På grunnlag av data oppnådd under ultralyd, kan en spesialist dømme endringer i størrelsen på et organ, dets struktur, struktur, tetthet av vev og i noen tilfeller funksjoner.

Mer nøyaktige data om levertilstanden gir en biopsi-analyse, ved hjelp av hvilken graden av fibrose og nekrose og inflammatoriske lesjoner er bestemt.

Basert på alle typer diagnostikk bestemmer legen diagnosen og foreskriver den mest effektive behandlingen. Hvis en spesialist har tvil om forekomst av et virus eller tilhørende en bestemt type, er det mulig at en potensiell pasient vil bli gitt gjentatte eller ytterligere tester som vil bidra til å etablere et mer nøyaktig bilde av tilstanden hans.

Hepatitt C: måter å infisere, diagnose, behandlingsmetoder

Hepatitt C (hepatitt C) er en betennelsessykdom i leveren forårsaket av infeksjon av kroppen ved HCV-viruset, hepatitt C-virus. Under reproduksjon av hepatitt C-viruset og skade på leveren vev, utvikler patologiske prosesser, leverkirrhose oppstår, og kreft utvikler seg. Dette skjemaet regnes som den farligste typen hepatitt, ikke bare på grunn av dets evne til å forstyrre kroppens generelle funksjon og forårsake sykdommer som fører til funksjonshemming eller død, men også på grunn av sykdomsforløpet. Symptomene på hepatitt C er vanligvis ikke uttrykt, infeksjonen er latent, og det er ingen vaksine for hepatitt C.

Hva er hepatitt C (hepatitt C)?

Hepatitt C (HCV) ble kjent som en egen sykdom lenge før oppdagelsen av et bestemt smittsomt middel. "Ikke-A ikke-B-hepatitt", ikke-A, ikke-B-hepatitt (NANBH) som en sykdom hadde manifestasjoner som tillot det å tilhøre gruppen av hepatitt, men sykdomsforløpet og merkede komplikasjoner vil variere. Deretter ble virus som forårsaker hepatitt D og G også identifisert i varianter av hepatitt.
For første gang ble en spesiell form for viruset isolert i 1989. For øyeblikket er seks genotyper av HCV-viruset identifisert, og for ytterligere 5 laboratorietester utføres. Det er også kjent om 90 subtyper av HCV. Den vanligste typen er den første formen av viruset, og den er også ansvarlig for den mest alvorlige formen for hepatitt C, resistent mot interferonbehandling.
Variasjonen i hepatitt C-viruset, produksjonen av nye genotyper under infeksjon, gjør det vanskelig å skape en vaksine for denne sykdommen, som for tiden ifølge statistikens anslag er syke om 150 millioner mennesker i verden. Årlig dør ca 350 000 mennesker av komplikasjoner forårsaket av hepatitt C. Spesifikke avskaffe symptomer fører til situasjoner når diagnosen HCV-hepatitt oppdages ved en tilfeldighet under test eller er etablert i utviklingsstadiet av komplikasjoner. Aktive mutasjoner av viruset fører til dannelsen av modifiserte kopier av genotypen, noe som forårsaker en høy prosentandel av den kroniske formen av sykdommen.

Tegn på hepatitt C

Foto: Jarun Ontakrai / Shutterstock.com

Utseendet til de første tegnene på hepatitt C er avhengig av kroppens motstand. Fra øyeblikket av infeksjon til de primære symptomene kan ta fra 2 uker til 6 måneder. Hvis du mistenker kontakt med en infeksjon for tidlig diagnose, utføres en blodprøve med PCR, som gjør det mulig å bestemme tilstedeværelsen av virus RNA i blodet, 2 uker etter infeksjon.
Hepatitt C er preget av en "mild morder": skjulte symptomer og alvorlige komplikasjoner fører til alvorlig skade på kroppen i fravær av mistanke om HCV.
De første symptomene på denne form for viral hepatitt inkluderer redusert ytelse, asthenisk tilstand, trøtthet.
Hovedtegnene på hepatitt C, manifestert på scenen av uttalt reproduksjon av viruset i kroppen, anses å være:

  • redusere eller mangel på appetitt;
  • kvalme;
  • generell svakhet, asteni, forverring av helse
  • ledsmerter;
  • Yellowness av huden, slimhinner, sclera i øyet som et resultat av en økning i konsentrasjonen av bilirubin i blodet på grunn av leverskade i hepatitt C;
  • en økning i lever og miltens størrelse.

Årsaker til hepatitt C, måter å infisere med hepatitt C

Fremgangsmåten for overføring av HCV-viruset er hematogen, med blod og andre kroppsvæsker. Det smittsomme stoffet er til stede selv i de minste bloddråpene og forblir aktiv i opptil 5 dager når væsken tørker ved romtemperatur. Infeksjon oppstår når HCV-infisert biologisk materiale kommer inn i en annen organisme under invasive prosedyrer, samt ved kontakt med sårflater (riper, slitasje, sprekker og slimhinneskader etc.). I denne forbindelse er det de viktigste måtene for infeksjon:

  • gjennom injeksjoner med usteriliserte gjenbrukbare sprøyter, nåler;
  • under blodtransfusjon, plasma fra en infisert donor, transplantasjon av organer og vev;
  • i ferd med å anvende usteriliserte instrumenter i tannklinikker, skjønnhetssalonger, spiker salonger, piercinger, tatovering, etc.;
  • med traumatisk seksuell kontakt: bare små sprekker på den slimete overflaten;
  • vertikal infeksjonsrute: fra mor til foster under svangerskapet;
  • husholdningsvei for infeksjon ved bruk av kniver, tannbørster, etc. (ekstremt sjelden);
  • under fødsel og kirurgiske prosedyrer, skader i ikke-sterile forhold.

Virusinaktivering skjer når overflater behandles med desinfeksjonsmidler som inneholder klor, når de behandles med vann ved en temperatur på minst 60 ° C i 40 minutter eller kokes i tre minutter.
Risikogruppene, populasjoner med høy risiko for HCV-infeksjon, inkluderer medisinsk personell og ansatte i sanitære og epidemiologiske institusjoner, narkomaner med en invasiv metode for administrasjon av narkotika, personer med høyt antall ubeskyttede kjønn, seksuelle partnere av infiserte pasienter, inkludert skjulte bærere av hepatitt. C, personer med autoimmune sykdommer, immundefekter, etc.
Hepatitt C-virus overføres ikke gjennom berøring, håndtrykk, av luftbårne dråper, det er sjeldne tilfeller av infeksjon under amming (hvis det er sår, sprekker på morens brystvorter og skade på munnslimhinnen til barnet) og husholdningenes kontakt når de lever sammen. Forebygging av hepatitt C-infeksjon er sterilisering av medisinske og kosmetiske instrumenter for invasive prosedyrer og injeksjoner, overholdelse av personlige hygieneregler i hverdagen, og mekaniske metoder for å beskytte seksuelle kontakter med ukjente partnere.
Forebygging av infeksjon av barnet med hepatitt C under graviditet er en spesiell terapi for å redusere virusbelastningen under svangerskapet, samt undersøkelse og behandling av en kvinne før unnfangelsen.

Typer og stadier av hepatitt C

To former for hepatitt C skiller seg ut. Den akutte formen for denne virusinfeksjonen diagnostiseres i sjeldne tilfeller på grunn av et uklart klinisk bilde. Ofte oppstår deteksjon av akutt stadium ved en tilfeldighet under profylaktiske undersøkelser eller når en person søker diagnostikk ved mistenkelig kontakt.
Med rettidig behandling er 20% av den akutte form for hepatitt C fullstendig herdet. I fravær eller manglende behandling går akutt hepatitt C inn i et kronisk stadium av sykdommen.
Hepatitt C i kronisk form kan også være asymptomatisk uten effekt av virusbelastning på kroppen, uten kliniske manifestasjoner og spesifikke symptomer. Denne gruppen av skjulte virusbærere gjør det vanskelig å samle statistikk over forekomsten av HCV, da den bare er bestemt ved blodprøver for hepatittmarkører, men kan bidra til spredning av infeksjon.
Det klassiske løpet av kronisk hepatitt C er ledsaget av skader på leverceller og utvikling av vevsfibrose. Hvis ubehandlet, gir fibrous foci utviklingen av levercirrhose, dannelsen av kreftvulster og andre farlige komplikasjoner.

Hepatitt C komplikasjoner

Foto: Den Rise / Shutterstock.com

Graden av utvikling av komplikasjoner avhenger av kroppens generelle tilstand, immunsystemets evne til å produsere antistoffer, formen av genotypen og tilstedeværelsen av mutasjoner av viruset, samt livsstilen og dietten til en person. Bruken av alkohol, fettstoffer fører til en betydelig akselerasjon av utviklingen av patologiske prosesser, alkohol, giftig hepatitt.
Hepatitt C kan forårsake følgende sykdommer og lidelser:

  • levervevsfibrose;
  • steatohepatitis, erstatning av levervev med fett;
  • levercirrhose;
  • hepatocellulært karsinom, kreft i leveren;
  • portal hypertensjon;
  • ascites, opphopning av væske i peritoneale organer;
  • åreknuter av indre organer;
  • hepatisk encefalopati;
  • kronisk forgiftning av kroppen med vevsbruddsprodukter og på grunn av utilstrekkelig leverfunksjon;
  • skjult indre blødning.

