Hva er PCR-analyse og viral belastning?

Share Tweet Pin it

Polymerasekjedereaksjon (PCR) er en laboratoriemetode for å bestemme DNA og RNA. Det ble først testet for nesten et halvt århundre siden av den amerikanske Carey Mullis. Denne overfølsomme analysen er i stand til å identifisere genombæreren ved et enkeltkildemolekyl inneholdt i blod, spytt eller hud.

PCR-metoden har gode utsikter, brukes ikke bare i medisin, men også innen genteknologi og rettsmedisin. Med det, klone og lage nye typer DNA, bestemme graden av slektskap. En kriminell er identifisert av et epitel som ble funnet på forbrytelsesstedet.

PCR-analyse for hepatitt - hva gjør de og hvorfor?

Hvorfor er en PCR-analyse nødvendig for mistanke om hepatitt C, hva er det?

Hepatitt C-virus er et RNA-virus som inneholder 6 genotyper og opptil 500 undertyper. Av alle hepatitt har dette viruset den høyeste mutasjonskapasiteten og overvinter beskyttelsesbarrieren til immunsystemet. Av det totale antall hepatitt tilfeller forårsaket C-virus 70% av tilfellene av kronisk form og 30% av skrumplever og leverkreft.

Essensen av metoden: En del av genet under studien ved hjelp av spesielle enzymer og forhold som er tvunget til å formere seg in vitro. PCR-analyse tillater å bestemme virusstammen, uten hvilken det er umulig å utføre effektiv behandling: hver genotype er forskjellig følsom for antivirale legemidler. To typer PCR brukes:

Antiviral terapi krever konstant overvåking for raskt å justere behandlingen, og for disse formål brukes polymerasekjedereaksjon også.

Kvalitativ og kvantitativ PCR

PCR-kvalitativ på hepatitt C gir svaret: Er det en stamme av virus C i pasientens blod og hvilken. Genotyping er nødvendig for å klargjøre diagnosen, prognosen for sykdommen og bestemme tidspunktet for behandlingen.

I henhold til den aksepterte klassifiseringen er et gen angitt med et tall, og en undertype er et lite latinsk brev.

Spesiell forberedelse basert på naturlige stoffer.

Prisen på stoffet

Behandling vurderinger

De første resultatene er følt etter en uke med administrasjon.

Les mer om stoffet

Bare 1 gang per dag, 3 dråper

Instruksjoner for bruk

Dekryptere genotype C-virustabellen:

  • Genotype 1a, 1b, 1c
  • Genotype 2a, 2b, 2c, 2 d
  • Genotype 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f
  • Genotype 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 4f, 4g, 4h, 4i, 4j
  • Genotype 5 a
  • Genotype 6 a

De vanligste genotypene 1,2,3. I Russland er de vanligste 1a, 1b, 2 og 3 stammer av virus C.

Genotypen av virus 1b er vanskeligere enn andre å behandle, i 90% blir det kronisk, hvorav 30% gjenfødes som leverkreft eller cirrhose.

Genotyper 2a og 3a har en grad av kroniskitet på 33-50%, mer responsive mot antiviral terapi.

Ved bekreftelse av virusets tilstedeværelse utføres en kvantitativ PCR-test for hepatitt C, som brukes til å beregne antall RNA-molekyler som er tilstede i pasientens laboratorieprøve.

Dekoding analyse

Kvalitets PCR analyse har to svar:

PCR-negativ betyr at patogenet ikke oppdages i blodprøver.
Et positivt svar antyder motsatt: RNA av en eller annen genotype av virus C er funnet.

Sannsynligheten for pålitelighet av resultatet er 95%. De resterende 5% er en feil forårsaket av en person. Denne muligheten er tillatt på grunn av de høye kravene til studien:

  • regler for lagring av reagenser;
  • passende kvalifikasjoner av medisinsk personale;
  • biomaterial renhet.

PCR-settet har 100% diagnostisk nøyaktighet.

Kvantitativ PCR av Hepatitt C RNA gjør det mulig å bestemme virusbelastningen på pasientens kropp. Med sin hjelp:

  • stadium av sykdommen er spesifisert (akutt, kronisk);
  • bestemmer effekten av antiviral behandling
  • Behovet for leverbiopsi undersøkes.

I noen tilfeller føler pasienten ingen tegn på sykdommen, mens HCV-infeksjonen oppdages ved PCR-metoden. Dette betyr at sykdommen er i et tidlig stadium av utvikling eller i kronisk form. Ytterligere studier er nødvendig for å klargjøre diagnosen, for tidlig antiviralbehandling.

Hepatitt C virusvekt

Viral belastning viser aktiviteten til hepatisk virus, hvor aktiv reproduksjonen oppstår.

Hva er dette?

PCR-kvantitativ hepatitt C måles i internasjonale enheter per 1 ml eller IE / ml, hvilket betyr hvor mange kopier av ribonukleinsyre av en bestemt stamme av virus C finnes i 1 ml blod under test.

Hva er høyt, hva er lavt?

Den virale lastanalysen tillater å bestemme tilstedeværelsen av viralt RNA i en konsentrasjon på 50 IE / ml. Normal viral belastning er når ingen HCV RNA-molekyl oppdages av PCR.

Viral load table:

  • lav konsentrasjon på 600 IE / ml 3 * 104 IE / ml;
  • middels konsentrasjon fra 3 * 104 IE / ml til 8 * 105 MM;
  • høyt nivå mer enn 8 * 105 IE / ml.

Lav viral belastning er et signal om at terapeutisk behandling er valgt riktig, og prognosen for en kur for hepatitt C er gunstig.

En høy konsentrasjon av virusceller indikerer at sykdommen er i den akutte fasen. Pasientens blod er en farlig infeksjonskilde.

Viral belastning, indikatorer av hvilke er på gjennomsnittlig nivå, kjennetegner enten den kroniske scenen av HWS, eller kan ha to utviklings trender: å øke eller redusere.

Etter ferdigstillelse, etter 6 måneder, utføres kontroll PCR.

Kostnad for PCR-diagnostikk

Følgende symptomer bør være årsak til bekymring:

  • generell svakhet;
  • misfarging av hud, øye sclera, utslipp;
  • kvalme;
  • redusert appetitt;
  • smerter i muskler og ledd;
  • tyngde i høyre hypokondrium;
  • forhøyede blodnivåer av AST og ALT.

I kontakt med infiserte pasienter, i den preoperative perioden, anbefales også hemodialyse undersøkelse.

Offentlige klinikker gjør en blodprøve for PCR gratis hvis det er en henvisning fra en smittsom spesialist eller en hepatolog.

Betalte tjenester for PCR-diagnostikk er gitt i alle større russiske byer. Kostnaden avhenger av type test, tilgjengelig utstyr, timing og andre faktorer.

Høykvalitets PCR analyse i Moskva og St. Petersburg vil koste fra 600 til 900 rubler. I regionene - fra 300 til 800 rubler.

Bestemmelsen av hepatitt C viral belastning vil koste 17 000-22 000 rubler. For andre typer infeksjoner prisen på kvantitativ forskning: 1200-10000 rubler.

