Hva er PCR-analyse og viral belastning?

Share Tweet Pin it

Polymerasekjedereaksjon (PCR) er en laboratoriemetode for å bestemme DNA og RNA. Det ble først testet for nesten et halvt århundre siden av den amerikanske Carey Mullis. Denne overfølsomme analysen er i stand til å identifisere genombæreren ved et enkeltkildemolekyl inneholdt i blod, spytt eller hud.

PCR-metoden har gode utsikter, brukes ikke bare i medisin, men også innen genteknologi og rettsmedisin. Med det, klone og lage nye typer DNA, bestemme graden av slektskap. En kriminell er identifisert av et epitel som ble funnet på forbrytelsesstedet.

PCR-analyse for hepatitt - hva gjør de og hvorfor?

Hvorfor er en PCR-analyse nødvendig for mistanke om hepatitt C, hva er det?

Hepatitt C-virus er et RNA-virus som inneholder 6 genotyper og opptil 500 undertyper. Av alle hepatitt har dette viruset den høyeste mutasjonskapasiteten og overvinter beskyttelsesbarrieren til immunsystemet. Av det totale antall hepatitt tilfeller forårsaket C-virus 70% av tilfellene av kronisk form og 30% av skrumplever og leverkreft.

Essensen av metoden: En del av genet under studien ved hjelp av spesielle enzymer og forhold som er tvunget til å formere seg in vitro. PCR-analyse tillater å bestemme virusstammen, uten hvilken det er umulig å utføre effektiv behandling: hver genotype er forskjellig følsom for antivirale legemidler. To typer PCR brukes:

Antiviral terapi krever konstant overvåking for raskt å justere behandlingen, og for disse formål brukes polymerasekjedereaksjon også.

Kvalitativ og kvantitativ PCR

PCR-kvalitativ på hepatitt C gir svaret: Er det en stamme av virus C i pasientens blod og hvilken. Genotyping er nødvendig for å klargjøre diagnosen, prognosen for sykdommen og bestemme tidspunktet for behandlingen.

I henhold til den aksepterte klassifiseringen er et gen angitt med et tall, og en undertype er et lite latinsk brev.

Spesiell forberedelse basert på naturlige stoffer.

Prisen på stoffet

Behandling vurderinger

De første resultatene er følt etter en uke med administrasjon.

Les mer om stoffet

Bare 1 gang per dag, 3 dråper

Instruksjoner for bruk

Dekryptere genotype C-virustabellen:

  • Genotype 1a, 1b, 1c
  • Genotype 2a, 2b, 2c, 2 d
  • Genotype 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f
  • Genotype 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 4f, 4g, 4h, 4i, 4j
  • Genotype 5 a
  • Genotype 6 a

De vanligste genotypene 1,2,3. I Russland er de vanligste 1a, 1b, 2 og 3 stammer av virus C.

Genotypen av virus 1b er vanskeligere enn andre å behandle, i 90% blir det kronisk, hvorav 30% gjenfødes som leverkreft eller cirrhose.

Genotyper 2a og 3a har en grad av kroniskitet på 33-50%, mer responsive mot antiviral terapi.

Ved bekreftelse av virusets tilstedeværelse utføres en kvantitativ PCR-test for hepatitt C, som brukes til å beregne antall RNA-molekyler som er tilstede i pasientens laboratorieprøve.

Dekoding analyse

Kvalitets PCR analyse har to svar:

PCR-negativ betyr at patogenet ikke oppdages i blodprøver.
Et positivt svar antyder motsatt: RNA av en eller annen genotype av virus C er funnet.

Sannsynligheten for pålitelighet av resultatet er 95%. De resterende 5% er en feil forårsaket av en person. Denne muligheten er tillatt på grunn av de høye kravene til studien:

  • regler for lagring av reagenser;
  • passende kvalifikasjoner av medisinsk personale;
  • biomaterial renhet.

PCR-settet har 100% diagnostisk nøyaktighet.

Kvantitativ PCR av Hepatitt C RNA gjør det mulig å bestemme virusbelastningen på pasientens kropp. Med sin hjelp:

  • stadium av sykdommen er spesifisert (akutt, kronisk);
  • bestemmer effekten av antiviral behandling
  • Behovet for leverbiopsi undersøkes.

I noen tilfeller føler pasienten ingen tegn på sykdommen, mens HCV-infeksjonen oppdages ved PCR-metoden. Dette betyr at sykdommen er i et tidlig stadium av utvikling eller i kronisk form. Ytterligere studier er nødvendig for å klargjøre diagnosen, for tidlig antiviralbehandling.

Hepatitt C virusvekt

Viral belastning viser aktiviteten til hepatisk virus, hvor aktiv reproduksjonen oppstår.

Hva er dette?

PCR-kvantitativ hepatitt C måles i internasjonale enheter per 1 ml eller IE / ml, hvilket betyr hvor mange kopier av ribonukleinsyre av en bestemt stamme av virus C finnes i 1 ml blod under test.

Hva er høyt, hva er lavt?

Den virale lastanalysen tillater å bestemme tilstedeværelsen av viralt RNA i en konsentrasjon på 50 IE / ml. Normal viral belastning er når ingen HCV RNA-molekyl oppdages av PCR.

Viral load table:

  • lav konsentrasjon på 600 IE / ml 3 * 104 IE / ml;
  • middels konsentrasjon fra 3 * 104 IE / ml til 8 * 105 MM;
  • høyt nivå mer enn 8 * 105 IE / ml.

Lav viral belastning er et signal om at terapeutisk behandling er valgt riktig, og prognosen for en kur for hepatitt C er gunstig.

En høy konsentrasjon av virusceller indikerer at sykdommen er i den akutte fasen. Pasientens blod er en farlig infeksjonskilde.

Viral belastning, indikatorer av hvilke er på gjennomsnittlig nivå, kjennetegner enten den kroniske scenen av HWS, eller kan ha to utviklings trender: å øke eller redusere.

Etter ferdigstillelse, etter 6 måneder, utføres kontroll PCR.