Hepatitt C er også farlig, noe som skaper en økt risiko for å utvikle hepatitt B når den er i kontakt med en infeksjon på grunn av nedsatt leverfunksjon.

Diagnose av hepatitt C

Følgende metoder brukes til å diagnostisere hepatitt C:

  • Historieopptak og undersøkelse av pasienten, palpasjon av peritoneale organer;
  • biokjemisk blod undersøkelse;
  • en blodprøve for antistoffer mot hepatitt C-viruset (anti-HCV) og HCV-RNA ved PCR;
  • en blodprøve for tilstedeværelsen av antistoffer av klassen IgM (anti-HCV IgM) som viser den akutte stadien av sykdommen;
  • fullføre blodtall, en studie av koagulasjonsegenskaper (koagulogram);
  • ultralyd undersøkelse av leveren, milten, peritoneale organer.

I noen tilfeller utnevnt av laboratorieundersøkelsen av levervev (biopsi).
Disse metodene tillater deg å bestemme tilstedeværelsen av infeksjon og etablere en nøyaktig diagnose med definisjonen av HCV-genotypen.

Behandling av viral hepatitt C på forskjellige stadier

Hepatitt C involverer en kompleks terapi rettet mot både å støtte kroppen og bekjempe den generelle eller spesifikke antivirale virkningen av HCV-viruset. Behandlingsforløpet for pasienter med hepatitt C inkluderer:

  • antiviral medisinbehandling;
  • tar medisiner for å opprettholde leverens funksjoner;
  • forsterkende stoffer, immunmodulatorer, immunitetsstimulerende midler.

Forløpet av medisinering vil ikke være effektiv i tilfelle ikke-overholdelse av diettregler, begrensning av fysisk aktivitet, overholdelse av daglig behandling. Hepatitt C-virus påvirker aggressivt menneskets immunsystem og levervev, noe som krever et sparsomt kosthold, riktig hvile, unntatt sannsynligheten for kontakt med andre virale og bakterielle infeksjoner.

Tradisjonell antiviral terapi for hepatitt C

For å bekjempe HCV-viruset, brukes antivirale legemidler til å stimulere kroppens immunsystem. Ribavirin og Interferon-Alpha brukes som den mest effektive (45-50% utvinning, avhengig av sykdomsstadiet og HCV-genotypen som forårsaket hepatitt), brukt, avhengig av scenen og den generelle tilstanden til pasienten, enkeltvis eller i kombinasjon.
Det generelle behandlingsforløpet med disse legemidlene, dosering og diett bestemmes av den behandlende hepatologen på grunnlag av diagnostiske data og pasientens respons på medisiner. Den gjennomsnittlige varigheten av antiviral terapi med disse legemidlene er 12 måneder.
Kombinasjonen av stoffer kan forårsake allergiske reaksjoner, deres opptak er uakseptabelt under graviditet og noen sykdommer. Effektiviteten av behandlingen vurderes på grunnlag av en blodprøve for å redusere nivået av virusbelastning (HCV RNA) og graden av transaminaseaktivitet.
Narkotika kan forårsake betydelige bivirkninger. Mottak av interferongruppen i signifikante doser leds ofte av en betydelig forverring av helsen, karakteristisk for perioden av tilpasning av organismen til stoffet (opptil 1 måned) og ledsaget av hypertermi opp til 38-39 ° C, hodepine og leddsmerter, vekttap, tørr hud, hårtap. Slike symptomer går uavhengig av hverandre og krever ikke opphør av legemidlet.
3-4 måneder etter begynnelsen av administrasjonen av interferongruppemedisinene, kan en endring i blodbildet observeres: en reduksjon i konsentrasjonen av blodplater, leukocytter. Avhengig av omfanget av endringene, kan medisinen være midlertidig suspendert.
Alvorlige komplikasjoner som krever korreksjon av behandlingsforløpet, er blødning og tilsetning av bakterielle infeksjoner.
Når du mottar ribavirin, kan det forekomme svak transient dyspepsi, hemolytisk anemi, økt urinsyrekonsentrasjon og hodepine.
Behandlingen utføres under tilsyn av spesialister.

HCV Direct Effects

I 2013 gikk et nytt stoff, utviklet over 11 år, kliniske studier og ble godkjent som et direktevirkende antiviralt middel. Sofosbuvir produsert av Gilead (USA) er patentert som det eneste aktive stoffet, ifølge forskningen, som cure hepatitt C i 95% av tilfellene.
På grunn av de høye kostnadene ved produksjon (grunnleggende behandling sofosbuvir verdt 84 000 dollar i USA), har selskapet overført lisensrettighetene til å produsere stoffet. For øyeblikket er Hepcinat, produsert i India, også til stede i markedet for medisiner med kostnaden av medisiner for et behandlingsforløp på 880-1200 amerikanske dollar.
Antiviral medisin inneholder en kombinasjon av sofosbuvir og daclatasvir, tatt oralt. Doseringen og varigheten av emnet er beregnet lege-leversykdommer på grunnlag av informasjon om viruset genotype, stadium av leverfibrose, pasientens individuelle egenskaper. Legemidlene er effektive for alle HCV-genotyper, har ingen kontraindikasjoner for HIV-infiserte pasienter. Behandlingsforløpet er fra 12 til 24 uker.

Hepatoprotektorer for hepatitt C

Hepatoprotektorer, som er en del av terapi for hepatitt C, er rettet mot å opprettholde funksjonene til det berørte organet. Ikke herding kroppen av sykdommen, de hjelper opprettholde og gjenopprette helsen til leveren, regenerere vev.
Slike legemidler som er effektive for hepatitt C innbefatter Essentiale, Karsil, Lipoic acid, Silimar, Phosphogliv og andre. Forløpet for å ta hepatoprotektorer starter uavhengig av tilstedeværelse eller fravær av antiviral terapi og ender med klinisk helse i leveren, bekreftet ved laboratorietester og instrumentelle studier.

immunomodulators

Siden immunforsvaret lider av konstant viral belastning, er bruk av legemidler rettet mot å styrke den inkludert i den generelle behandlingen foreskrevet for pasienter med hepatitt C. De vanligste immunmodulatorene for hepatitt C er Zadaksin og Temogen.

Diet mat

Behandlingen av hepatitt C og dens komplikasjoner er ledsaget av utnevnelsen av et terapeutisk Pevzner ernæringssystem, diett nr. 5. Dieting bidrar til å lette funksjonen av leveren og andre organer i fordøyelsessystemet, reduserer utviklingen av komplikasjoner av hepatitt C.
De grunnleggende prinsippene i kosthold nr. 5 begrenser forbruket av matvarer som forsterker sekresjonen av fordøyelsessaft: fett, krydret, salt, røkt, hermetisert mat, kaffe, sterk te. Alkoholholdige drikker er helt utelukket. Det anbefalte daglige volumet av væske (vann, kompott, fruktdrikker, frukt og grønnsaksjuice med liten irritasjon på magen) varierer fra 2 til 3 liter.

Forutsigelse av behandlingsresultater for hepatitt C

Prognosen for kur for virus hepatitt C avhenger av tidspunktet for behandlingens begynnelse, sykdomsstadiet, tilstedeværelsen og utviklingsgraden av komplikasjoner, valg av behandling og utnevnelse av en spesialist.
Den mest gunstige prognosen ved begynnelsen av behandlingen på et tidlig, akutt stadium av hepatitt C, når sykdommen ennå ikke har gått inn i en kronisk infeksjon med alvorlige komplikasjoner, degenerasjon av leverceller, giftig skade på kroppen.
Overholdelse av prinsippene for kosternæring, avslag på alkohol bidrar sterkt til å unngå tidlig utvikling av komplikasjoner og generelt opprettholde helse.
Avhengig av valget av medisiner med direkte eller generell antiviral virkning, er prognosen for viral hepatitt C 45 til 95% av dens kurabilitet. Omfattende behandling av hepatitt C ved bruk av nye antivirale stoffer bidrar til å kurere sykdommen og unngå komplikasjoner.

Forebygging av hepatitt C

Foto: Alexander Raths / Shutterstock.com

På grunn av det store antallet genotyper av viruset av denne type hepatitt og dets evne til å mutere, er det fortsatt under utvikling å lage en rekke spesifikke forebygging av hepatitt C i underspecifikke arter. Ikke-spesifikke tiltak for forebygging av sykdommen med viral hepatitt C betraktes som restriktive tiltak for å beskytte mot penetrasjon av viruset i kroppen og den generelle styrking av kroppen.
Hepatitt C overføres utelukkende når den biologiske væsken som inneholder viruset kommer i kontakt med såroverflaten eller det subkutane vev. Derfor er forebyggingen av sykdommen utelukkelse av situasjoner av slike kontakter:

  • kontroll over overholdelse av hygieniske og hygieniske normer når du bruker tjenester av medisinske institusjoner, skjønnhets- og tannsalonger, unntatt muligheten for å bruke usteriliserte kirurgiske instrumenter, gjenbrukbare sprøyter;
  • begrense antall seksuelle kontakter med ukjente partnere, bruk av personlig verneutstyr under samleie;
  • vanlig analyse av virusmarkører når de arbeider i forhold med økt infeksjonsrisiko.