Fordeler og ulemper ved PCR-metoden

Hva er fordelene med polymerasekjedereaksjonsmetoden over andre diagnostiske metoder?

  1. Et bredt spekter av applikasjoner. Ved å bruke PCR, ved hjelp av standardutstyr, kan du identifisere noe virus.
  2. Nøyaktighet av bestemmelse av patogenet. Ved hjelp av ulike kombinasjoner av enzymer og analyseteknikker oppnås en 100% spesifikasjon av studien for den angitte infeksjonen.
  3. Høy følsomhet. Metoden gjør det mulig å oppdage tilstedeværelsen av ett virusmolekyl i blodet.
  4. Effektivitet. Kvalitativ analyse er klar om noen timer, kvantitativ - om to dager.
  5. Diagnose av viruset i inkubasjonsperioden. Under PCR bestemmes patogenet ikke ved tilstedeværelse av antistoffer, når kroppen har en immunrespons, men før starten av den patologiske prosessen, noe som letter behandlingen.

Ulemper med PCR er resultatet av fordelene:

  • Analysens renhet krever høyeste grad av renhet, inkludert luft i laboratoriet, slik at "fremmed" DNA ikke kommer inn i prøven under studien;
  • høye krav til personell engasjert i innsamling og analyse av biomateriale.

Bruk av PCR-diagnostikk

Polymeraskjedereaksjon (PCR) i molekylærbiologi er en eksperimentell metode for å oppdage virus. Det lar deg øke konsentrasjonen av bestemte nukleinsyrefragmenter (DNA) i prøver av biologisk materiale, noe som gjør det mulig å bestemme dem (gjenkjenne) og telle.

Analysen utføres som følger. Genetisk materiale (en blodprøve), som potensielt kan inkludere det ønskede genet, blir introdusert i røret. Det er også plassert primere - kjemisk syntetiserte segmenter av en liten lengde av ønsket gen.

DNA- eller RNA-polymerase er også tilsatt til karet, det er i stand til å lineere opp en nukleinsyrekjede som er helt identisk med originalen. Den resulterende sammensetning injiseres og et sett med fire fri nukleotider - et spesielt byggemateriale for RNA eller DNA, hvorav den ene inneholder radioaktive fosforpartikler.

Den resulterende blanding oppvarmes til 95-96 ° C, og derfor er to DNA-spiraler, som normalt er sammenflettet, vevd. Deretter avkjøles legemidlet, hvorpå primene selv fester seg til den ønskede regionen av virusgenomet, og hindrer at RNA (eller DNA) danner en dobbelt helix igjen.

Under kjøleprosessen søker polymerasen etter en fri nukleotidkjede. For funksjonen av dette enzymet er det nødvendig en enkelt kjede av nukleotider. Siden polymerase glir langs DNA-kjeden (som en ring på et tau), er den ikke i stand til å arbeide på en dobbelt helix.

Etter dette utføres en gjentatt varmesyklus som skyldes hvilke kjeder av nukleotider som er separert. Ved hver av disse syklusene av PCR øker mengden i prøven av det ønskede hepatittgenet eksponentielt, og resten av det genetiske materialet blir produsert (vokser) lineært.

Etter rensing av løsningen fra nukleotidrester og separasjon ved elektroforese av DNA-kjeder av molekylvektsparameteren, kan man lett bestemme om det er et ønsket gen i prøven under studie eller ikke.

Fordeler med PCR

Laboratorietesting ved hjelp av PCR tillater enda mer informasjon enn tilstedeværelsen av virus-RNA. Ved å bestemme parameteren for nivået av radioaktiv stråling, er det mulig å identifisere hvor mye genetisk materiale som opprinnelig var inneholdt i prøven under studien. I tilfelle av hepatitt, bestem indikatoren for nivået av viral belastning.

En annen fordel ved denne metoden er den meget høye følsomhetsgrad av CR-reaksjonen. Det er mye høyere enn klassiske metoder for å oppdage virus. Ideelt sett, for å identifisere ønsket gen, for PCR, er bare ett virus i prøven tilstrekkelig.

I tillegg er PCR helt spesifikt. Dens primere er utformet på en slik måte at de stemmer fullt overens med de unike områdene av de ønskede gener som ingen annen sekvens har. Som fingeravtrykk er unike, er det unike nukleotidsekvenser i hvert gen.

Kvalitativ analyse av PCR

Kvalitativ analyse lar deg bare identifisere tilstedeværelsen av et virus i blodet. Denne testen skal utføres for alle pasienter i hvilke antistoffer mot hepatitt C ble funnet i blodet. Det kan resultere i bare én av to verdier: "detektert" eller "ikke oppdaget". I en sunn person skal normen (referanseverdi) "ikke oppdages".

Det er en spesiell tolkning av slike resultater av kvalitativ forskning:

  • Resultatet er "oppdaget". Dette betyr at et fragment av RNA som er spesifikt for hepatitt C-viruset ble funnet i den analyserte prøven av biologisk materiale tatt. Det er derfor et faktum at pasienten er infisert med hepatitt C-viruset. Hvis resultatet av høyverdig PCR er "detektert", indikerer dette at viruset multipliserer og på denne tiden smitter det nye leverceller i kroppen.
  • Resultatet er "ikke oppdaget." En slik dom indikerer at i den analyserte prøven av biologisk materiale som er oppnådd i dette laboratoriet, ble det ikke funnet noe fragment av RNA som er spesifikt for hepatitt C-viruset. Alternativt var konsentrasjonen av RNA av patogeninfeksjonen i denne prøven under sensitivitetsgrensen for testen.

I den akutte fasen av RNA i hepatitt C-viruset kan slike kvalitative studier ved PCR-metoden detekteres allerede etter 1-2 uker umiddelbart etter kroppsinfeksjon, det vil si lenge før utseendet av antistoffer mot hepatitt selv.

Unøyaktige testresultater fra denne studien kan fås ved å:

  • forurenset biomateriale;
  • tilstedeværelsen av heparin i pasientens blod;
  • Tilstedeværelsen i prøven av kjemiske eller proteinstoffer (inhibitorer) som påvirker de ulike komponentene i PCR.

For å gjennomføre en kvalitativ analyse av PCR, er det ikke nødvendig med spesiell forberedelse av pasienten for studien. Venøst ​​blod brukes som et materiale.

Evaluering av resultater

HPR-test av høy kvalitet har en viss grad av følsomhet, og avhengig av nøyaktigheten av forskningen og nivået på utstyret i laboratoriet kan variere fra 10 til 500 IE / ml.

Dette betyr at hvis viruset i blodprøven er tilstede i en meget lav konsentrasjon (mindre enn terskelverdien av følsomheten til dette laboratoriet), kan resultatet bestemmes som "ikke detektert" hos en pasientpatient. På grunn av dette, når det utføres en kvalitativ analyse av PCR med lavt nivå av viremia (lav viruskonsentrasjon), for eksempel for pasienter som gjennomgår antiviral terapi, er det svært viktig å kjenne følsomhetsgrensen for dette diagnostiske systemet.