Kostnad for PCR-diagnostikk

Følgende symptomer bør være årsak til bekymring:

  • generell svakhet;
  • misfarging av hud, øye sclera, utslipp;
  • kvalme;
  • redusert appetitt;
  • smerter i muskler og ledd;
  • tyngde i høyre hypokondrium;
  • forhøyede blodnivåer av AST og ALT.

I kontakt med infiserte pasienter, i den preoperative perioden, anbefales også hemodialyse undersøkelse.

Offentlige klinikker gjør en blodprøve for PCR gratis hvis det er en henvisning fra en smittsom spesialist eller en hepatolog.

Betalte tjenester for PCR-diagnostikk er gitt i alle større russiske byer. Kostnaden avhenger av type test, tilgjengelig utstyr, timing og andre faktorer.

Høykvalitets PCR analyse i Moskva og St. Petersburg vil koste fra 600 til 900 rubler. I regionene - fra 300 til 800 rubler.

Bestemmelsen av hepatitt C viral belastning vil koste 17 000-22 000 rubler. For andre typer infeksjoner prisen på kvantitativ forskning: 1200-10000 rubler.

Fordeler og ulemper ved PCR-metoden

Hva er fordelene med polymerasekjedereaksjonsmetoden over andre diagnostiske metoder?

  1. Et bredt spekter av applikasjoner. Ved å bruke PCR, ved hjelp av standardutstyr, kan du identifisere noe virus.
  2. Nøyaktighet av bestemmelse av patogenet. Ved hjelp av ulike kombinasjoner av enzymer og analyseteknikker oppnås en 100% spesifikasjon av studien for den angitte infeksjonen.
  3. Høy følsomhet. Metoden gjør det mulig å oppdage tilstedeværelsen av ett virusmolekyl i blodet.
  4. Effektivitet. Kvalitativ analyse er klar om noen timer, kvantitativ - om to dager.
  5. Diagnose av viruset i inkubasjonsperioden. Under PCR bestemmes patogenet ikke ved tilstedeværelse av antistoffer, når kroppen har en immunrespons, men før starten av den patologiske prosessen, noe som letter behandlingen.

Ulemper med PCR er resultatet av fordelene:

  • Analysens renhet krever høyeste grad av renhet, inkludert luft i laboratoriet, slik at "fremmed" DNA ikke kommer inn i prøven under studien;
  • høye krav til personell engasjert i innsamling og analyse av biomateriale.

Kvantitativ PCR

Kvantitativ PCR (kvantitativ PCR, qPCR,) er sanntids kvantitativ PCR (sanntids polymerase kjedereaksjon, kvantisert polymerasekjede reaksjon, qPCR).

Kvantitativ PCR (gresk POLYMERES - som består av mange deler, multi;. Lat re- - prefiks som betegner gjentatte handlinger og aktio - handling.) - en variant av PCR, hvor fortløpende registrerer reaksjonskinetikken, noe som gjør det mulig å kvantifisere innholdet av spesifikke DNA-nukleotidsekvenser i en kompleks blanding av molekyler.

Den første versjonen av denne metoden ble foreslått av P. Holland et al. i 1991 (metode "TaqMan"). I henhold til protokollen i reaksjonsblandingen i tillegg til de vanlige to primere tilsettes en oligonukleotidprobe merket i 5'-enden og en fluorofor som omfatter, i sitt midtre område eller 3'-fluorescens lyddemper som blir sammensmeltet i hver syklus av reaksjonen med amplikonet sentrale parti (2) mellom dens to forsterkede primere. Sonden i seg selv blir ikke brukt som en primer, siden den 3'-terminale hydroksylgruppen er blokkert av ortofosfat. Under reaksjonen forskyver den termostabile Taq-polymerasen proben fra duplekset, og det, på grunn av sin 5'-3'-exonukleaseaktivitet, løsner den det 5'-terminale nukleotid merket med en fluorofor. Jo høyere konsentrasjonen av den amplifiserte nukleotidsekvensen i reaksjonsblandingen, desto mindre er antall sykluser som kreves for fluorescensintensiteten til den frigjorte fluoroforen i prøven for å overstige det basale nivået av den frie sonden med en lyddemper. Fra dette øyeblikk (terskelen til antall sykluser) blir det mulig å observere kinetikken av den faktiske akkumulering av fluoroforen i reaksjonsblandingen.

Ved å bruke kvantitative PCR-metoder, er det funnet kvalitative endringer i genene: punktmutasjoner, deletjoner og innsetting. Men i noen arvelige sykdommer oppstår de tilsvarende symptomene som følge av endring i dosen av visse gener.

Et typisk eksempel på en arvelig sykdom forårsaket av en endring i antall kopier av en del av kromosom 21 i det humane genom er Downs syndrom. Cytogenetiske denne sykdom kan diagnostiseres ved trisomy av kromosom 21, eller ved tilstedeværelsen av store translokasjoner i dette kromosomet til den andre, mot tilstedeværelsen av to normale kromosomer 21. De kliniske tilfeller av Downs syndrom, der det ikke er noen synlige endringer i karyotype. Dette skyldes duplisering av en liten del av kromosom 21. Identifikasjonen av slike mutasjoner er umulig ved bruk av tradisjonelle cytogenetiske metoder. Ved bruk av kvantitativ PCR blir bestemmelsen av den en og en halv økning i dosen av den tilsvarende del av kromosom 21 imidlertid helt ekte.

Utfør kvantitativ PCR karakteriseres av to funksjoner. For det første utføres PCR i nærvær av deoksyribonukleosidtrifosfater eller primere merket med en radioaktiv eller fluorescerende etikett for nøyaktig å bestemme mengden av dannet PCR-produkt. For det andre, under PCR, er det nødvendig å fullføre reaksjonen tidlig nok til det blir dannet for mange PCR-produkter. Dette skyldes det faktum at i den endelige metningsfasen når PCR-produkter blir for mange, blir substratene (deoksyribonukleosidtrifosfater) og selve enzymet, for hvilke molekyler blir for mye mal DNA i form av PCR-produkter, blitt reaksjonsbegrensningene. Under slike forhold blir ferdigstillelsen av den neste PCR-syklusen ikke lenger ledsaget av en fordobling av antallet PCR-produkter, og små kvantitative forskjeller er nivellert mellom forskjellige prøver, som er ganske tydelig oppdaget i de tidlige stadier av PCR etter flere reaksjonssykluser.