Om lag 20% ​​av infeksjoner med hepatittviruset i dette skjemaet har en uklar etiologi, forekommer sykdommen hos mennesker som fører en sunn livsstil, har ikke gjennomgått blodtransfusjon eller organtransplantasjoner som har en permanent seksuell partner og ikke er utsatt for injeksjon av narkotikaavhengighet. Forebygging er et tiltak for å forebygge en sykdom som må følges selv i fravær av en klar infeksjonsfare.
Andre tiltak av ikke-spesifikk profylakse inkluderer en sunn livsstil, begrenser bruken av alkohol og et balansert kosthold som kan begrense utviklingen av sykdommen og dens komplikasjoner, selv når viruset kommer inn i kroppen.

Hepatitt C: forebyggende tiltak i nærvær av en pasient i familien

Hepatitt C er en smittsom sykdom som overføres hovedsakelig gjennom blod. Når du bor sammen i samme område med en smittet pasient, er det ikke nødvendig å beskytte rommet, undertrykke taktil kontakt, eller bruk separat bestikk.
Det er viktig å ekskludere deling av en barberhøvel (på grunn av mulige kutt), en tannbørste, for å desinfisere overflater hvor bloddråper forårsaket av husholdningsskader, blekemiddeloppløsning (1: 100), klorholdige væsker, koking eller vasking ved 60 ° C, observere tiltak for beskyttelse under samleie, for å forhindre skader på kjønnsorganene, utvikling av sykdommer ledsaget av skade på hud eller slimhinner. I tilfelle skader, åpne sår, anbefales forsiktighet.
På grunn av organismens lavere motstand mot andre typer hepatitt anbefales vaksinasjon mot hepatitt A og B til familiemedlemmer og omsorgspersoner.

Forebygging av infeksjon av fosteret og nyfødte

På grunn av slettede symptomer kan tilstedeværelsen av viral hepatitt C hos en kvinne diagnostiseres allerede på graviditetsstadiet når man vurderer tester for infeksjoner. I slike tilfeller avhenger prognosen for overføring av viruset til fosteret av virusets belastning av mors kropp, bestemt av antall titere i blodet.
For å redusere sannsynligheten for infeksjon i fosteret, anbefales det å ta noen medisiner med generell effekt, samt utnevnelsen av hepatoprotektorer for å redusere sannsynligheten for graviditetskomplikasjoner forårsaket av økt stress på leveren.
Med lav virusbelastning er sannsynligheten for å ha et infisert barn lite, selv om det er mulig å bestemme tilstedeværelsen av et virus i blodet bare 1-1,5 år etter fødselen, siden moderens antistoffer er i barnets blod i lang tid.
En fullstendig forebygging er en blodprøve for tilstedeværelsen av et virus før unnfangelse og et behandlingsforløp for en sykdom hvis det foreligger før graviditet. Under svangerskapet er det ikke tillatt å bruke antivirale legemidler på grunn av mulige teratogene effekter på fosteret og øke risikoen for abort.
For å redusere sannsynligheten for infeksjon av det nyfødte, anbefales det samme tiltak som for å leve hos en vokseninfisert person.
Amming av en mor med hepatitt C er nå anerkjent som trygg, da det ikke er virus i morsmelk. Imidlertid er det nødvendig å nøye overvåke tilstanden til bryst- og brystvorten, forebygge kvalme, sprekker, samt sjekke munnslimhinnen hos barnet for sår, slitasje og soppinfeksjoner.
Når mikrotraumas forekommer i brystvorten, anbefales det å bruke fôret for å forhindre at barnet får et sår fra såret i munnen eller midlertidig slutte å amme til huden gjenoppretter.

Laboratoriediagnose av hepatitt C

MI Mikhailov, Institutt for epidemiologi og mikrobiologi. N.F. Gamalei RAMS, Moskva

Ved diagnostisering av "hepatitt C" bør følgende viktige faktorer vurderes:

  • aktivitetsindikatorer for "leveren" enzymer;
  • Tilstedeværelse eller fravær av markører av infeksjon med hepatitt C-viruset (HCV) og andre hepatotropiske virus;
  • data om epidemiologisk historie;
  • Resultatene av klinisk undersøkelse av pasienten. Bare en omfattende regnskapsføring av disse faktorene gjør det mulig å diagnostisere denne sykdommen med høy grad av pålitelighet. Laboratoriearbeideren må gi objektiv informasjon om det identifiserte spekteret av virale antigener og antistoffer, samt HCV RNA, slik at klinikeren, en blodtransfusjonstjenestearbeider og epidemiologen kan løse sine problemer. Ofte er det:
  • identifisering av personer med HCV for å redusere nivået av hepatitt C etter transfusjonen;
  • diagnose og skille mellom akutt og kronisk hepatitt C;
  • prognose av sykdommen;
  • utnevnelse, evaluering og prognose av effektiviteten av terapien;
  • studerer bredden av spredning av HCV i en befolkning og ulike grupper av befolkningen.
    I dette tilfellet er de viktigste arbeidsområdene som utføres av laboratoriepersonalet:
  • utvikling og utvelgelse av de mest informative metoder for å identifisere markører for HCV infeksjon;
  • fastsettelse av kriterier for en objektiv vurdering av de oppnådde resultatene
  • utvikling av optimale laboratorieforskningsalgoritmer;
  • implementering av et system for å forbedre kvaliteten på deteksjon av HCV infeksjonsmarkører.

    Basis for laboratoriediagnostisering av hepatitt C er kunnskap om HCV, replikering, informasjon om dynamikken i fremveksten og forsvinden av infeksjonsmarkører, samt moderne immunokjemiske og molekylærbiologiske metoder for påvisning av antigener, antistoffer og nukleinsyrer.

    Hepatitt C-viruset. HCV ble først identifisert i 1988, da en gruppe forskere ledet av M. Houghton og Choo Q.L anvendte nye molekylærbiologiske forskningsmetoder, klonet og sekvenserte virusgenomet [I]. En partikkel av hepatitt C-virus har en sfærisk form med en gjennomsnittlig diameter på ca. 50 nm [2,3]. Forsøk på å visuelt oppdage og studere strukturen av hepatitt C-viruset er gjort siden virusoppdagelsen, men det er fortsatt ingen veldokumenterte resultater av disse studiene, noe som kan skyldes vanskeligheten ved å samle viruspartikler i de nødvendige mengdene.

    VGS er det eneste medlemmet av Hepacivirus-slekten i familien Flaviviridae, som inkluderer virus som tyrediaravirus og svinepest (Pestivirus-genus) og gult febervirus, Denge-virus og GB-virus: GBV-A, GBV-B og GBV-C / HGV (slekt Flavivi-rus). Strukturen av hepatitt C-viruset kan representeres som følger (skjema nr. 1). Nukleokapsidet inneholder RNA i hepatitt C-viruset. Nedenfor er nukleokapsidet belagt med en lipidmembran med innkapslet i det innkapslede proteiner kodet av HCV RNA. Det virale genomet er representert ved et enkeltstrenget lineært RNA-molekyl med positiv polaritet, med en lengde på ca. 9.600 nukleotider. Organiseringen av HCV-genomet ligner på andre flaviviruser. Det skiller mellom to soner som koder for strukturelle og ikke-strukturelle (funksjonelle) proteiner. Generene som koder for strukturelle proteiner er lokalisert i 5'-regionen av virusgenomet og ikke-strukturelle i 3'-regioner. HCV-genet har en åpen leseramme (ORS), et enkelt polypeptid (ca. 3000 aminosyrer), som kuttes i strukturelle og ikke-strukturelle proteiner av virale og cellulære proteaser.

    Fig. 1. Strukturelle elementer av HCV

    Strukturelle proteiner inkluderer proteiner kodet av Core, El og E2 sonene av HCV RNA. Tre former for HCV C-protein ble påvist: full lengde (p21) med en molekylvekt på 21 kD, avkortet (p19) og form (p16) funnet i nukleolene av infiserte hepatocytter. På overflaten bærer C-protein forskjellige svært konserverte B-celleepitoper, hvis eksistens er ekstremt viktig for påvisning av antistoffer mot HCV ved laboratoriediagnose av hepatitt C.

    HCV RNA sonene El og E2 koder for proteiner med en molekylvekt på 31 og 70 kD. Disse proteiner har flere N-glykosyleringssteder; I E1-proteinet er opptil 6 slike steder definert, og i E2 - 11. I E2-delen er det informasjon om et lite protein - p7, som ikke finnes i virusets struktur.