Varianter av diagnostiske systemer

For å kontrollere den virologiske responsen, anbefales det å bruke diagnostiske systemer med en følsomhetsgrense på minst 50 IE / ml for antiviral behandling. Disse kriteriene er oppfylt, for eksempel med Cobas Ampicolor HCV-test-analysatorer (nøyaktig til 50 IE / ml), samt RealBest HCV RNA (med følsomhet på 15 IE / ml).

I henhold til WHO-anbefalinger, for å etablere en endelig diagnose av hepatitt C, er det nødvendig å basere seg bare på tre ganger deteksjon av C-virus-RNA i pasientens serumprøver, uten andre varianter av hepatittmarkører.

I tillegg til PCR-metoder, brukes en TMA-analyse (transkripsjonal amplifikasjonsmetode) til å detektere HCV RNA hos pasienter. Den har den beste følsomhetsgrensen (5-10 IE / ml), men i vårt land er en slik testmetode ikke særlig vanlig.

Utvalg av detekterbare virusmodifikasjoner

En slik kvalitativ bestemmelse i serum av tilstedeværelsen av RNA i hepatitt C-viruset gjør det mulig å bestemme flere genotyper av dette viruset. For tiden vet vitenskapen mer enn seks genotyper av dette viruset, så vel som om 10 subtyper av denne sykdommen.

I vårt land er vanlige virus 1, 2, 3 genotyper. Laboratorier kan oppdage følgende genotyper: 1a og 1b, 2a, 2b og 2c, samt 3, 4, 5a og 6, uavhengig av undertyper. For alle virusmodifikasjoner er deteksjonsspecifikiteten 100%.

PCR kvantitativ analyse

Ved hjelp av en kvantitativ PCR-test bestemmes nivået av konsentrasjon av hepatittviruset i blodprøver (virusbelastning). Denne testen for viremia (viruskonsentrasjon) lar deg bestemme antall enheter av et bestemt genetisk materiale (det mest virale RNA) som detekteres i en viss mengde. I dette tilfellet bestemme konsentrasjonen i 1 ml, som tilsvarer 1 cu. cm.

De kvantitative parametrene til analysen er uttrykt i figurer, for dette formål brukes internasjonale enheter (IE) per ml (ml), referert til som IE / ml, som måleenheter. Nå i noen laboratorier kan mengden av virus bestemmes i andre enheter: Antall kopier per ml er angitt som kopier / ml.

  • Datoer. For hepatitt C, gjøres en slik kvantitativ analyse av PCR umiddelbart før starten av behandlingen. Deretter 1., 4., 12. og 24. uke. Evaluering på 12. uke er indikativ, det gjør det mulig å bestemme effektiviteten av terapien.
  • Forberedelse for analyse. For å utføre en kvantitativ analyse av PCR, er det ikke nødvendig med spesiell forberedelse av pasienten til studien. En halv time før prøvetaking bør ikke røyke. Venøst ​​blod brukes som laboratoriemateriale.

Evaluering av resultater

For ulike laboratorietestsystemer er det forskjellige konverteringskvoter for denne indikatoren i IE / ml. I gjennomsnitt tar de en konverteringsparameter, der 4 kopier / ml = 1 IE / ml. Det vil si at hvis laboratoriet gir resultatet av PCR-analyse 2,4 * 10 6 kopier / ml, så skal denne parameteren deles inn i 4 og vi får 6 * 10 5 IE / ml.

En belastning på 800.000 IE / ml regnes som høy, noe som tilsvarer omtrent 3.000.000 eksemplarer / ml. Lav viremia, ifølge noen forfattere, tilsvarer parametrene for kvantitativ PCR under 400 000 IE / ml.

Som resultat av den kvantitative testen kan de endelige resultatene ikke leveres i form av en digital verdi, men: "under måleområdet" eller "ikke detektert".

  • Vurdering: "under måleområdet." Dette antyder at den kvantitative testen ikke kunne oppdage hepatitt C viral RNA, men selve viruset er tilstede i kroppen i svært lave konsentrasjoner. Dette fremgår av en ytterligere kvalitativ test, som bekrefter faktumet av tilstedeværelsen av viruset.
  • Vurdering: ikke oppdaget. Dette resultatet indikerer at den kvantitative testen ikke ble funnet i prøven av virus-RNA.

Parameteren for viral belastning bestemmer først og fremst graden av infeksiøsitet av sykdommen, nivået av "infeksjon" av pasienten. Jo høyere pasientens viruskonsentrasjon er, jo større er sannsynligheten for at den overføres til andre mennesker. For eksempel, under samleie med en syke person, eller vertikalt. Denne kvantitative indikatoren bidrar også til å bestemme effekten av behandlingen av pasienten.

Å gjennomføre en kvantitativ analyse av KKP er viktig for antiviral terapi, vurderer suksess og planlegger varighet på kurset. Med en rask respons fra kroppen til behandling og en lav grad av viremi, kan varigheten av behandlingen forkortes.

Hvis den kvantitative PCR-parameteren reduseres sakte, bør antiviral terapi forlenges eller modifiseres. Hvis nivået av viral belastning er lav, er dette en gunstig faktor for terapi, men hvis forhøyet, er metoden for behandling som brukes, ineffektiv og legemidlene eller metoder for deres bruk bør endres.

Kvalitativ analyse av PCR for hepatitt C

Hepatitt er en alvorlig sykdom som har mange årsaker. Grunnlaget for utviklingen er direkte eller indirekte skade på leveren. Med tanke på dens betydning for hele organismen, kan man bare gjette hvor vanskelig patologien er. I denne artikkelen vil vi nærmere undersøke funksjonene i kurset og laboratoriediagnosen av hepatitt C.

Årsaken til sykdommen er et virusmiddel som refererer til RNA-holdige patogener. Den har en særegen egenskap - evnen til å mutere, det vil si å forandre strukturen. På grunn av dette unngår infeksjonen fra angrepet av immunsystemet og fører i de fleste tilfeller til kronisk betennelse i leveren.

Gitt eksistensen av forskjellige undertyper av viruset, bør valget av medisiner være basert på resultatene av genotyping. Til tross for en lang studie av sykdommen og strukturen av HCV, har det ennå ikke vært mulig å utvikle en spesifikk vaksine for sykdommen.

Vanskelighetene med tidlig diagnose ligger i det asymptomatiske løpet av hepatitt, noe som fører til at en person besøker en lege på cirrhosisstadiet. For å oppdage sykdommen i tide, er det nødvendig med vanlige medisinske undersøkelser. Bare ved laboratorietesting av blod er det mulig å oppdage HCV og forhindre forurensning av andre. Faktum er at transportøren av infeksjonen i lang tid ikke kan gjette om patologien og fortsette å overføre viruset til friske mennesker.

Fremgangsmåter for overføring

I de fleste tilfeller sprer viruset gjennom blodet, da det inneholder den høyeste konsentrasjonen av patogene stoffer. Dermed overføres infeksjonen:

  • med hemodialyse;
  • med en infisert nål;
  • i ferd med å kjempe, når huden er skadet, og blodkontakt oppstår;
  • med blodtransfusjon (blodtransfusjon).