Den opprinnelige metoden for å identifisere deletjoner som er heterozygote eller lokalisert i autosomale gener er basert på bruk av cDNA oppnådd ved revers transkripsjon fra ektopisk mRNA eller fra mRNA isolert fra en pasients vev eller cellekultur som uttrykker dette genet for PCR. I motsetning til den normale homologen, i et mutant cDNA-molekyl, er eksonene som grenser til sletting, tett sammen. Hvis sekvenser fra disse områdene av genet er valgt som oligoprimerer for PCR, vil bare mutant-cDNAet tjene som en mal for å amplifisere en liten region mellom primere fra exoner som flankerer sletting. I den normale cDNA-sekvensen kan denne regionen være for stor til amplifisering skal finne sted. Praktisk for deteksjon av heterozygoter ved omfattende intragene divisjoner utføres multiplex-PCR ved bruk av et oligoprimer-system som amplifiserer fragmenter som helt overlapper hele cDNA-molekylet. Tilstedeværelsen av deletjoner registreres ved utseendet av amplifikasjonsprodukter av en uvanlig størrelse.

Se også Reverse Transkripsjon - Realtids Polymerase Chain Reaction.

Ordliste for bioteknologi VZ Tarantula: alfabetisk indeks Ligation metoder "i nabolaget", metoden for nær ligering (pro-ximity ligation assay, PLA) Molekylære beacons (molekylære beacons) MUTASJONER SPOT: IDENTIFIKASJONSMETODER DETEKSJON AV KNOWN MUTATIONS

PCR-diagnostikk gjør det ikke bare mulig å bestemme tilstedeværelsen av hepatitt B-virus i blodet og dets etiologi, men også for å evaluere aktiviteten. Påvisning av viral belastning er spesielt viktig for valg av effektiv behandling, hvis den er for høy, så reduseres sannsynligheten for utvinning. Hva er kjernen i polymerasekjedereaksjonsmetoden?

Essensen av PCR-diagnostikk

Ved hepatitt utføres PCR for å sikre at diagnosen blir gjort. Ved hjelp av denne metoden kan du identifisere virusets DNA, samt bestemme mengden i blodet.

DNA-virus i blodet ved PCR-metoden for hepatitt kan påvises ved slutten av inkubasjonsperioden, på dette tidspunkt kan HBsAg detekteres mot bakgrunnen av et økt nivå av transaminaser, hvoretter HBeAg fremkommer.

Med en kvalitativ definisjon kan du nøyaktig fastslå diagnosen, det er eller det er ingen hepatitt. Normalt bør det ikke være noe DNA i blodet. Den kvantitative metoden tillater å bestemme intensiteten i utviklingen av sykdommen og reproduksjonen av viruset.

Analysen har en svært høy følsomhet og pålitelighet. Som biologisk materiale tar venøst ​​blod. Takket være moderne teknologi kan PCR oppdage viruset i en konsentrasjon på 5 × 103-104 kopier / ml i blodet. Ifølge resultatene fra analysen, å vite normen, er det mulig å bedømme virusbelastningen og forutsi behandlingen.

Det er viktig! Det er virusets DNA bidrar til utviklingen av cirrose og andre kroniske leversykdommer.

DNA-deteksjon med PCR er nødvendig i følgende tilfeller:

Tviler på formuleringen av den endelige analysen etter testing. Bestemmelse av akutt stadium av sykdommen. Påvisning av latente former for hepatitt. Evaluering av effekt etter antiviral terapi.

Hvordan deklarere resultatene oppnådd etter PCR-diagnostikk?

PCR kvantitativ

Ved kvantitativ vurdering kan du ikke bare bestemme tilstedeværelsen av et virus, men også finne ut den virale belastningen hvis PCR viser et positivt resultat.

En kvantitativ metode er nødvendig for å finne ut slik informasjon:

Intensiteten av utviklingen av sykdommen. Effektiviteten av behandlingen. Utviklingen av resistens mot antivirale legemidler.

Kvantifisering er svært viktig når man foretar en diagnose av kronisk hepatitt. I dette tilfellet vil alle indikatorene ikke ligge innenfor det normale området. Transaminase-nivået vil bli økt, virusaktivitetsindeksen vil være mer enn 4, og virus-DNA-konsentrasjonen vil være over 105 kopier av DNA / ml. Hvis viruskonsentrasjonen er lavere og transaminase nivået er normalt, kan vi snakke om passiv bærer.

Før utnevnelse av antiviral behandling, er gjennomføringen av PCR-diagnostikk, nemlig kvantitativ undersøkelse, avgjørende for å bestemme virusbelastningen.

Gjør analysen hver 3. måned, og hvis virusbelastningen øker 10 ganger, så kan vi snakke om motstanden til viruset til behandling.

Kvantitativ analyse gir svært viktig informasjon, fordi du kan bestemme hvor mye patogenets DNA er i blodet. Jo større mengden er, jo større er viralbelastningen og jo mer alvorlig pasientens tilstand. Ved å redusere viral belastning etter behandling, kan man dømme effektiviteten. I noen tilfeller er PCR for hepatitt en indikasjon på ytterligere testing, for eksempel en leverbiopsi. Ved forhøyede nivåer av ALT utføres PCR. Dekryptering av tester er som følger: Hvis virusbelastningen er over 105 kopier av DNA / ml, og ALT-nivået overskrider normen, men ikke mer enn 2 ganger over et halvt år, trenger en slik pasient en biopsi. Ved sterk betennelse eller fibrose er antiviral behandling indikert. Hvis ALT-nivået overskrider normen med mer enn 2 ganger med høy viral belastning, foreskrives behandlingen umiddelbart uten tilleggsdiagnostikk.

Kun gode spesialister vil kunne dechifisere resultatene av kvantitativ PCR på riktig måte.