    Betegnelsen av regioner som ligger nærmere 3'-enden av HCV RNA - som soner som bærer informasjon om virusets ikke-strukturelle proteiner, indikerer at disse proteinene ikke er strukturelle komponenter av viruspartikkelen. I den ikke-strukturelle sonen av HCV RNA er det seksjoner betegnet som: NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A og NS5B. De fleste proteiner kodet av ikke-strukturelle soner av HCV RNA er nødvendige for virusreplikasjon.

    En komparativ analyse av nukleotidsekvensene av RNA av HCV-isolater oppnådd i forskjellige regioner i verden, og selv i løpet av sykdommen fra samme pasient avslørte hovedtrekk ved dette viruset - høy heterogenitet av RNA. Plasseringen av signifikant genetisk variabilitet av HCV RNA dannet grunnlag for teorier som forklarer: den langsiktige (noen ganger livslange) vognens bevegelse, den hyppige utviklingen av en kronisk sykdom, vanskeligheter med terapi og etablering av effektive vaksiner. De mest signifikante forskjellene i sekvensene av HCV RNA er konsentrert i den N-terminale delen av E2-regionen, som er betegnet som "hypervariabel region" (HVR) [4].

    For tiden er det identifisert 6 hovedgenotyper og over 100 HCV-undertyper. Genotypene 1a, 1b, 2a, 2b, 2c og Za utgjør mer enn 90% av HCV-isolatene fra Nord- og Sør-Amerika, Europa, Russland, Kina, Japan og Australia / New Zealand [5]. Genotyper 4, 5a og 6, registreres i Sentral-og Sør-Afrika og Sørøst-Asia. I Russland og CIS-landene er overlegenhet av genotype 16 registrert (ikke mindre enn 68,9%) [6,7]. Det antas at pasienter infisert med genotype 1 (spesielt 1b) reagerer verre på behandling enn pasienter infisert med andre genotyper av viruset.

    I en pasient sirkulerer HCV som en populasjon av viruspartikler hvor genomene avviger fra hverandre med 1-2% (av kvasespesifisitet) som følge av mutasjoner som akkumuleres under infeksjon og / eller inn i pasientens kropp under infeksjon. Disse mutantformene kan bidra til mer aktiv replikasjon eller kan bidra til at viruset unngår kroppens immunrespons og potensielt påvirker utfallet av akutt infeksjon, forskjeller i løpet av sykdommen og responsen på interferonbehandling [8].

    DEFINISJON AV ANTI-HCV. Etter oppdagelsen av HCV-viruset og å bestemme sin rolle i utviklingen av posttransfusjons hepatitt - "verken A eller B", var forskerne opptatt av å utvikle metoder som var i stand til å oppdage personer med HCV og egnet for diagnostisering av akutt og kronisk hepatitt C. Det ble funnet at HCV-antigener sirkulerer i ekstremt lave konsentrasjoner, og det er åpenbart at metodologinivået på slutten av 80-tallet på XX-tallet, brukt til å påvise virusantigener, var tydelig utilstrekkelig.

    I 1989 klonte en gruppe forskere fra Chiron Corporation, under ledelse av Q-L.Choo, HCV RNA og oppnådde immunoreaktive oligopeptider som reagerer med antistoffer som sirkulerer i blodet hos pasienter med kronisk hepatitt "verken A eller B". Disse oligopeptidene har blitt grunnlaget for diagnostiske legemidler for påvisning av antistoffer mot HCV. Dette bestemte den raske utviklingen i utvikling og kommersiell produksjon av diagnostiske produkter. Den viktigste metoden som brukes til å påvise anti-HCV, har blitt enzymbundet immunosorbentanalyse, som en metode som tilfredsstiller kravene til praktisk helsetjenester - dvs. Den har høy følsomhet, spesifisitet og enkel implementering.

    På grunn av at HCV vedvarer i blodet hos pasienter med akutt og kronisk hepatitt C samtidig med anti-HCV, fokuserte utviklerne av diagnostiske legemidler på utvikling av testsystemer for å detektere antistoffer som gir den mest fullstendige gjenkjenning av bærere av viruset og den tidligste diagnosen av akutt infeksjon. Variasjonen av antigener og antigeniske determinanter kodet av strukturelle og ikke-strukturelle soner av HCV RNA har bestemt retningen i utformingen av diagnostiske produkter ved å velge og arrangere oligopeptidene som brukes til å lage dem. I løpet av tiden som har gått siden oppdagelsen av HCV, er det blitt opprettet diagnostiske systemer av tre generasjoner (tabell 1).

    Tabell 1
    Diagnostiske preparater for å oppdage anti-HCV [9]

    Brukte peptider
    soner av HCV RNA i hvilke
    de er kodet

    % carrier detection
    HCV

    Første gang
    deteksjon
    anti-HCV fra
    start gulsott

    5-1-1 NS3
    C100-3 NS4

    C22-3 Core
    C200 NS3 og NS4
    SZZs NS3
    Fra 100-3 NS4

    C22-3 Core
    C200 NS3 og NS4
    SZZs NS3
    Peptid NS5

    Innføringen av ytterligere peptider, hovedsakelig c22-3 (Core), til diagnostiske preparater av 2. og 3. generasjon, fikk lov til å løse hovedproblemet, det vil si å øke følsomheten, spesifisiteten og, viktigst, detekterbarheten av anti-HCV. Takket være 3. generasjons diagnostikk kan opptil 97% av HCV-bærere oppdages. Samtidig ble en bestemt diskusjon forårsaket av beslutningen om å introdusere i det diagnostiske peptid kodet av NS5-regionen av HCV RNA. Ifølge enkelte forskere er nærværet av dette peptidet ikke kritisk for å forbedre kvaliteten på et diagnostisk legemiddel. [10,11]. Imidlertid kan antistoffer mot NS5 påvises tidligere i infeksjonen, noe som forbedrer kvaliteten på laboratoriediagnosen av akutt hepatitt C. [12].

    Foreløpig over hele verden, inkludert Russland, brukes tredje generasjons diagnostiske produkter. Peptider anvendt i diagnostiske preparater ble oppnådd ved å anvende rekombinant teknologi (for eksempel firmaets diagnostiske tester: Diagnostiske preparater, Nizhny Novgorod, Vector, Novosibirsk; Roche; Abbott, etc.) eller syntetisk ( 000 MTS "Avicenna", St. Petersburg, "Organon", etc.). Diagnostika, hvor begge typer peptider ble brukt samtidig, ble betegnet som 4. generasjons legemidler. Ifølge deres egenskaper har disse stoffene ikke betydelige forskjeller. Sammenligningstester som ble utført regelmessig av Ruslands helsedepartement, demonstrerte den sammenlignbare sensitiviteten til diagnostiske produkter fra innenlandske og utenlandske produsenter.

    Det er blitt fastslått at bruken av 3. generasjons diagnostikk for å oppdage anti-HCV blant immunokompetente populasjoner (for eksempel bloddonorer) er estimert til 98,8-100%. Samtidig er blant disse immunkompromitterte individer, som pasienter etter transplantasjon av nyre, benmarg eller personer som er smittet med HIV, betydelig lavere - 50 - 95% [12]. S. George et al. [13] viste at hos 8,4% av pasientene med HIV-infeksjon, registreres falsk-negative resultater av anti-HCV-deteksjon. Videre kan hos slike pasienter en seroreversjonseffekt registreres under observasjonen, dvs. registrering av et positivt resultat etter en seronegativ anti-HCV-periode [14].

    En av de viktigste problemene ved å utføre forskning på forekomsten av anti-HCV er falske positive resultater. Deres utseende kan skyldes ikke-spesifikk interaksjon av reaksjonskomponenter, mulige kryssreaksjoner med andre virale antigener og mange andre faktorer. Nivået på falske positive resultater i deteksjon av anti-HCV med ulike diagnostiske legemidler kan nå 10-20% [15,16]. Et økt nivå av slike resultater ble observert blant pasienter med onkologiske og autoimmune sykdommer, personer med immunodefekter og pasienter med syfilis [16,17]. Eksistensen av falske positive resultater konfronterer laboratoriearbeideren med oppgaven å skille dem fra den virkelige gjenkjenningen av anti-HCV. For å løse dette problemet er deteksjon av serum HCV RNA i en blodprøve. Imidlertid foreslår det negative resultatet av deteksjon av HCV RNA ikke tilstedeværelsen av falsk positiv påvisning av anti-HCV. Det må tas i betraktning at anti-HCV kan sirkulere i isolasjon i blodet til en pasient som har gjenopprettet fra akutt hepatitt C (10-15%) eller som har eliminert HCV RNA som følge av terapi.