Sannsynligheten for infeksjon under intimitet er ubetydelig, da sæd og vaginal utslipp inneholder en liten mengde patogener. Risikoen for infeksjon økes betydelig i strid med integriteten til slimhinnen i kjønnsorganene. Dette observeres med aggressiv og analsex.

Når det gjelder vertikal modus for overføring, utføres den i arbeidsprosessen. I fosterets svangerskapstid kan patogen ikke trenge gjennom moderkaken til embryoet. Ved naturlig fødsel blir det patogene stoffet overført til barnet når huden er skadet, når kontakt med moderens blod blir observert.

Etter patogenes inntrengning i en sunn organisme begynner syntesen av antistoffer, som er beskyttelse mot infeksjon og tilhører immunstrukturer. De er funnet i den første studien av en person som bruker ELISA.

En polymerasekjedereaksjon utføres for å bekrefte pasientens diagnose. Det er en analyse av det genetiske materialet til et patogent middel og bestemmelsen av viral belastning.

Laboratoriediagnose av hepatitt C

Laboratoriediagnose starter med enzymimmunoassay. Hovedoppgaven er å oppdage antistoffer produsert mot patogenet. Dens effektivitet er nesten 95%. Takket være denne undersøkelsen er det mulig å identifisere virusbæreren i det prekliniske stadiet og sende det til videre undersøkelse.

En kvalitativ analyse av ELISA indikerer tilstedeværelse eller fravær av immunglobuliner i pasientens blod. Resultatet kan være "positivt" eller "negativt". Etter å ha mottatt det første svaret, blir personen sendt til neste undersøkelse - PCR. Prisen avhenger av kvaliteten på reagensene og laboratoriet. Kostnaden for polymerasekjedereaksjonen kan nå 4000 rubler.

PCR-funksjoner

Ved hjelp av en polymerasekjedereaksjon, tillater selv en liten mengde biologisk materiale oss å estimere virusbelastningen i blodet, det vil si å beregne konsentrasjonen av patogener i en milliliter væske.

Med forekomsten av PCR har diagnosen hepatitt blitt mye lettere. Analysen gjør det mulig å identifisere HCV RNA, for å etablere stadium av den smittsomme prosessen og infektiøsiteten av virusbæreren.

Det finnes flere typer genetisk diagnose:

  1. Kvalitativ analyse av PCR for hepatitt C - bekrefter tilstedeværelse eller fravær av HCV i emnetes blod:
  2. kvantitativ, der du kan beregne konsentrasjonen av virus og etablere scenen av sykdommen. Resultatet er gitt i IE / ml eller kopier / ml (avhengig av laboratoriet);
  3. genotyping - nødvendig for å bestemme genotypen av HCV. Dette kreves for det nøyaktige utvalg av stoffer som vil være mest effektive i dette tilfellet. Analyse indikerer indirekte alvorlighetsgraden av den patologiske prosessen i leveren. Således, med den tredje genotypen av patogenet, observeres steatosis oftest, grunnlaget for dette er akkumulering av fett i hepatocytter (dets celler). I tillegg påvirker typen av virus utfallet og varigheten av terapeutisk kurs.

Kvalitativ analyse av PCR for hepatitt C

Først og fremst blir biologisk materiale undersøkt i laboratoriet for tilstedeværelse av HCV RNA. Det er viktig å huske at en kvalitativ analyse av hepatitt C har et visst følsomhetsnivå, og derfor kan det ikke alltid gi riktig svar. I dette tilfellet anbefales det å gjennomføre laboratoriediagnostikk ved hjelp av andre reagenser.

For å oppnå pålitelige resultater, bør testsystemer med følsomhet på minst 50 IE / ml brukes.

Det diagnostiske resultatet kan enten være "positivt" eller "negativt". Hvis patogenet ikke er funnet i blodet, er studien fullført. Hvis det oppdages et patogent middel i en prøve, kvantifiseres en viral belastning.

En falsk-negativ respons oppnås når en teknologisk prosess brytes, for eksempel, aktive komponenter som undertrykker byggingen av kopier av patogenet, kommer inn i mediet. Dermed er det ikke mulig å vise et ekte blodbilde, og derfor er ikke en persons infeksjon diagnostisert.

Et falskt positivt resultat kan oppnås hvis røret for innsamling av biologisk materiale, samt miljøet for studien, var forurenset. I tillegg er slik analyserespons mulig med blandede infeksjoner, når leveren er påvirket av flere virus, for eksempel hepatitt C og D.

Indikasjoner for kvalitativ forskning

Legen kan foreskrive en pasient en kvalitativ studie om identifisering av RNA i hepatitt C-viruset:

  • ved mottak av et positivt eller tvilsomt enzymimmunoassayrespons;
  • for bekreftelse av diagnosen;
  • bestemme viral belastning;
  • sette scenen av sykdommen;
  • diagnose av blandet infeksjon. Hepatitt C infiserer ofte leveren samtidig med "D" -viruset;
  • Bestemmelse av terapeutisk taktikk under hensyntagen til kausjonsmiddelets genotype;
  • vurdere dynamikken i endringer under behandling med antivirale medisiner.

Fordelene ved polymerasekjedereaksjonen inkluderer:

  1. høy følsomhet av teknikken, som gjør det mulig å fastslå faktumet av infeksjon i det prekliniske stadium;
  2. identifisering av patogenets genetiske materiale, og ikke antistoffer mot det;
  3. muligheten for å etablere en subtype av et patogent middel;
  4. høy hastighet på diagnostikk, da det ikke krever såing av materialet på næringsmediet, og det er nok å bruke spesifikke testsystemer. En person mottar resultatet etter 5 timer;
  5. allsidighet. Analysen tillater å identifisere ethvert genetisk materiale (RNA, DNA). På grunn av dette kan legen bekrefte hepatitt C og andre typer sykdommen (B);
  6. evnen til å oppdage latent infeksjon.

Kvantitativ forskning

I studien av blod ved hjelp av polymerasekjeden kan reaksjonen beregne antall patogener i et fast volum biologisk materiale. Indikatoren er presentert i IE / ml. Gjennom analyse er det mulig å bestemme graden av smitte av pasienten, bestemme stadium av den smittefarlige prosessen, og også vurdere effektiviteten av medisinering.

På grunnlag av PCR bestemmer spesialisten hvilke doser medikamenter som kan blokkere reproduksjon av patogener. I tillegg bestemmes varigheten av antiviral behandling og prognose for livet. Det er viktig å huske at testsystemene har høy følsomhet, slik at metoden gjør det mulig å bekrefte infeksjon av en person i det prekliniske stadiet.

genotyping

Gitt patogenes evne til å mutere, er genotypen nødvendig for å bestemme behandlingens taktikk og valg av antivirale legemidler. For eksempel varer behandling av hepatitt B HCV 1 48 uker, med en positiv utvikling observert i bare 60% av tilfellene. Genotyper 2 og 3 har en mer gunstig prognose. Antivirale legemidler er foreskrevet i 8 måneder, og deres effektivitet når 85%.