PCR-kvalitet

Kvalitativ analyse gjør det mulig å bestemme tilstedeværelsen av hepatitt B i blodet. Normalt bør det være fraværende. Med denne metoden kan du nøyaktig etablere diagnosen.

HPR-analyse av høy kvalitet gir et 100% nøyaktig resultat.

Ingen annen metode gir slike pålitelige data. I mer enn halvparten av tilfellene etter å ha bestått diagnosen, blir DNA av viruset detektert, i fravær av antigen. Det er svært viktig å etablere diagnosen ved den første fasen av sykdommen.

Det er bevist at hvis DNA i hepatitt B-viruset reagerer aktivt i menneskekroppen i to måneder, blir sykdommen kronisk. Hvis vi begynner å bekjempe viruset allerede i de første ukene etter infeksjon, er sjansene for en fullstendig gjenoppretting veldig høy.

Hvordan er dekoding av de oppnådde resultatene fra undersøkelsen ved hjelp av den kvalitative metoden?

Dekoding analysen er veldig enkel:

Normalt bør resultatet være negativt, det vil si at virusets DNA ikke ble detektert. Et positivt resultat indikerer tilstedeværelsen av hepatitt.

Analysen bidrar til å identifisere viruset, bestemme genotypen og starte behandling i tide. Svært ofte, i nærvær av DNA, sammen med en kvalitativ vurdering, utfører de også en kvantitativ.

Hvordan forberede seg på undersøkelsen?

Når du analyserer hepatitt ved hjelp av PCR-diagnostikk, tas blod fra en blodåre. Det er best å bli undersøkt om morgenen, siden blodet alltid skal doneres på tom mage (etter siste måltid skal minst 8 timer passere).

For at analysen skal være så pålitelig som mulig, må pasienten være oppmerksom på noen faktorer som kan påvirke sluttresultatet:

Før du donerer blod fra en vene, må du hvile i 20 minutter. I tillegg er analysen gitt på tom mage, så i ytterligere 12 timer kan du ikke drikke alkohol, røyk, leke sport og spise fettstoffer. Noen medisiner som pasienten må ta kan påvirke sluttresultatet. Laboratorietekniker skal være oppmerksom på tilfelle av narkotikabehandling. Hvis blodet må doneres til et barn under 5 år, så er det i dette tilfellet nødvendig å drikke det hvert 10. minutt, en halv time før diagnosen. på et glass kokt vann.

Det er svært viktig å gjennomgå PCR i en klinikk som har fungert bra. Faktisk, til tross for at PCR bestemmer tilstedeværelsen av et virus med en nøyaktighet på opptil 100%, kan dette tallet falle til 95%, hvis vi vurderer den menneskelige faktoren.

Ukvalifiserte teknikere eller dårlig rykte kan resultere i falske resultater.

Polymerase Chain Reaction - Pasientinformasjon

innhold

Polymeraskjedereaksjon (PCR) er en kompleks laboratoriemetode som er mye brukt i medisin og andre grener av vitenskap. På en gang har PCR-diagnostikk blitt et stort gjennombrudd i vitenskapen. Vi kan si at dette er en av de viktigste funnene fra det 20. århundre i medisin. For oppdagelsen av metoden, fikk Keri Mullis, en biokjemistforsker, i 1993 en Nobelpris.

I lang tid har infeksjoner samlet en bitter hyllest fra menneskeheten. Pesten alene hevdet hundre tusen liv i middelalderen. I den vellykkede kampen mot epidemier er et viktig punkt nøyaktig og rettidig diagnose.

PCR-studier utføres vanligvis i laboratoriet på klinikken. Til tross for at PCR-testen for infeksjon er ganske dyr, blir prisen oppveid av høy nøyaktighet. Å etablere en nøyaktig diagnose er nok til å gjøre analysen en gang. Ved bruk av andre metoder kan det bli behov for flere eller gjentatte analyser.

Hvordan er analysen for smittsomme sykdommer

Oftest brukes serologiske og kulturelle metoder for å diagnostisere infeksjoner. I det første tilfellet bestemmes antistoffer mot smittefremkallende middel i serum. I det andre tilfellet brukes det biologiske materialet fra en syke til planting av et spesielt miljø som bidrar til veksten av patogenkolonier. I begge tilfeller kan diagnosen ta dager eller til og med uker.

PCR-undersøkelse kan utføres med eventuelle biologiske materialer oppnådd fra en syke person. Blod og andre biologiske, fysiologiske og patologiske væsker og medier kan tjene som prøver. Du kan utføre PCR-urin eller avføring.

Ofte bestemmer PCR-metoden virale og atypiske infeksjoner, da de kanskje ikke er mottagelige for konvensjonell diagnostikk på grunn av arten av den patologiske prosessen de forårsaker. For å diagnostisere disse infeksjonene, tar det tid, hvor kroppen vil begynne å produsere antistoffer, som bestemmes av serologiske metoder. Men i noen tilfeller er dette uakseptabelt.

Ved hjelp av PCR kan det humane immunbristviruset bestemmes allerede i dager eller uker, så nøyaktig som mulig, uten perioden med det seronegative vindu som er karakteristisk for andre metoder. (Et seronegativt vindu er intervallet fra infeksjonstidspunktet, hvor kroppen ennå ikke har begynt å produsere nok antistoffer for deteksjon).

Metoden for å utføre PCR - in vitro betyr laboratoriebestemmelse av infeksjon i prøver isolert fra pasienten.

Et sett med spesielle reagenser er nødvendig for å utføre polymerasekjedereaksjonen.

I reagensrør med reagenser gjøres materialet under studie. Rørene er plassert i en spesiell enhet - en PCR-forsterker. Den tjener til å amplifisere (øke antall) de ønskede DNA-fragmenter eller RNA. PCR-forsterkere går i syklisk modus. Hver syklus, hvis DNA-sekvensen eller RNA-sekvensen av patogenet er til stede i prøvene, akkumulerer kopier av disse nukleinsyrefragmentene i oppløsningen. Det er mulig å bestemme både forekomsten av patogenet og mengden i prøvene.