    BEKRÆFTELSE (SUPPLERENDE) TEST. Ytterligere (Supplement) tester er utviklet for å skille mellom falske positive prøver og prøver som faktisk inneholder antistoffer mot HCV. Oftest i disse testene brukes immunoblotprinsippet [for eksempel RIBA-testen ("Ortho-Clinical Diagnostics"); "LiaTek HCV" (Organon Teknika)] ​​når antigener kodet av forskjellige soner av HCV RNA blir adsorbert på en nitrocellulosemembran på en nitrocellulosemembran. Anti-HCV interagerer med adsorberte antigener ved bruk av enzymmerkede antistoffer mot humant Ig G og deres påfølgende påvisning ved bruk av et substratkompleks. I tillegg til immunoblot brukes også diagnostiske preparater for påvisning av anti-HCV mot spesifikke antigener kodet av forskjellige soner av HCV RNA som ytterligere tester ["Spectrum 4" (Imbio, Nizhny Novgorod; RecombiBest ANTI-HCV-SPECTR) - Vektor Best ", Novosibirsk; ELISA- Anti-NSU-Spectr, NPO" Diagnostiske systemer ", Nizhny Novgorod].

    Utviklingen og gjennomføringen av disse testene går hånd i hånd med innføring av screeningstester for å oppdage anti-HCV, og gjentar prinsippet om det utvidende spektrum av peptider som brukes i hver påfølgende generasjon av diagnostiske produkter. Dermed varierer diagnostisk RIBA-III fra den foregående generasjon ved tilsetning av et peptid kodet av NS5-sonen. Prinsipper for å bekrefte den positive gjenkjenningen av anti-HCV, omfatter i hovedsak: muligheten (i noen tilfeller) å oppnå mer nøyaktige resultater av den enzymatiske reaksjonen når den interagerer med individuelle peptider, samt å bruke et utvidet spektrum av peptider i diagnostikk som ikke er brukt i screeningtester. Bare introduksjonen av nye peptider kan øke den diagnostiske verdien av bekreftende tester.

    Tolkningen av de oppnådde resultatene, for eksempel i en test som RIBA-III, inneholder tre mulige svar: et positivt, et negativt og et usikkert resultat. Den siste av dem er utstedt ved mangel på klare indikasjoner (i henhold til instruksjonene som er vedlagt diagnostikksettet), slik at du definitivt kan dømme tilstedeværelsen eller fraværet av anti-HCV i prøven under studien. Forholdet mellom spekteret av registrerte responser ved gjennomføring av bekreftende tester varierer avhengig av egenskapene hos grupper av pasienter der anti-HCV primært oppdages [18]. Ifølge J.M. Pawlotsky et al. [19], i halvparten av resultatene behandlet som "uspesifisert", er det mulig å detektere HCV RNA. Etter vår mening er legitimiteten til svaret - "det usikre resultatet av å oppdage anti-HCV", utstedt av en laboratoriearbeider til en kliniker, ikke bare ved gjennomføring av en bekreftende test, men også rutinemessig testing for tilstedeværelse av anti-HCV. Behovet for en slik tolkning av resultatene er en refleksjon av den nåværende tilstanden for laboratoriediagnose av hepatitt C.

    Bestemmelse av IgM ANTI-HCV. For tiden er det blitt opprettet diagnostiske kits for påvisning av IgM anti-HCV av bedrifter, og blir kommersielt produsert: "Vector Best"; "Diagnostiske systemer"; Imbio, Abbott og andre. I designfasen av diagnostiske sett ble ELISA-sett opprettet, basert på peptider kodet av forskjellige regioner av HCV RNA [20]. Valget ble gjort på et peptid kodet av Core-regionen av HCV RNA og deteksjon av IgM-antistoffer mot det. Som ved bruk av tester for å oppdage anti-HCV (IgG), kan falske positive resultater registreres i IgM anti-HCV testen. Ifølge Stevensona D.L. et al. [21] hadde opptil 70% av pasientene med kronisk hepatitt C med tilstedeværelse av anti-HCV IgM samtidig økt nivå av reumatoid faktor, noe som bidrar til utseendet på falske positive resultater. Imidlertid, ifølge Pawlotsky J.M., påvirker nærværet av reumatoid faktor ikke kvaliteten på deteksjon av IgM anti-HCV [22].

    BESTEMMELSE AV HCV-ANTIGENSER. Evnen til å oppdage HCV-antigener tiltrukket oppmerksomheten til forskerne umiddelbart etter oppdagelsen av viruset. Den viktigste muligheten for testingen ble demonstrert av K. Krawczynski et al. [23], som immunohistokemisk oppdaget HCV-antigener i leveren vev, som viste spesifikiteten til immunfluorescerende glød. Bruk av poly- og monoklonale antistoffer mot forskjellige HCV-antigener avslørte nærværet av kjerne-Ag HCV, antigener kodet av NS3- og NS4-soner av HCV-RNA i hepatocytkjernen og cytoplasma hos 60-90% av pasientene med kronisk HS). HCV antigener kan detekteres i mindre enn 5% leverceller.

    De første diagnostiske testsystemene ("Ortho Antibody to Core Antigen (Murine Monoclonal) EL1SA Test System" og "Imucheck F-HCV Ag Core Kokusai") for å oppdage HCV antigen dukket opp på markedet for immunobiologiske preparater i 1999. Målet for deteksjon var kjerneantigenet av HCV, som bestemmes ved anvendelse av en fast fase ELISA-variant utformet på grunnlag av monoklonale antistoffer. De første studiene om bruk av disse testene bestemte deres høye følsomhet, spesifisitet og muligheter for anvendelse, hovedsakelig i blodtransfusjonstjenesten [25,26]. etablert:

  • evnen til å bestemme Core Ag HCV i serum eller plasma;
  • spesifisitet av deteksjon av Core Ag HCV;
  • Tilstedeværelsen av personer med sirkulerende antigen i blodet seronegative for anti-HCV;
  • hyppig (90,3%) påvisning av Core Ag HCV i serum med tilstedeværelse av anti-HCV og HCV RNA [25];
  • direkte korrelasjon mellom konsentrasjonen av HCV RNA og påvisning av Core Ag HCV [25];
  • sammentrekningen av "vinduet" -fasen - fra smittepunktet til det første positive resultatet av deteksjon av anti-HCV. Det ble bestemt at Core Ag HCV kan detekteres i 83% tilfeller (n = 24) neste dag etter den første detektering av HCV RNA [26] og lang (26 dager i gjennomsnitt) før forekomsten av anti-HCV [27].

    METODER TIL DETEKSJON AV HCV RNA. Den moderne fasen av laboratoriediagnose av hepatitt C kan karakteriseres som begynnelsen av den omfattende utbredelsen av molekylærbiologiske metoder for å detektere HCV RNA. Det store flertallet av nukleinsyre-deteksjonsmetoder har blitt testet for å detektere HCV RNA. En betydelig mengde litteratur vurderinger publisert både på russisk [28] og utenlandske publikasjoner [29] er viet prinsippene for å designe diagnostiske produkter og deres bruk for påvisning av viralt DNA eller RNA. Alle disse metodene kan deles inn i to grupper, som er basert på anvendelse av hybridiseringsprinsippene uten amplifisering av den valgte delen av nukleinsyre eller med deres amplifikasjon, som kan øke oppløsningen av metoden signifikant.

    Metoden for hybridisering er basert på kombinasjonen av merkede hybridiseringsprober (gentekniske eller syntetiske molekylære strukturer som inneholder nukleotidsekvenser som er komplementære til utvalgte deler av RNA). Analyse av resultater utføres i henhold til intensiteten av signalet som kommer fra etiketten i sammensetningen av det dannede komplekset.

    I hepatitt C er denne metoden for å påvise HCV RNA primært blitt brukt til å identifisere den direkte i hepatocytter, og i tester referert til som in situ hibidisering [30]. Muligheten for direkte deteksjon av HCV RNA i vev gjorde det mulig å oppdage det i mononukleære blodceller, spyttkjertelceller og andre vev i kroppen til en pasient med hepatitt C [31,32].

    Hybridiseringsmetoden som brukes for påvisning av HCV RNA gjør det mulig å demonstrere tilstedeværelsen av negative (replikative) kjeder av HCV RNA, hvilket indikerer en aktiv replikasjon av viruset [33].

    Polymerasekjedereaksjonsmetoden er for tiden den mest brukte metodiske teknikken som ligger til grunn for nesten alle molekylære biologiske metoder for å detektere HCV RNA. Videre er bestemmelsen av HCV RNA mulig både i kvalitativ og kvantitativ form, noe som er spesielt viktig for utnevnelse, overvåking og evaluering av effektiviteten av den anvendte terapi.

    De viktigste varianter av metoden er:

  • polymerasekjedereaksjon (PCR);
  • ligasekjedereaksjon;
  • NASBA;
  • TMA (transkripsjons-mediert amplifikasjonsreaksjon, transkripsjons-mediert amplifisering).

    Polymerase kjede reaksjon er en mye brukt metode for gjenkjenning av HCV RNA, både i Russland og i utlandet. Den er basert på en multi-syklusprosess som ligner den naturlige replikasjonen av nukleinsyre, med hver syklus bestående av suksessive stadier.