Ifølge statistikk er HCV 1, 2 og 3 i de fleste tilfeller registrert i Russland.

Når deklarerer en laboratorietest, kan dette svaret angis - "ikke skrevet". Dette betyr at et virus sirkulerer i pasientens sirkulasjonssystem og ikke kan gjenkjennes av testsystemet. Resultatet av analysen i dette tilfellet indikerer at patogenet ikke er typisk for et gitt geografisk område.

Hvordan får du pålitelige resultater?

For at en kvalitativ studie av PCR for å oppdage RNA av det fremkallende middel av hepatitt C viste de riktige resultatene, er det nødvendig å observere kravene til å forberede laboratoriediagnostikk:

  1. blodprøvetaking utføres på tom mage, og det "sultne" gapet bør ikke være kortere enn 8 timer;
  2. To dager før studien anbefales det å slutte å drikke alkoholholdige drikkevarer og forlate krydret, fett og røkt mat;
  3. Avbryt introduksjonen av legemidler som reduserer blodproppene, for eksempel heparin. Hvis disse medisinene er foreskrevet av helsehensyn, må du varsle legen. I tillegg bør spesialisten være oppmerksom på inntak av andre legemidler som kan påvirke resultatet av laboratorieforskning;
  4. På tærskelen til samlingen av biologisk materiale, bør ikke fysioterapeutiske prosedyrer utføres og ikke utsettes for alvorlig fysisk anstrengelse.

Resultatene av analysen kan påvirkes ikke bare av den personen som donerer blod, men også av andre faktorer, nemlig:

  • dårlig kvalitet blod prøvetaking;
  • manglende overholdelse av anbefalinger om transport av biologisk materiale
  • Utilstrekkelig opplæring av laboratoriearbeidere;
  • manglende overholdelse av forskningsteknikken;
  • innføring av antikoagulantia (heparin) på kvelden før blodprøvetaking. Denne gruppen medikamenter reduserer koagulering, og derved reduserer arbeidet med reagenser.

I ulike laboratorier kan det diagnostiske svaret avvike noe, men disse feilene påvirker ikke det endelige resultatet av studien.

Spesiell oppmerksomhet er lagt til hvilke typer testsystemer som brukes i laboratoriet. Ofte er det gitt fortrinnsvis reagenser med høy følsomhet. Dette er viktig for pasienter med lav viral belastning, da det er vanskelig å oppdage.

Hvor ofte utføres en laboratorietest?

Primær polymerasekjedereaksjon utføres hos mennesker som har blitt påvist ved immunoassay-antistoffer mot patogenet av hepatitt. I dette tilfellet er det tildelt å bekrefte det faktum at infeksjon av en person og etablere scenen av sykdommen. I tillegg tillater analysen å bestemme virus subtypen, noe som er spesielt viktig for valg av medisiner.

Neste periode for obligatorisk laboratorietesting er 3 måneder fra starten av antiviral terapi. Diagnostikk gjør det mulig å evaluere effektiviteten av medisiner, justere dosen eller erstatte dem.

I tillegg til grunnleggende tester kan PCR i tillegg utføres ved 4 og 24 uker fra starten av behandlingen. Positiv prognose av sykdommen er bekreftet av en reduksjon i viral belastning etter tre måneders behandling. For eksempel bør den reduseres fra 1 million IE / ml til flere hundre tusen.

Hvis konsentrasjonen av patogene stoffer i blodet forblir på samme nivå eller øker noe, indikerer dette ineffektiviteten av antivirale legemidler og krever erstatning. Ved bruk av PCR ved slutten av behandlingen, er det mulig å bekrefte pasientens utvinning.

For å korrekt tolke resultatene av laboratoriediagnostikk, er det nødvendig med konsultasjon av en hepatolog eller smittsom sykdom. Gitt den høye frekvensen av falske responser i ELISA, brukes analysen utelukkende til primær screening. For en grundigere undersøkelse av den anvendte polymerasekjedereaksjonen.

Er det mulig å kurere hepatitt C uten bivirkninger?

I dag er moderne medisiner av den nye generasjonen Sofosbuvir og Daclatasvir sannsynlig å helbrede hepatitt C for 97-100%. Du kan få de nyeste medisinene i Russland fra den offisielle representanten for den indiske farmasøytiske giganten Zydus Heptiza. Bestilte stoffer vil bli levert med bud innen 4 dager, betaling ved mottak. Få en gratis konsultasjon om bruk av moderne rusmidler, samt lære om hvordan man skal anskaffe, kan du på den offisielle nettsiden til leverandøren Zydus i Russland.

Kvalitativ analyse for hepatitt C

Legg igjen en kommentar 7,180

En kvalitativ analyse av polymerasekjedereaksjonen - PCR for hepatitt C bestemmer tilstedeværelsen eller fraværet av HCV i kroppen. I laboratorieforhold studeres strukturen av RNA, som vil inkludere viruset. Ved detektering av viruset C, er det nødvendig å gjennomgå et behandlingsforløp, siden forsømmet tilstand av leveren vil medføre alvorlige konsekvenser. PCR av høy kvalitet utføres også etter utvinning for å bekrefte fraværet av antistoffer. Tilordnet for rutinemessig inspeksjon. Med lav konsentrasjon av kausjonsmiddelet i blodet, kan PCR (kvalitativ) ikke oppdage noe, fordi diagnostikksystemet har sine egne følsomhetsgrenser. I tilfelle av den første fasen av sykdommen eller den milde formen, utføres PCR ultradiagnostikk på ekstremt følsomt utstyr.

Hva er RNA-virus?

Begrepet RNA i hepatitt C-viruset (eller hepatitt C-virus-RNA) er selve leversykdommen. Virus C binder seg til den sunne cellen i kroppen ved å trenge inn i. Over tid, spredt over hele kroppen, er det bare nødvendig å komme inn i blodet. Som et resultat trengs patogenet i leveren, smelter med sine celler og virker hardt. Leverceller (hepatocytter) virker under påvirkning, undergår endringer, og fra dette dør de. Jo lengre viruset C er i leveren, jo større antall celler dør. Over tid utvikler farlige sykdommer som fører til ondartet degenerasjon og død.

Infeksjon av leveren med denne typen virus kan ikke manifestere seg eksternt. I mange år eller flere tiår føler en smittet seg helt sunn, og bare en tilfeldig undersøkelse avslører ofte patologi. Ved donering av blod til hepatitt undersøkes en del av RNA (ribonukleinsyre) kjeden, som er en del av det humane genet (DNA). Resultatene av laboratorietester bør ikke brukes til selvbehandling, fordi dette bare er en indikator. Det nøyaktige bildet og ytterligere diagnose er bedre bestemt av legen.