Typer av PCR

Analyse ved PCR - kvalitativ gir følgende resultat:

  • PCR - negativ, det ønskede patogenet i prøvene ble ikke detektert;
  • PCR - positivt, er mønstrene funnet i prøvene karakteristiske for ett eller annet patogen.

Når PCR-resultatet er positivt, indikerer det med 95% nøyaktighet forekomsten av en diagnostisert infeksjon. Nøyaktigheten av PCR-sett som brukes til diagnostikk, når 100%.

5% av feilaktige resultater er vanligvis avhengig av den menneskelige faktoren. Dermed kan brudd på reglene for lagring av reagenser og forskningsteknikker redusere nøyaktigheten av analysene.

Kvantitativ PCR analyse definerer en slik ting som viral belastning. Samtidig er det mulig å bestemme hvor mange prøver av patogenet som var inneholdt i prøver oppnådd fra pasienten. Jo mer - jo vanskeligere infeksjonen fortsetter. Du kan også bestemme suksessen til behandlingen ved å redusere viral belastning.

Levering av biomateriale på PCR

PCR-analyser utføres på klinikken, vanligvis om morgenen. Under et besøk til legen vil du bli fortalt at du må donere: blod, urin, smøring eller skraping. PCR er i stand til å identifisere patogener uansett graden av forurensning av materialet.

I teorien er tilstedeværelsen av bare ett patogen i prøver tilstrekkelig for en positiv analyse. I praksis prøver de å skape gunstigere forhold. Det er noen regler for dette:

  • Hvis du tar smøring eller skraping av kjønnsorganene, bør du avstå fra samleie 3 dager før testen;
  • bør ikke vaskes eller dusjes med antibakterielle midler på tvers av testen;
  • 3 timer før du tar smør fra urinrøret, skal være tålmodig og ikke urinere.

I tilfelle når pasienten donerer blod, kan du ikke overholde disse reglene.

Forskningsresultater

Resultatene av PCR er vanligvis klare innen en dag etter testen. Kvalitativ analyse ser lett ut. PCR-dekoding er ikke nødvendig, som vanligvis i den første kolonnen indikerer patogenet, i det andre - resultatet. For eksempel:

PCR-analyser

Polymerasekjedereaksjon regnes som en av de mest nøyaktige og raske diagnostiske metoder for mange smittsomme sykdommer. Det er også vellykket anvendt i kriminologi for å forenkle prosessen med å identifisere kriminelle, med hjelpepaternity er etablert med høy presisjon.

Essensen av PCR-metoden

Hver levende organisme, inkludert bakterier og virus, har unike gener som inngår i strukturen av DNA eller RNA i en bestemt sekvens. Under PCR-studien kopieres det genetiske materialet gjentatte ganger under påvirkning av DNA-polymerase og spesielle temperatur-sykluser.

Det er to hovedmetoder for polymerasekjedereaksjon:

  1. Den klassiske metoden er valget av patogenens genetiske materiale ved elektroforese;
  2. PCR i "sanntid".

Teknikken består av tre hovedfaser:

  • Prøveforberedelse;
  • DNA-amplifikasjon;
  • Deteksjon (identifikasjon) av det genetiske materialet til det mistenkte patogenet.

For å gjennomføre en undersøkelse, må PCR-laboratoriet være delt inn i 3 soner, hver fase av reaksjonen utføres strengt i rommet beregnet på det. Hver sone skal være utstyrt med nødvendig utstyr, dispensere, forbruksvarer, beskyttelsesklær som bare brukes i dette rommet.

Etter registrering og merking av prøver, i prøvepreparasjonsrommet, isoleres patogen-DNA eller RNA fra materialet som er studert ved eksponering for en bestemt temperatur og spesielle reagenser. Deretter begynner amplifikasjonsprosessen - skaper mange kopier av et unikt DNA-fragment. Den består av 3 hovedfaser:

  • DNA-denaturering - under påvirkning av høy temperatur (95 grader) unnglar DNA-helixen i 2 kjeder.
  • Primer Annealing - Spesielle syntetiske forbindelser (primere) som er identiske med den genetiske informasjonen ved endene av de ønskede nukleinsyrefragmentene, er festet til DNA-kjederens termini. Temperaturen som kreves for primerfeste er individuell for et bestemt tilfelle, det varierer fra 50 til 65 ° C.
  • Ved hjelp av DNA-polymeraseenzym, ved 70-72 grader mellom to primere, blir en tilsvarende del av DNA (amplikon) fullført. Som "byggemateriale" legges spesielle stoffer til røret.

Amplifikasjonssykluser blir gjentatt flere ganger, derfor blir det ekstraherte DNA kopiert gjentatte ganger, hvilket forenkler prosessen med dets identifikasjon. Identifikasjon kan utføres visuelt etter fremgangsmåten for elektroforese av amplifikasjonsprodukter i en agarosegel, eller automatisk bruk av sanntids-teknikken.

I studien ved PCR i "sanntid" oppstår forsterkning og deteksjon samtidig i spesielle enheter. Denne metoden er mest foretrukket, siden studien utføres i lukkede rør, reduserer risikoen for forurensning og dermed utstedelse av falske positive resultater.