    Fra det studerte materialet (serum eller blodplasma, leverbiopsi) isoleres HCV RNA. Med tanke på at HCV-nukleinsyren er representert ved RNA, og et cDNA-molekyl er nødvendig for amplifisering, ved bruk av enzym-revers transkriptase, oppstår dannelsen av enkeltstrengede HCV-cDNA-molekyler. I det neste trinnet er den såkalte "HCV" festet til en spesifikk del av hver av HCV-cDNA-kjedene primrene er korte oligonukleotider komplementære til kjente nukleotidsekvenser. Sammenligning av den primære strukturen av 5'UTR-regionen i genomet av forskjellige HCV-isolater avslørte deres ubetydelige variabilitet (mellom genotyper, nukleotidhomologi - 92-98% og innenfor genotypen 98-99%). Dette gjorde det bedre å velge primere fra denne sonen av HCV RNA og deres bruk i diagnostiske testsystemer produsert i vårt land og i utlandet.

    Videre, ved hjelp av enzymet DNA-avhengig DNA-polymerase, oppstår syntesen av nye DNA-segmenter. For tiden brukes bakteriene Thermophilus termus (Tth polymerase) eller Thermophilus aquaticus (Taq polymerase) vanligvis som kilde til dette enzymet. Ved å ha termisk stabilitet i nærvær av mangan- og magnesiumioner kan dette enzymet samtidig brukes til å syntetisere komplementære enkeltstrengede HCV-cDNA-molekyler og amplifisere utvalgte cDNA-regioner. Ved sluttfasen av en syklus av reaksjonen, ved bruk av DNA-polymerase, finner en syntese av nye tråder av komplementære HCV-cDNA sted. Multiple repetisjon av reaksjonssyklusene fører til akkumulering av HCV-cDNA-fragmenter, som kan registreres ved anvendelse av polyakrylamidgelelektroforese etterfulgt av visuell deteksjon eller bruk av hybridisering med oligonukleotidprober, som øker sensitiviteten og spesifisiteten til de diagnostiske produktene som anvendes. Bruken av primere merket med enzymer muliggjør opptak av PCR-resultater ved bruk av enzymimmunoassay.

    Et konstant mål for forskere som designer diagnostiske systemer for å oppdage HCV RNA, er å øke følsomheten og spesifisiteten. Dette målet blir betjent av en PCR-variant, betegnet "nestet PCR" (nestet PCR) [34]. Et karakteristisk trekk ved denne metoden fra "klassisk" er samtidig bruk av to par primere, hvorav den ene er komplementær til den indre delen av amplikonet oppnådd etter den første amplifikasjonsrunde. Samtidig antas det at med denne PCR-varianten er det en høyere risiko for forurensning av prøvene, noe som kan føre til falske positive resultater [35].

    Det akutte behovet for bestemmelse av HCV-RNA og vanskelighetene forbundet med storskala produksjon av svært følsomme og spesifikke diagnostiske sett for PCR-diagnostikk, har bestemt utbredt anvendelse av preparater i vitenskapelige laboratorier. Sammenligning av disse testsystemene, de såkalte "hjemme" -testene ("in house tests") viste deres høye variabilitet i følsomhet og spesifisitet, samt mangel på reproduserbarhet av resultater mellom laboratorier og en rekke diagnostiske produkter. Således var det kun 22 (16%) som kunne bestemme tilstedeværelsen eller fraværet av viralt RNA i de angitte kontrollprøver [36] når man utførte den første europeiske syklusen "ekstern" kvalitetskontroll for å detektere HCV RNA (1996) fra 136 laboratorier. Et lignende resultat ble notert i vårt land under lignende arbeid under det føderale systemet for ekstern kvalitetskontroll (2001), da bare 14 (14,4%) av 14 deltakende laboratorier kunne løse oppgaven [37].

    Årsakene til utseendet på falsk-negative og falsk-positive resultater av HCV RNA-deteksjon er forskjellige. For falske negative resultater:
    - tap eller ødeleggelse av HCV RNA som forberedelse til respons av klinisk materiale;
    - Tilstedeværelsen i prøven av inhibitorer som påvirker de forskjellige komponentene i PCR. Disse inhibitorene er representert av forskjellige kjemiske eller proteinstoffer. For eksempel: Tilstedeværelsen i spermevæsken av revers transkriptasehemmere tillot ikke å detektere HCV RNA og snakker om muligheten for å realisere seksuell overføring av hepatitt C [38]; tilstedeværelsen av hepaprine [39]; høye nivåer av serumkryoglobulin [40];
    - manglende overholdelse av termisk lagring og transport av klinisk materiale. For falske positive resultater:
    - forurensning mellom prøver (ved behandling av prøver og / eller arbeid med reaksjonsblandingen), inkludert forurensning med en positiv kontrollprøve;
    - forurensning med forforsterkningsprodukter (amplikoner) som kan forurense testprøvene og løsningene gjennom aerosoler eller laboratorieutstyr.

    Den massive introduksjonen av PCR-diagnostikk per definisjon av HCV RNA har satt opp til overgang til et nytt nivå av laboratorieundersøkelse for helsevesenet. Isolering av isolerte soner for gjennomføring av hovedstadier av PCR (for prøveforberedelse; amplifikasjon; å ta hensyn til de oppnådde resultatene); et separat sett for hvert trinn i reaksjonslaboratoriet klær, automatiske pipetter; eksistensen av standard diagnostiske sett og, viktigst, reduserer forekomsten av falske resultater tilstedeværelsen av høyt kvalifisert laboratoriepersonell.

    Det første standardiserte kit for å bestemme HCV RNA ("Amplicor ™ HCV", "Roche Diagnostic Systems") ble produsert i 1993. I løpet av årene har HCV RNA-sett utviklet seg, hovedformålet var å øke sensitiviteten og spesifisiteten. Ved utforming av Amplicor TM HCV ble flere originale metoder brukt til å identifisere 100 eller flere kopier av HCV RNA per ml. I tillegg til å håndtere mulige tilfeller av forurensning av prøver og løsninger som brukes i settet. Bruken av enzymet - amperses og deixiuridintrifosfat (dUTP) gjør det mulig å ødelegge de forrige aplikonene i den første forløpssyklusen, med hvilken forurensning kan forekomme. Ødeleggelsen av amplifikasjonen ved slutten av den første amplifikasjons syklusen (ved +55 ° C) tillater ikke enzymet å ødelegge amplikoner valgt som mål. Hovedinnovasjonen var innføring av internkontroll. Betydningen av denne innovasjonen ligger i innføringen av en sekvens som ligner den amplifiserte regionen av HCV RNA i hver testprøve, som deretter påvises ved å bruke de tilsvarende primere i amplifikasjonsreaksjonen i en lignende modus. Fraværet av en positiv reaksjon ved påvisning av intern kontroll indikerer tilstedeværelsen av et falsk-negativt resultat av reaksjonen på nærværet av HCV RNA i prøven under studien. Den neste generasjonen ble diagnostisert med legemidlet, betegnet "HCV Amplicor 2.0", som ved bruk har en sensitivitetsgrense for 50 HCV RNA-molekyler.

    Systemet for å detektere HCV RNA ved hjelp av Roche-sett kan ikke betraktes isolert fra deres instrumentering, som bestemmer den høye kvaliteten på testingen. Utviklerne av metoden søkte å automatisere alle trinn i reaksjonen. Utførelsen av denne ideen var "COBASAmpliPrepTM" -systemet, som lar deg fullstendig automatisere prosessen med å isolere HCV RNA, amplifikasjon og deteksjon, og dermed redusere risikoen for falsk positive og falsk-negative resultater, samtidig som du opprettholder høy følsomhet og spesifisitet [41].

    Ligase kjede reaksjon for påvisning av HHC RNA. (LCR). Metoden er basert på evne til enzymet "DNA-avhengig DNA-ligase" for å syke (ligate) pausene av fosfodiesterbindingen i DNA i nærvær av ATP og Mg2 + -ioner. Som med "klassisk" PCR for påvisning av HCV RNA, er den første fasen av LCR revers transkripsjon for å produsere HCV cDNA. Videre binder DNA-ligasen to primerpar (komplementær til den 5'-ukodede sonen av HCV RNA), som videre amplifiseres. Påvisning av LCR-amplifikasjonsprodukter utføres ved å ta hensyn til reaksjonen av antigen-antistoff. Hver av de to primrene er merket med en annen hapten. Den første av disse er fanget av antistoffer adsorbert på mikropartiklene. Etter vaskeprosedyren ved bruk av et andre par antistoffer merket med en fluorescerende label, er de selektivt interaksjon med haptenet i amplifikasjonsproduktet, etterfulgt av en substratreaksjon og telling på et fluorimeter.

    Sensitiviteten til denne metoden er ca. 200 kopier av HCV RNA per ml, noe som gjør det mulig å løse ulike kliniske diagnostiske problemer [42]. For tiden er diagnostiske sett for å påvise HCV RNA basert på LCR produsert av Abbott.