Når ferdig: indikasjoner på forskning

I bekreftelse på HCV utføres PCR-analyse (polymerasekjedereaksjon). Studier av PCR bidrar til å finne patogenmaterialet i strukturen av RNA og foreskrive en effektiv terapi. Utnevnt i følgende tilfeller:

  • påvisning av tegn på betennelse i leveren;
  • screening studier for forebygging;
  • undersøkelse av personer i kontakt
  • diagnose av hepatitt av blandet opprinnelse (bestemmelse av hovedpatogenet);
  • bestemme nivået på reproduksjonsaktivitet av viruset i kronisk form;
  • levercirrhose;
  • for å bestemme effektiviteten av den foreskrevne behandlingen.
Studier av PCR foreskrives av en lege for å bestemme effektiviteten av et behandlingsforløp for hepatitt.

Det er en kvalitativ og kvantitativ analyse av PCR. Kvantitativ PCR viser prosentandelen av RNA til virusbærere i blodet, og kvalitativ indikerer viral tilstedeværelse eller fravær. En positiv indikator for kvalitet (tilstedeværelse av hepatitt C RNA) trenger også kvantitativ forskning. Et høyt nivå av konsentrasjon av det forårsakende middelet av hepatitt C er forbundet med risikoen for overføring, det vil si infeksjon av andre. Lavt antall er bedre behandles. Mengden av RNA-virus i blodet er ikke relatert til intensiteten av sykdommen. PCR-analyse gjøres også ved interferonbehandling for å foreskrive varighet og kompleksitet i behandlingsforløpet.

Egenskaper av høy kvalitet PCR analyse for hepatitt C

En kvalitativ analyse med polymerasekjedereaksjonsindeksen er tildelt alle pasienter som har antistoffer mot hepatitt C i blodet. De som har vært syk og gjenopprettet, må ta testen igjen. Det anbefales å bestå testen for hepatitt B, da i en positiv konklusjon, og for hepatitt D. Også kvalitativt analysert reaksjon skal utføres i forbindelse med andre blodprøver. Analyser vil vise et komplett bilde av viral spredning.

Fra testresultatene vil bare en positiv test for hepatitt C være synlig eller negativ, det vil si tilstedeværelse eller fravær av et virus. Hvis utgangen er "detektert", er viruset og fortsetter å være aktivt. Betegnelsen "ikke oppdaget" indikerer fraværet av et virus eller dets lille mengde. Med denne indikatoren bør man huske på at analysens følsomhet for diagnostiske systemer er forskjellig, og at RNA hepatitt C fortsatt kan være i blodet, men ikke manifestert i analysen.

Spesielt sensitiv PCR-metode viser ultra hepatitt C selv i små mengder. En fluorescens hybridiseringsstudie brukes, som er mange ganger høyere enn standard PCR-systemer. Metoden brukes i flere tilfeller:

  • mistenkte skjulte former for hepatitt C;
  • PCR-diagnostikk bekreftet ikke patogenet, men det er antistoffer;
  • i tilfelle gjenoppretting
  • å oppdage tidlig infeksjon.
Tilbake til innholdsfortegnelsen

Dekoding analyse

PCR-dekodingen av HCV påvirker den endelige avgjørelsen når man foretar en diagnose, spesielt med ultrametod-metoden. Den største ulempen ved denne studien er streng overholdelse av sterile forhold for prøven og materialene. En liten avvik viser noen ganger unøyaktige analytiske konklusjoner, kompliserer diagnose og etterfølgende behandling. Analyse av PCR for bestemmelse av hepatitt-RNA viser ikke alltid selvtillit et bilde av sykdommen, noen ganger er unøyaktigheter tillatt, og i begge retninger.

Diagnostisering av hepatittvirus, det anbefales å bruke en omfattende undersøkelse.

Norm for indikatorer

Fraværet av JgM antistoffer mot viral hepatitt C i resultatene av studien regnes som normen i analysen av polymerasekjedereaksjonen. Samtidig viser funnene fra den serologiske analysen tilstedeværelsen av antistoffer mot C-viruset, og dette er også innenfor det normale området. En kvalitativ definisjon viser ikke intensiteten av sykdommen, det avslører bare årsaksmedlet til hepatitt C i RNA. Denne analysen gjentas etter behandling for å bekrefte den faktiske utvinningen.

avvik

Hvis JgM antistoffer mot HCV RNA er tilstede, indikerer dette en utviklingsinfeksjon. Sykdommen pågår samtidig akutt eller kronisk, manifestert i forskjellige stadier. Hvis en nedgang i antall antistoffer registreres, vil analysen indikere at resultatene av behandlingen ble oppnådd under utvinning. Det er bare svært sjeldne tilfeller av falske positiver som finnes i diagnosen. De finnes hos kvinner under graviditet og hos personer med andre smittsomme sykdommer.

PCR-analyser

Polymerasekjedereaksjon regnes som en av de mest nøyaktige og raske diagnostiske metoder for mange smittsomme sykdommer. Det er også vellykket anvendt i kriminologi for å forenkle prosessen med å identifisere kriminelle, med hjelpepaternity er etablert med høy presisjon.

Essensen av PCR-metoden

Hver levende organisme, inkludert bakterier og virus, har unike gener som inngår i strukturen av DNA eller RNA i en bestemt sekvens. Under PCR-studien kopieres det genetiske materialet gjentatte ganger under påvirkning av DNA-polymerase og spesielle temperatur-sykluser.

Det er to hovedmetoder for polymerasekjedereaksjon:

  1. Den klassiske metoden er valget av patogenens genetiske materiale ved elektroforese;
  2. PCR i "sanntid".

Teknikken består av tre hovedfaser:

  • Prøveforberedelse;
  • DNA-amplifikasjon;
  • Deteksjon (identifikasjon) av det genetiske materialet til det mistenkte patogenet.

For å gjennomføre en undersøkelse, må PCR-laboratoriet være delt inn i 3 soner, hver fase av reaksjonen utføres strengt i rommet beregnet på det. Hver sone skal være utstyrt med nødvendig utstyr, dispensere, forbruksvarer, beskyttelsesklær som bare brukes i dette rommet.

Etter registrering og merking av prøver, i prøvepreparasjonsrommet, isoleres patogen-DNA eller RNA fra materialet som er studert ved eksponering for en bestemt temperatur og spesielle reagenser. Deretter begynner amplifikasjonsprosessen - skaper mange kopier av et unikt DNA-fragment. Den består av 3 hovedfaser:

  • DNA-denaturering - under påvirkning av høy temperatur (95 grader) unnglar DNA-helixen i 2 kjeder.
  • Primer Annealing - Spesielle syntetiske forbindelser (primere) som er identiske med den genetiske informasjonen ved endene av de ønskede nukleinsyrefragmentene, er festet til DNA-kjederens termini. Temperaturen som kreves for primerfeste er individuell for et bestemt tilfelle, det varierer fra 50 til 65 ° C.
  • Ved hjelp av DNA-polymeraseenzym, ved 70-72 grader mellom to primere, blir en tilsvarende del av DNA (amplikon) fullført. Som "byggemateriale" legges spesielle stoffer til røret.