Fordeler og ulemper med metoden

  • Studien tar bare noen få timer, i motsetning til de lange klassiske mikrobiologiske metodene;
  • Høy spesifisitet fra 95% til 100%, fordi Det ønskede DNA-fragment er unikt for hver spesifikk mikroorganisme;
  • Den høye følsomheten til metoden, det er mulig å oppdage patogenet, selv om det er representert i prøven under studien med bare én celle;
  • Identifisere patogenet kan være både kvalitativ og kvantitativ metode. Dette er svært viktig i isoleringen av betinget patogene mikroorganismer, som i liten mengde ikke forårsaker sykdom;
  • Evnen til å bestemme genotypen av patogenet (hepatitt C, HIV-infeksjon). Det er nødvendig for rasjonell behandling og prognose av mulige komplikasjoner;
  • Evnen til å identifisere en genetisk predisponering for sykdommen, og dermed forhindre dens utvikling.
  • Nesten hvilken som helst smittekilde kan identifiseres, og moderne teknikker tillater også deteksjon av aggregatmikroflora i prøven under studien, for eksempel vaginalbiokenosen.
  • Muligheten for å skaffe seg både en falsk positiv og en falsk-negativ prøve dersom reglene for å ta en prøve ikke følges, og det gjøres feil under studien.
  • Høy kostnad analyse.

søknad

Nesten alle prøver kan undersøkes ved hjelp av PCR (blod, urin, cerebrospinalvæske, skrap fra livmorhalskanal og urinrør, hårfollikler, sæd, etc.). Denne metoden er mye brukt for diagnose av STDs (gonoré, klamydia, ureaplasmose, mykoplasmose, trichomoniasis). Det kan brukes til å identifisere de kausative agenter av tuberkulose, difteri, lungebetennelse, viral hepatitt, HIV-infeksjon, toxoplasmose, cytomegalovirus og herpesinfeksjon, salmonellose etc.

En polymerasekjedereaksjon brukes til å etablere faderskap ved å sammenligne DNA fra foreldrene og barnet, identifisere genetiske abnormiteter og arvelig disposisjon av kroppen til forskjellige sykdommer.

Forberedelse for analysen

  • Blod anbefales å donere strengt på tom mage.
  • Før du tar smet fra urinrøret eller livmorhalskanalen, er det nødvendig å avstå fra sex i tre dager, det er nødvendig å ta analysen ikke tidligere enn en måned etter avslutningen av antibiotikabehandlingen, ellers kan resultatet være falskt positivt. Selv det døde patogenet oppdages av PCR-metoden, derfor er det bedre å gjennomføre studien etter at cellene er fullstendig fornyet.
  • Urin skal samles i en steril beholder.

Svaret vil oftest være klart om et par dager, avhengig av laboratoriumets evner.

Dekoding resultater

Ved bruk av en kvalitativ teknikk kan det kun være 2 mulige svar: positivt eller negativt. Et positivt resultat indikerer tilstedeværelsen av den utskårne mikroorganismen i prøven, en negativ indikerer fraværet.

Det kvantitative resultatet skal vurderes av den behandlende legen, en individuell tilnærming brukes i hvert enkelt tilfelle. Spesialisten tar hensyn til det mottatte svaret, bestemmer spørsmålet om behovet for behandling, dosering av legemidler, spesifiserer skjema og stadium av sykdommen.

Når man bestemmer den genetiske profilen (predisponering for trombofili, brystkreft) etter deklarering av resultatet, kan legen vurdere graden av risiko for å utvikle sykdommen, samt foreskrive et spesielt diett, forebyggende tiltak.

Var siden nyttig? Del det i ditt favoritt sosiale nettverk!

Kvantitativ PCR-analyse er rettet mot å bestemme konsentrasjonen

Polymerasekjedereaksjon (PCR) er i dag en av de mest effektive diagnostiske metodene.

Det gir de mest nøyaktige og pålitelige resultatene.

Materialet i studien er:

Ved hjelp av PCR diagnostiseres selv latente infeksjoner, spesielt seksuelt overførbare infeksjoner.

Essensen av denne analysen er å oppdage genomet av patogenet i materialet som er studert ved gjentatt syntese av DNA-molekylene.

Ved hjelp av PCR-, bakterielle, virale, protozoale og soppinfeksjoner kan det diagnostiseres.

Maksimal feil i denne studien overstiger ikke 5%.

I tillegg kan resultatene oppnås allerede på testdagen.

Det finnes to typer analyser ved hjelp av PCR:

Den kvalitative metoden utføres for å oppdage sykdomsfremkallende middel i biomaterialet.

PCR kvantitativ analyse

Polymerasekjedereaksjon - en metode for laboratoriediagnose.

PCR-testen er vidt anvendelig i medisin.

Dette skyldes høy nøyaktighet.

Metoden er basert på bestemmelsen av DNA fra mikroorganismer.

Utfør PCR-diagnostikk, som regel, i laboratoriet.

Når kvantitativ analyse av PCR-smitte og blod er nødvendig

Denne metoden brukes i urologi, gynekologi, venereologi.

Ofte er det nødvendig for diagnose.

Ved hjelp av PCR-testing kan du oppdage slike sykdommer som:

  • gonoré
  • syfilis
  • ureaplasmosis
  • klamydia
  • trichomoniasis
  • Humant papillomavirus.

Denne metoden brukes også i fremstillingen av donorblod.

Det unngår risikoen for transfusjon av infisert blod.

Kvantitativ analyse av PCR er rettet mot å bestemme konsentrasjonen av patogenet i kroppen, dvs. vurdering av graden av "smitte" hos pasienten.

Kvantitativ PCR er en uunnværlig metode for laboratoriediagnose av viral hepatitt C.

Med hjelpen blir innholdet i pasientens blod bestemt av virus-RNA, uttrykt i IE (internasjonale enheter) eller kopier per 1 ml.

I tilfeller hvor hepatitt C allerede er diagnostisert, utføres kvantitativ analyse av PCR i henhold til følgende skjema:

Er det nødvendig å forberede seg på kvantitativ PCR analyse?

Nei, spesiell trening i dette tilfellet er ikke nødvendig.

Den eneste tilstanden er å avstå fra å røyke 30 minutter før du donerer blod.

PCR-kvantitativ: hepatitt C

Hepatitt C er en smittsom sykdom som hovedsakelig påvirker leveren.

Infeksjonen trer gjennom blodet.

For å identifisere årsaken til denne sykdommen, brukes en kvantitativ PCR-test.

Det bestemmer konsentrasjonen av patogenet i pasientens blod.

For å bestemme omfanget av sykdommen, gjør RNA hepatitt C kvantitativt.

Ofte utføres PCR av hepatitt C etter deteksjon av de tilsvarende antistoffene.

Etter det blir testen gjort på 4, 12, 24 uker og deretter på et år.