    Nukleinsyre-sequensforsterkning - NASBA-metode for påvisning av HCV-RNA er basert på samtidig virkning av tre enzymer: aviær myeloblastom revers transkriptase, avian RNAase og T7 RNA polymerase [43.]. I motsetning til RT PCR reverserer ikke det første trinnet transkripsjon av HCV RNA. Ved bruk av de anvendte enzymene kan mer enn 10 (9) kopier av HCV cDNA-regionen oppnås innen 90 minutter [44]. Muligheten for å utføre reaksjonen ved lave temperaturer (+41 C) forenkler arbeidet sterkt og eliminerer behovet for utstyr som gir sykliske endringer i høye temperaturer. Rekord av resultatene av reaksjonen utføres under anvendelse av elektrokemiluminescens. Til tross for at NASBA er nær RT PCR i følsomhet, er metoden ikke mye brukt til å detektere HCV RNA. For tiden utvikles en variant av metoden som kombinerer prinsippene for NASBA og "Real-time RT PCR".

    Den transkripsjonsmidlede amplifikasjonsmetoden (TMA) er forskjellig fra PCR og LCR, hovedsakelig fordi den direkte amplifiserer fragmenter av HCV RNA og ikke HCV cDNA. Ved den første fase av reaksjonen er en primer (nr. 1) festet til HCV RNA og en kopi av målmolekylet, cDNA, syntetiseres ved å bruke et enzym (revers transkriptase). Omvendt transkriptase, som også har aktiviteten til RNase-H, ødelegger viralt RNA i et hybrid RNA-cDNA. Deretter er en andre primer festet til cDNA-molekylet, etterfulgt av fullføring av dobbeltstrenget DNA ved bruk av revers transkriptase. Ved hjelp av en annen β-RNA-polymerase, transkriberes RNA fra cDNA, som fører til dannelsen av 100 til 1000 kopier av amplikonet HCV RNA i en reaksjonscyklus. Primer nr. 2 er festet til disse RNA-apliconene med videre syntese av cDNA-kopier og ødeleggelse av RNA-molekylet. Vedlegg av primer nr. 1 til cDNA etterfulgt av fullføring av dobbeltstrenget DNA utløser neste amplifikasjons syklus. Opptak av resultatene av reaksjonen utføres på et lumenometer, siden de resulterende RNA-amplikoner interagerer spesifikt med DNA-prober merket med kjemiluminer.

    Som fordeler ved TMA-metoden ved detektering av HCV RNA, er det bemerket:

  • utfører reaksjonen ved lavere temperaturer sammenlignet med PCR;
  • dannelsen av et større antall amplikoner i en reaksjonssyklus, noe som reduserer tiden som kreves for å oppnå sluttresultatet (30-40 minutter) og øker følsomheten av reaksjonen (50 kopier / ml) [45].
  • reduserer risikoen for forurensning, siden RNA er mindre stabil enn DNA.

    Sammenligningsstudier på påvisning av HCV RNA ved bruk av TMA og andre metoder har vist et høyt tilfeldighetsfall av resultater [45].

    En kombinasjon av hybridiserings- og amplifikasjonsprinsippene ligger under metoden for å detektere HCV-RNA, betegnet som "hybridiseringsmetode ved bruk av forgrenede prober eller merket DNA-analyse (bDNA) [46]. I motsetning til PCR forsterker denne testen ikke HCV-cDNA-molekylene, men signalet. Reaksjonen utføres i 96-brønnsplater hvor HCV-RNA-fragmenter fra den 5'-utranslaterte sone og HCV-RNA-kjernegenet blir adsorbert på grunn av påfølgende binding til et syntetisk forgrenet DNA-molekyl og hybridisering med en prøve merket med alkalisk fosfotase med En kraftig økning i mottatt signal oppnås med en forsterker og påfølgende enzymatisk reaksjon. For øyeblikket har tredje generasjons diagnostiske sykdommer vist seg på det diagnostiske markedet (Vaueg 3.0 Hepati-Tis C Virus RNA), som har sensitiviteten til å detektere 520 IE / ml (2500 kopier av HCV RNA).

    KVANTITATIV DETEKSJON AV HCV RNA. For å vurdere konsentrasjonen av HCV RNA benyttet kvantitativ versjon av PCR. I utgangspunktet ble konsentrasjonen av HCV RNA karakterisert ved ordinære verdier, slik som "+", "++", etc., visuelt reflekterende intensiteten av bånd oppnådd ved elektroforese av amplifikasjonsprodukter, eller ved sluttfortynningsfremgangsmåten, dvs. ved nærvær av et positivt resultat i finalen titreringspunkt. Vanskelighetene med å standardisere alle stadier av PCR tillater ikke en objektiv vurdering av konsentrasjonen av HCV RNA, noe som fører til signifikante feil i tolkningen av de oppnådde resultatene.

    Foreløpig blir resultatene av studien uttrykt i kvantitative enheter: Antall kopier av HCV RNA inneholdt i 1 ml. I absolutte eller logaritmiske termer (log 10). Basert på det faktum at konsentrasjonen av detektert HCV RNA reflekterer antall virale partikler, betegnes denne indikatoren som "viral ekvivalent (ekv)", med tillegg av prefikset k (kilo, tusen) eller M (millioner). En annen måte å uttrykke mengden av virale partikler på er deres vektekvivalenter. For eksempel, i gram eller piktogrammer (1 pg tilsvarer ca. 1 million eq). Mangfoldet av verdier som brukes, gjør det vanskelig å tolke resultatene oppnådd i ulike laboratorier. Derfor har WHOs ekspertkomite for biologisk standardisering produsert en "internasjonal standardprøve" som inneholder HCV RNA (frysetørket serum som inneholder HCV RNA av den første genotypen), konsentrasjonen av disse er uttrykt i internasjonale enheter (IE / mL) [47]. Spesielle koeffisienter gir deg mulighet til å beregne de oppnådde konsentrasjonsindikatorene i internasjonale enheter.

    Nesten alle PCR-varianter brukes til å bestemme konsentrasjonen av HCV RNA. I dette tilfelle pålegges en rekke spesifikke krav på diagnostiske preparater, hvorav det viktigste er den strenge lineariteten av resultatene, dvs. en økning i signalet av den registrerte reaksjonen med en økning i konsentrasjonen av HCV RNA i prøven under studien. Bruk av interne standarder med forskjellige nivåer av HCV RNA gjør at vi kan unngå mange metodologiske feil som kan påvirke reaksjonsresultatet [28]. Følsomheten til den anvendte diagnosen (Amplicor HCV Monitor v2.0; LCx HCV RNA Quantitative Assay) gjør det mulig å oppdage HCV RNA ved å starte ved 50 kopier per ml [48,49], noe som er spesielt viktig for å forutsi effektiviteten av valgt antiviral terapi.

    Real-time PCR ("Real-time RT PCR") er et av de mest lovende alternativene for en kvantitativ metode for å oppdage HCV RNA. Metoden og maskinvaren er i fellesskap utviklet av spesialister fra Roche og Percin Elmer. Prinsippet med fremgangsmåten er evnen til å hydrolysere cDNA-sekvenser i retning av 5 '---- 3'. Reaksjonen bruker en spesiell sonde merket med to fluorescerende fargestoffer som har lignende absorpsjons- og fluorescensmaksima. I nærvær av amplifikasjonsprodukter spalter Tagpolymerase sonden, som forhindrer overføring av energi fra ett fargestoffmolekyl til et annet, og forhindrer dermed frigjøring av et kvantum av lys. Et spesielt instrument registrerer reaksjon og matematisk modellering av fluorescenskinetikken ved hvert trinn av reaksjonen, som tillater oppnåelse av informasjon om den opprinnelige konsentrasjon av HCV RNA.

    Et karakteristisk trekk ved "sanntids-PCR" er evnen til å oppnå informasjon om forekomsten av HCV RNA direkte i reaksjonsprosessen, noe som gjør det mulig å redusere analysetiden i kombinasjon med høy følsomhet og linearitet av resultatene [50]. Ifølge Tatyana Yashina og medforfattere kan denne metoden oppdage 200 kopier av HCV RNA per ml. [51].

    METODER FOR GENOTYPING HCV RNA. Definisjonen av HCV tilhørende en bestemt genotype og subtype har blitt anvendt for å løse ikke bare rent vitenskapelige, men også praktiske problemer. For eksempel: søker etter infeksjonskilden under utbrudd av hepatitt C eller forutsi effekten av den brukte terapien.

    Gullstandarden for HCV-genotyping er den direkte bestemmelse av den primære strukturen av HCV RNA med den etterfølgende fylogenetiske analysen [52], som gjør det mulig å tydelig karakterisere dette virusisolatet. Denne informasjonen kan fås ved hjelp av følgende sekvenseringsalternativer:

  • direkte;
  • basert på standard kloning;
  • sekvensering av PCR-reaksjonsprodukter (begrenset sekvensering).
    Til tross for nøyaktigheten av resultatet, er den direkte sekvenseringsmetoden ikke brukt i praktisk helsetjenester på grunn av de tekniske vanskelighetene i studien og de høye kostnadene ved arbeidet. Samtidig er tilgjengeligheten av informasjon om den primære strukturen til HCV RNA en referansemetode for genotyping, og tilgjengeligheten av instrumenter for automatisk sekvensering forenkler oppnåelse av resultatet.