Amplifikasjonssykluser blir gjentatt flere ganger, derfor blir det ekstraherte DNA kopiert gjentatte ganger, hvilket forenkler prosessen med dets identifikasjon. Identifikasjon kan utføres visuelt etter fremgangsmåten for elektroforese av amplifikasjonsprodukter i en agarosegel, eller automatisk bruk av sanntids-teknikken.

I studien ved PCR i "sanntid" oppstår forsterkning og deteksjon samtidig i spesielle enheter. Denne metoden er mest foretrukket, siden studien utføres i lukkede rør, reduserer risikoen for forurensning og dermed utstedelse av falske positive resultater.

Fordeler og ulemper med metoden

  • Studien tar bare noen få timer, i motsetning til de lange klassiske mikrobiologiske metodene;
  • Høy spesifisitet fra 95% til 100%, fordi Det ønskede DNA-fragment er unikt for hver spesifikk mikroorganisme;
  • Den høye følsomheten til metoden, det er mulig å oppdage patogenet, selv om det er representert i prøven under studien med bare én celle;
  • Identifisere patogenet kan være både kvalitativ og kvantitativ metode. Dette er svært viktig i isoleringen av betinget patogene mikroorganismer, som i liten mengde ikke forårsaker sykdom;
  • Evnen til å bestemme genotypen av patogenet (hepatitt C, HIV-infeksjon). Det er nødvendig for rasjonell behandling og prognose av mulige komplikasjoner;
  • Evnen til å identifisere en genetisk predisponering for sykdommen, og dermed forhindre dens utvikling.
  • Nesten hvilken som helst smittekilde kan identifiseres, og moderne teknikker tillater også deteksjon av aggregatmikroflora i prøven under studien, for eksempel vaginalbiokenosen.
  • Muligheten for å skaffe seg både en falsk positiv og en falsk-negativ prøve dersom reglene for å ta en prøve ikke følges, og det gjøres feil under studien.
  • Høy kostnad analyse.

søknad

Nesten alle prøver kan undersøkes ved hjelp av PCR (blod, urin, cerebrospinalvæske, skrap fra livmorhalskanal og urinrør, hårfollikler, sæd, etc.). Denne metoden er mye brukt for diagnose av STDs (gonoré, klamydia, ureaplasmose, mykoplasmose, trichomoniasis). Det kan brukes til å identifisere de kausative agenter av tuberkulose, difteri, lungebetennelse, viral hepatitt, HIV-infeksjon, toxoplasmose, cytomegalovirus og herpesinfeksjon, salmonellose etc.

En polymerasekjedereaksjon brukes til å etablere faderskap ved å sammenligne DNA fra foreldrene og barnet, identifisere genetiske abnormiteter og arvelig disposisjon av kroppen til forskjellige sykdommer.

Forberedelse for analysen

  • Blod anbefales å donere strengt på tom mage.
  • Før du tar smet fra urinrøret eller livmorhalskanalen, er det nødvendig å avstå fra sex i tre dager, det er nødvendig å ta analysen ikke tidligere enn en måned etter avslutningen av antibiotikabehandlingen, ellers kan resultatet være falskt positivt. Selv det døde patogenet oppdages av PCR-metoden, derfor er det bedre å gjennomføre studien etter at cellene er fullstendig fornyet.
  • Urin skal samles i en steril beholder.

Svaret vil oftest være klart om et par dager, avhengig av laboratoriumets evner.

Dekoding resultater

Ved bruk av en kvalitativ teknikk kan det kun være 2 mulige svar: positivt eller negativt. Et positivt resultat indikerer tilstedeværelsen av den utskårne mikroorganismen i prøven, en negativ indikerer fraværet.

Det kvantitative resultatet skal vurderes av den behandlende legen, en individuell tilnærming brukes i hvert enkelt tilfelle. Spesialisten tar hensyn til det mottatte svaret, bestemmer spørsmålet om behovet for behandling, dosering av legemidler, spesifiserer skjema og stadium av sykdommen.

Når man bestemmer den genetiske profilen (predisponering for trombofili, brystkreft) etter deklarering av resultatet, kan legen vurdere graden av risiko for å utvikle sykdommen, samt foreskrive et spesielt diett, forebyggende tiltak.

Var siden nyttig? Del det i ditt favoritt sosiale nettverk!

Hvordan utføre analysen ved hjelp av PCR: beskrivelse av prosedyren

Polymerase kjedereaksjon har vært kjent i 30 år. Det er mye brukt på mange felt, fra arkeologi til genetikk.

Det er PCR-metoden som bidrar til å etablere faderskap, men oftest brukes den til å identifisere ulike smittsomme sykdommer i menneskekroppen.

Hvordan utføres PCR-analyse, og hva er det? Vi vil prøve å svare på disse spørsmålene i detalj.

PCR analyse - hva er det?

Polymerasekjedereaksjon (PCR) er en høy presisjonsmetode for molekylærgenetisk diagnostikk som gjør det mulig å oppdage ulike smittsomme og arvelige sykdommer hos mennesker, både i de akutte og kroniske stadier, og lenge før sykdommen kan manifestere seg.

PCR-metoden er helt spesifikk og utført korrekt, kan ikke gi et falskt positivt resultat. Det vil si, hvis det ikke er infeksjon, vil analysen aldri vise hva den er. Derfor er det nå veldig ofte for godkjenning av diagnosen, en ekstra PCR-analyse er tatt for å bestemme årsaksmidlet og dets natur.

Polymerase Chain Reaction (PCR) i 1983, utviklet av Carey Mulllis (USA), som i 1993 ble tildelt Nobelprisen i kjemi.

Hva er fordelen med denne metoden?

Diagnose ved denne metoden tillater en å finne patogenet direkte i genet som er inneholdt i materialene som studeres. Dette er den mest nøyaktige analysen av kjønnsinfeksjoner, skjulte infeksjoner, ulike seksuelt overførbare sykdommer.

Forskjeller PCR diagnostikk fra andre metoder for laboratorieforskning er som følger:

  • Metoden er rettet mot å identifisere selve patogenet;
  • PCR diagnostikk utmerker seg ved deres allsidighet: for påvisning av flere patogener;
  • sykdommer er bare en biologisk prøve av pasienten tilstrekkelig;
  • Metoden er svært sensitiv og ledsages ikke av andre kryssreaksjoner.

I tillegg er fordelen av PCR-diagnostikk at ethvert biologisk materiale av pasienten er egnet for analyse: blod, utslipp fra kjønnsorganene, urin, sæd.

Hvilke infeksjoner kan oppdage smøring på PCR?

Et stort antall patogener kan være til stede i kroppen, inkludert de "skjulte" de som ikke manifesterer seg i lang tid.

Smøreanalysen på PCR gjør det mulig å avsløre slike infeksjoner:

Testmaterialet til PCR er vanligvis sputum, spytt, urin og blod. Før analysen må du forsiktig forberede deg på det, etter å ha fått en foreløpig konsultasjon med en lege.

Blod for PCR er vanligvis gitt på tom mage. Gode ​​resultater viser analyse når materialet til studien er tatt fra livmorhalskanal eller urinrør. I dette tilfellet er det best å gjennomføre PCR-diagnostikk senest en dag etter samleie.