Resultatene av kvantitativ analyse av PCR ved diagnosen hepatitt C

Å passere det riktige materialet for analyse av PCR er viktig.

Du må imidlertid kunne dekke resultatene riktig.

Hvordan tolke resultatene av kvantitativ analyse av PCR ved diagnosen hepatitt C og bestemme effektiviteten av behandlingen?

Det er verdt å merke seg at hepatitt C-viruset er ekstremt heterogent, motstandsdyktig mot det ytre miljø.

Med sin lave konsentrasjon i blodet, er overføringen av den på vertikal måte eller gjennom seksuell kontakt usannsynlig.

Infeksjon og sykdom forekommer oftere hos personer med nedsatt immunforsvar.

Eller samtidig smittsomme sykdommer i urinveiene (HIV, kjønnsinfeksjoner).

Venerologist, for å passere kvantitativ analyse av PCR

Husk! Dekrypter dataene skal bare lege.

Det er mulig å få et falskt resultat.

Det avhenger av hvordan materialet ble transportert, arbeidsplassen hvor blodet ble tatt for forskning, brudd på analyseteknologien.

Derfor bør du betale maksimal oppmerksomhet når du velger et laboratorium.

Smør PCR-kvantitativ på klamydia

Før du tar en PCR-test for denne infeksjonen, bør du vite hvordan du skal forberede deg til analysen.

Advarsel! Kvinner tar ikke materiale under menstruasjonssyklusen.

En vattpinne bør bare tas hvis visse regler overholdes:

  • Ikke bruk vaginale suppositorier før testing.
  • Avvise fra samleie på tidspunktet for analysen
  • To uker før forskningsnotat antibiotika

Smør i kvinner tatt fra skjeden.

Menn gjør skraping fra urinrøret.

Materialet tas med en spesiell steril sonde, hvoretter den plasseres i et sterilt rør.

Resultatet kan være:

  • Negativ - ingen infeksjon i biomaterialet;
  • Positive - Chlamydia er til stede i smøret.

Kvantitativ PCR analyse: HPV 21 type

Ved hjelp av denne metoden kan du umiddelbart bestemme hvilken type virus.

Denne typen HPV er vanlig.

HPV, det er mer enn 100 arter.

De fleste av dem påvirker huden, de resterende slimhinner.

Det finnes arter som kan forårsake kreft, som livmorhalskreft.

For analysen av å gjøre samlingen av epitelceller fra livmorhalsen.

Resultatene kan være som følger:

  • Risiko ikke oppdaget 0-3 Lg (HPV / 105)
  • Muligheten for utseende av dysplasi 3-5 Lg (HPV / 105)
  • Høy sannsynlighet for dysplasi 5 og høyere Lg (HPV / 105)

DNA-PCR: detektert

Resultatet av PCR-analysen er positiv - i pasientens biologiske materiale ble DNA-fragmentene av mikroorganismen funnet.

Hvis du får dette resultatet, start behandlingen så snart som mulig.

Det er tilfeller at resultatet er positivt, men personen føler seg normal, og det er ingen tegn på sykdommen.

Dette kan bety at sykdommen er i begynnelsen.

I dette tilfellet bør du konsultere en lege og begynne behandling.

Advarsel! Resultatet av analysen er ikke en diagnose. Behandlingsregimet må foreskrives av en lege.

Om nødvendig utpeker en spesialist å gjennomgå gjentatte studier,

Hvilken lege skal veksle til kvantitativ analyse av PCR

For å gjøre en kvantitativ PCR analyse må du kontakte klinikken.

Moderne laboratorieutstyr gir nøyaktig PCR analyse.

Du kan passere et smør når du besøker venereologen.

Legen vil undersøke og ta materialet til forskning.

Etter at du har mottatt resultatet, vil spesialisten hjelpe deg med å dechifisere resultatet og foreskrive nødvendig behandling.

Få en omfattende konsultasjon av en erfaren venerolog, gjennomgå en kvantitativ analyse av PCR, samt et kurs for effektiv behandling, du kan kontakte vår betalte KVD.

Husk at høy kvalitet og rettidig diagnose er nøkkelen til vellykket behandling og din sjanse for utvinning.

Hvordan er kvantitativ
PCR analyse forteller
Løytnant Oberst av Medisinske Tjenesten,
Legen Lenkin Sergey G.

Om nødvendig, må en kvantitativ PCR-analyse, inkludert hepatitt C, kontakte forfatteren av denne artikkelen - venerolog, urolog i Moskva med 15 års erfaring.

  • blodet
  • urin
  • prostatajuice
  • seminal fluid
  • kvalitativ og kvantitativ
  • Før starten av medisinen
  • 1 uke etter start av behandlingen
  • På den fjerde uken av behandlingen
  • På den 12. uke - på denne tiden tillater kvantitativ bestemmelse av PCR å evaluere effektiviteten av behandlingen av sykdommen
  • Ved den 24. behandlingsuke - en slutteksamen for å bekrefte utvinningen
  • Nivået på viremia, eller virusbelastning (viruskonsentrasjon i blodet) på 800.000 IE / ml regnes som høy.

Å få disse resultatene betyr den akutte fasen av sykdommen eller reaktivering av viruset.

Denne indikatoren indikerer en høy grad av infeksjonsevne, "smitte" av en person. Det faktum at faren for å bli smittet med et virus fra ham er for tiden svært høy.

  • Indikatoren 400 000 IE / ml indikerer lav virusinnhold.

Dette kan observeres med høy kroppsresistens.

Som et resultat undertrykkes reproduksjonen og aktiviteten til viruset. Eller når du gjenoppretter, takket være effektiv terapi.

I noen tilfeller indikerer analyseresultatene indikatoren "under måleområdet."

Dette betyr at konsentrasjonen av viruset i blodet er ubetydelig.

Men likevel er viruset tilstede i kroppen, som bekrefter PCR av høy kvalitet.

En oppføring i skjemaet "Ikke oppdaget" analyseresultat indikerer at det ikke er virus i pasientens blod.