    For tiden brukes i de fleste tilfeller metoder basert på bruk av PCR med typespesifikke primere for genotyping av HCV RNA. For første gang ble genotyping av HCV RNA utført av N. Okamoto og medforfattere i 1992 ved bruk av RT-PCR [53], som inkluderer to amplifikasjonstrinn. Den første av dem ble utført med universelle, for alle HCV-genotyper, primere, den andre med en blanding av typespesifikke primere med å oppnå spesifikke amplifikasjonsprodukter av forskjellige lengder. Tilstedeværelsen av en bestemt genotype ble dømt av størrelsen på det amplifiserte produktet. Som primere brukes typespesifikke sonder, hvor informasjonen ligger i 5'UTR, Core eller NS5 - RNVGS-regioner [54].

    Hybridisering av amplifiserte produkter med adsorberte genspesifikke prober (fra den 5'-ikke-translaterte sone av HCV RNA) adsorbert på nitrocellulosemembranen ligger under testen "INNO-LiPA HCV, INNO-GENETICS" [55]. Ved å bruke denne testen var det først mulig å skrive genotyper: la; lb; 2a; 2b; 3a; 3; 4 og 5a. I fremtiden gir testsystemene til 2. generasjon "INNO-LiPA HCV II, INNOGENETICS" oss mulighet til å skille alle 6 genotyper og i tillegg 2c; 2d; 2i; 3c; 4a-h; 6a og 10a. [56]

    Metodisk arsenal for å bestemme HCV-genotyper er ikke begrenset til de ovennevnte metodene og inkluderer forskjellige metoder:

  • genotyping basert på analyse av forsterkede profiler for forsterkede produkter (RFLP). Amplifikasjonsprodukter av HCV RNA-fragmenter (5'UTR- eller NS5-regionen av HCV-RNA) spaltes av restriksjonsenzymer. De resulterende fragmentene varierer i lengde avhengig av restriksjonene i dem, som er spaltet. Resultatene av elektroforese og deres sammenligning tillater oss å identifisere HCV-genotypen i prøven under studien [57]. Sammenligning av resultatene av genotyping med PCR-RFLP med datasekvensering viste høy grad av tilfeldighet av resultater - 95% [58].
  • genotyping basert på SSCP-metoden (evaluering av konformasjonspolymorfismen av enkeltstrengede DNA-fragmenter). Den 5'-ikke-translaterte regionen av HCV RNA, som har et minimalt sett av nukleotidvariasjoner som skiller genotyper fra hverandre, ble valgt som studieobjekt. Dette faktum bestemmer muligheten for å anvende vanlige primere under genotyping [59].

    SEROTYPING Anti-HCV ble gjort mulig ved studier av P.Simmonds og medforfattere som etablerte tilstedeværelsen av antistoffer rettet mot genotype-spesifikke epitoper, informasjon om hvilke kodes av NS4-regionen i HCV RNA [60]. Ved hjelp av diagnostikk for ELISA, konstruert på grunnlag av syntetiske peptider, var det mulig å skille mellom tilfeller av hepatitt C forårsaket av virus 1, 2 og 3 genotyper (89% samsvar med resultatene av genotyping). Utviklingen av testsystemer som bruker syntetiske og rekombinante antigener kodet av NS4 og Core-soner av HCV RNA, tillot oss å utvide listen over typer virusvarianter, samt å dømme tilstedeværelsen av subtyper (1a, Ib, 2a, 2b, 3a, 4a) [61,62]. For tiden utføres kommersiell produksjon av diagnostiske produkter for serotyping i spotversjonen av ELISA - "Murekh NA 1-6 Serotyping Assay, Murex Diagnostics", og i varianten "immunoblot" - RIBA HCV Serotyping Assay, Chiron Diagnostics. Sammenligningsdata for resultatene av serotyping og genotyping av HCV-RNA viste et høyt tilfeldighetsfall, og oppnådde 95% [62].

    Serotyping av anti-HCV sammenlignet med genotyping av HCV RNA har fordeler som lett reaksjon og lavere kostnad. Samtidig kan denne metoden på ingen måte erstatte genotyping. Resultatene av serotyping av anti-HCV indikerer typen anti-HCV med nåværende eller tidligere infeksjoner. I enkelte tilfeller (oftest hos pasienter med hemofili) registreres samtidig påvisning av anti-HCV av forskjellige subtyper, noe som kan indikere flere infeksjoner med forskjellige subtyper og HCV-genotyper [63]. I tillegg kan RNA hos pasienter med hepatitt C mot bakgrunn av en uttalt immunbrist tilstand være den eneste markøren som gjør det umulig å utføre serotyping.

    IDENTIFIKASJON OG BEHANDLING AV TESTRESULTATER AV HCV SEROLOGISKE MARKERE INFEKSJON. Tilstedeværelsen av et bredt spekter av serologiske markører av nåværende eller tidligere HCV-infeksjon, samt et moderne metodologisk grunnlag, tillater å løse mange problemer med laboratoriediagnose og forebygging av hepatitt C. Tabell 2 viser de serologiske markørene for HCV-infeksjon og de viktigste områdene av testen deres.

    Tabell 2
    Diagnostisk betydning av markører av nåværende eller tidligere HCV-infeksjon

    screening
    i tjeneste
    av blod

    bekreftet
    LØFTER
    resultat
    + anti-HCV

    En av hovedoppgavene til laboratoriediagnose av hepatitt C er å diagnostisere og skille akutt fra kronisk hepatitt C ved å identifisere serologiske markører for infeksjon. Som med annen akutt viral hepatitt, serologiske markører av HCV-infeksjon vises konsekvent og forsvinner i løpet av infeksjon og helingsprosessen (figur 2).

    HCV RNA kan detekteres på dagene 7-21 etter infeksjon med HCV og anti-HCV på dagene 20-150 (i gjennomsnitt 50 dager) [64]. Spekteret av anti-HCV kan variere avhengig av perioden med akutt hepatitt. Det antas at den første til å kunne identifisere antistoffer kodet av Core og NS5 sonene av HCV RNA. Anti-HCV til proteiner kodet av NS4-sonen er fraværende i den akutte fasen av hepatitt C [65]. En komparativ studie av nivået av konsentrasjoner av anti-HCV, spekteret av anti-HCV og HCV RNA hos pasienter med akutt og kronisk hepatitt viste noen forskjeller [66]. Etter vår mening kan disse forskjellene være knyttet til de individuelle egenskapene til den smittsomme prosessen, noe som reduserer deres diagnostiske verdi.

    Fig. 2. Akutt hepatitt C

    I analogi med laboratoriediagnostikk av hepatitt A og B ble det forventet at bestemmelsen av antistoffer mot HCV-klasse IgM ville ha så mye diagnostisk verdi som IgM anti-HAV og IgM anti-HBc. Testdata fra serum hos pasienter med akutt og kronisk hepatitt C for tilstedeværelse av anti-HCV IgM indikerer imidlertid at de ofte finnes hos disse pasientene - henholdsvis 50-93% og 50-70% [67,68], disse resultatene indikerer at deteksjon av IgM anti - HCV kan ikke brukes som markør for akutt HCV-infeksjon.

    Fraværet av en markør som hevder rollen som den "gyldne" standarden for akutt hepatitt C, bestemmer behovet for en omfattende vurdering av de oppnådde resultatene, basert på dynamisk observasjon av pasienten.

    Ikke mindre viktig retning ved bruk av svært følsomme metoder for testing av HCV RNA reduserer risikoen for utvikling av posttransfusjons hepatitt C. Behovet for slikt arbeid bestemmes av nærværet av "vinduet" -fasen, dvs. tiden mellom den første detektering av HCV-RNA og utseendet av anti-HCV, samt eksistensen av blodgivere (pasienter med kronisk hepatitt C) som har HCV-RNA i fravær av anti-HCV. Det nåværende systemet for overvåking av donert blod for HCV inkluderer bare anti-HCV testing, og risikoen for infeksjon med hepatitt C forblir. Basert på dette er spørsmålet om å teste blod for tilstedeværelse av HCV RNA ved hjelp av moderne metoder (NAT-metodene - "nukleinsyreampliseringstest") legitim. Faktoren som begrenser dette arbeidet er høye kostnader for forskning. For å redusere kostnadene anbefales det å teste bassenger av blodsera (fra 8 til 96 prøver) etterfulgt av et søk etter en positiv prøve ved detektering av HCV RNA i serabassenget. Når man tar hensyn til fortynningsfaktoren til det ønskede HCV RNA når man ser blodsera, blir spørsmålet om bruk av de mest sensitive deteksjonsmetoder avgjørende. Det antas at bruk av diagnostiske sett for NAT - med en følsomhet på 50-100 IE / ml kan redusere risikoen for hepatitt C etter transfusjonen.

    Utvilsomt er listen over problemer som kan løses ved testing av hele spektret av markører av HCV-infeksjon ikke begrenset til disse to områdene. Tilgjengeligheten av moderne testmetoder i kombinasjon med kunnskapen om deres evner åpner bred utsikt for vitenskapelig og anvendt arbeid på hepatitt C.


  • Forrige Artikkel

    Hepatitt C Virusantikropp

    Relaterte Artikler Hepatitt