Varianter av PCR

PCR brukes i mange områder for analyse og i vitenskapelige eksperimenter. Det finnes forskjellige analysemetoder:

  1. Omvendt transkripsjons-PCR (Reverse Transcription PCR, RT-PCR (engelsk)) brukes til å amplifisere, isolere eller identifisere en kjent sekvens fra et RNA-bibliotek.
  2. Invertert PCR (Inverse PCR (Eng.)) - brukes hvis bare en liten del er kjent innenfor den ønskede sekvensen. Denne metoden er spesielt nyttig når det er nødvendig å bestemme tilstøtende sekvenser etter DNA-innføring i genomet.
  3. Nested PCR (Nested PCR) brukes til å redusere antallet av biprodukter av reaksjonen. To par primere blir brukt og to påfølgende reaksjoner utføres.
  4. Asymmetrisk PCR (asymmetrisk PCR) utføres når det er nødvendig å amplifisere hovedsakelig en av kjedene i det opprinnelige DNA. Brukes i noen sekvenserings- og hybridiseringsanalyser.
  5. Kvantitativ PCR (Kvantitativ PCR, Q-PCR (Eng.)) Eller sanntids-PCR brukes til å observere målingen av mengden av et bestemt PCR-produkt i hver reaksjonsperiode.
  6. Trinn PCR (Touchdown PCR (Eng.)) - ved hjelp av denne tilnærmingen reduseres effekten av ikke-spesifikk binding av primere.
  7. Gruppespesifikk PCR (gruppespesifikk PCR) - PCR for beslektede sekvenser innenfor en eller mellom forskjellige arter ved bruk av konservative primere for disse sekvensene.

Hvis nukleotidsekvensen til en matrise er delvis eller ukjent, er det mulig å bruke degenererte primere, hvis sekvens inneholder degenererte stillinger der noen baser kan være lokalisert. For eksempel kan primer-sekvensen være:... ATH..., hvor H er A, T eller C.

Hvilke biologiske materialer undersøkes?

Materialet til PCR-studier, hvor det kan oppdages utenlandsk bakterielt DNA eller virusets DNA eller RNA, kan bestå av forskjellige biologiske medier og humane væsker:

  1. Urin. Det kan brukes til infeksjon av urogenitalt tarm i menn og urinorganer hos kvinner (hos menn, bruker bruk av urin som et materiale som erstatter epitelskraping).
  2. Slim. Det brukes til å diagnostisere tuberkulose og mindre vanlig for å diagnostisere respiratoriske former for klamydia og mykoplasmose. Sputum i en mengde på 15-20 ml oppsamles i en steril flaske (engangs).
  3. Biologiske væsker. Prostatajuice, pleural, cerebrospinal, fostervann, leddvæske, bronchoalveolær lavage, spytt oppsamles i henhold til indikasjoner.
  4. Epithelial scrapings fra slimhinner. Vanligvis brukt til diagnose av seksuelt overførbare sykdommer, som gonoré, klamydia, mykoplasmose, ureaplasmose, trichomoniasis, gardnerellezis, herpetic og andre infeksjoner som påvirker slimhinnene.
  5. Biopsier. De mest brukte biopsier i mage og tolvfingertarmen for å identifisere Helicobacter pylori infeksjon.
  6. Blod, plasma, serum. Brukes til PCR analyse av hepatitt B, C, D, G-virus, herpes, CMV, HIV, humane gener.

Hvordan forberede dere på analysen?

Påliteligheten av PCR-resultatet er direkte avhengig av at materialet leveres korrekt til undersøkelse. Materialet bør ikke være forurenset, ellers vil resultatet av studien ikke være objektivt. De viktigste anbefalingene før du sender inn en PCR-analyse er følgende krav:

  1. Urin leveres i morgen i en steril beholder.
  2. En blodprøve for infeksjon må tas på tom mage om morgenen.
  3. Det er ikke nødvendig å vise seksuell aktivitet dagen før analysen.

Resultatet av analysen vil være klar i 1,5-2 dager etter prosedyren. Det er situasjoner hvor resultatet kan utarbeides på samme dag.

Dekoding av analysen av CR

Prosessen med tolkning av den presenterte forskningen preges av sin enkelhet. Resultatene fra PCR-analysen kan oppnås i 1,5-2x dager etter levering av materialet. I noen tilfeller er resultatet klart på den aller første dagen, og dette er hva de kan bety:

  • Et negativt resultat indikerer at det smittsomme stoffet mangler i materialet som blir diagnostisert.
  • Pcr positiv betyr at patogenens DNA eller RNA er tilstede i menneskekroppen.

I noen tilfeller produserer en kvantitativ bestemmelse av mikroorganismer. Dette gjelder spesielt for sykdommer forårsaket av betinget patogene mikroorganismer. Siden disse bakteriene viser sin negative effekt bare med overskytende mengder.

Også kvantitativ analyse av PCR er viktig for valget av terapeutisk taktikk og for å kontrollere behandlingen av virusinfeksjoner som HIV og hepatittvirus.

Hvor nøyaktig er PCR diagnose av infeksjoner?

PCR-metoden preges av høy nøyaktighet, spesifisitet og følsomhet. Dette betyr at denne analysen er i stand til å:

  • nøyaktig bestemme tilstedeværelsen eller fraværet av infeksjon;
  • spesifiser nøyaktig hvilken type infeksjon (spesifisitet);
  • oppdage infeksjon selv med svært lavt DNA-innhold av mikrober i biologisk materiale,
  • som har blitt utsatt for forskning (følsomhet).

PCR-analyse: pris og tid

Prisen på en bestemt analyse vil avhenge av hvilken infeksjon du er sjekket for. Omtrentlige priser og vilkår:

  1. STI: 300-500 rubler, tid - 1 dag;
  2. Epstein-Barr-virus, humant papillomavirus, herpes, cytomegalovirus: 300-500 rubler, tid - 1 dag;
  3. Hepatitt A, B, C, D, G: kvalitativ analyse av 650 rubler, kvantitativ analyse av 2000 rubler. Vilkår - opptil 5 dager;
  4. Antistoffer mot hepatitt C-viruset totalt (Anti-HCV) - 420 rubler;
  5. Antistoffer mot hepatitt C-virus, IgM (Anti-HCV IgM) - 420 rubler;
  6. Helicobacter pylori (Helicobacter pylori): 300-400 rubler, vilkår - 1 dag;
  7. HIV (antistoffer og antigener) - 380 rubler;
  8. HIV RNA, kvalitativt - 3.500 rubler;
  9. HIV RNA, kvantitativt - 11 000 rubler.

For å spare penger kan du velge en fast gruppe analyser. Denne tjenesten leveres av de fleste klinikker hvor det er mulig å overføre analysen ved hjelp av ERP-metoden (invitro, onclinics, etc.).


Forrige Artikkel

Ernæring for hepatittlever

Neste Artikkel

Hepatitt C Virusantikropp

Relaterte Artikler Hepatitt