PCR-analyse for hepatitt C

Diagnose av hepatitt inkluderer en rekke tester for å bestemme tilstedeværelsen av et virus i blodet. En av måtene å oppdage en sykdom er en slik undersøkelsesmetode som PCR for hepatitt C. Hva er det, hvorfor er analysen av PCR for hepatitt så viktig som den utføres og dechifrert?

Hva er det

Polymerase kjede reaksjon, eller PCR, brukes til å diagnostisere magesår, kolitt, enteritt. Men den største fordelen ligger i det faktum at det bidrar til å oppdage både hepatitt C-viruset og antistoffene i kroppen, noe som har evnen til ikke å forårsake immunsystemet reaksjoner på grunn av deres evne til å mutere.

Studien og dens essens ligger i etableringen av visse forhold under hvilke kjedereaksjonen av hepatitt-RNA forekommer. Hvis det, når det sammenlignes med nukleotidsekvensen for hepatitt C-viruset, forekommer tilfeldigheter, dette indikerer at det er virale partikler i blodet, og desintegreringsprosesser forekommer i leveren. Hvis mengden av virus er under et visst nivå, blir en negativ diagnose, og hvis høyere, en positiv en.

Det finnes to typer blodprøver ved hjelp av PCR-metoden for hepatitt: kvantitativ analyse og kvalitativ analyse.

Kvantitativ PCR, som nevnt ovenfor, bestemmer konsentrasjonen av RNA i hepatittviruset. I tillegg er han i stand til å gi informasjon om intensiteten som patologien utvikler, og effektiviteten av den foreskrevne behandlingen. En kvantitativ analyse av hepatitt C er ekstremt viktig fordi det løser motstand mot virkningen av antivirale legemidler og lar deg justere behandlingen.

Etter at pasienten har gjennomgått en behandling, bidrar PCR til å bestemme den videre rekkefølgen av avtaler. I noen tilfeller er behovet for ytterligere undersøkelser. For eksempel, hvis nivået av ALP økes (men ikke mer enn 2 ganger innen seks måneder), og transkripsjonen av analysen indikerer en virusbelastning over 105 IE / ml, foreskrives pasienten en biopsi. Hvis en kvantitativ analyse av PCR avslører en sterk betennelse og fibrose, foreskrives pasienten et behandlingsforløp med antivirale legemidler.

I situasjoner hvor et stort antall virale partikler kombineres med høy ALT, bør pasienten umiddelbart behandles uten ytterligere diagnostiske tiltak.

Ta denne testen og finn ut om du har leverproblemer.

Kun kvalifiserte og erfarne spesialister kan deififere kvalitativt i kvantitativ analyse av blod for hepatitt, og moderne teknologier bidrar til å gjøre dette med lav konsentrasjon av viruset i blodet.

Kvalitativ analyse av PCR er rettet mot å bestemme og bekrefte den faktiske forekomsten av viruset i kroppen. Det utføres når antistoffer mot hepatitt detekteres i blodet. Det er en kvalitativ analyse av hepatitt som garanterer nøyaktigheten av resultatet med 100%, og lar deg gjøre diagnose i de tidlige stadiene av sykdommen, som gjør det mulig å starte kampen mot hepatitt allerede i de første ukene etter infeksjon og øker sjansene for fullstendig gjenoppretting (i tilfelle sykdommen B).

Fordeler med PCR

I studien ved PCR og deklarering av en blodprøve for hepatitt, kan du også bestemme genotypen av patogenet. Totalt er det 6 genotyper av viruset og et stort antall subtyper, men i vår region er 1, 2 og 3 genotyper blitt vanlige.

Andre fordeler med denne typen diagnose er:

  • høy nøyaktighet av de innhentede indikatorene og lav sannsynlighet for feil i dem;
  • høyt følsomhetsnivå for virale partikler i blodet;
  • muligheten til å identifisere flere patogener samtidig;
  • diagnose av patogene intracellulære mikroorganismer med høy antigenvariabilitet;
  • Ved å arbeide med dekoding av analysen for hepatitt, kan du oppdage skjulte nåværende infeksjoner.

Hvem er utnevnt

Følgende kategorier av mennesker må passere PCR-analysen for hepatitt:

  • gravide kvinner;
  • helsepersonell;
  • potensielle blod- og organdonorer;
  • de som har karakteristiske tegn på sykdommen;
  • HIV-infiserte individer;
  • rusmisbrukere
  • person promiskuøse.

Hvordan utføres analysen og er det nødvendig å forberede seg på det

Blodprøvetaking for PCR er utført fra en vene. Som regel skjer dette om morgenen før personen har spist, fordi etter å ha spist et måltid, skal minst 8 timer passere. I ekstreme tilfeller kan blod tas til undersøkelse om dagen eller kvelden, men tidsgapet mellom analyse og inntak av mat bør være minst 5 timer.

Den menneskelige faktoren kan kvantitativt påvirke resultatene: Nøyaktigheten i noen tilfeller reduseres fra 100% til 95%, derfor er det nødvendig å forberede bloddonasjon på forhånd. Kvaliteten på biomaterialet for analyse vil være hensiktsmessig når pasienten følger følgende regler:

  • før du gir blod, kan du bare drikke rent vann;
  • To dager før studien er det nødvendig å nekte å godta stekte og fete matvarer, samt alkoholholdige drikker;
  • En dag før besøket til laboratoriet bør slutte å ta medisiner. Hvis dette ikke er mulig, er det viktig å informere laboratorietekniker og behandlende lege.
  • dagen før du trenger å unngå stressende situasjoner og fysisk anstrengelse;
  • ultralyd, røntgen og instrumentelle undersøkelser bør ikke utføres kort før bloddonasjon;
  • i timen før analysen må du avstå fra å røyke;
  • 20 minutter før du donerer blod, må du bli distrahert, roe ned og puste ut.

Hvis et barn under 5 år passerer studien, bør foreldrene sørge for at han drikker kokt vann hvert 10. minutt i en halv time før du tar biomaterialet.

Dekryptering av mottatte data

Dekoding av analysen kan representeres av ord (i tilfelle av en kvalitativ studie), for eksempel "ikke oppdaget" eller "under rekkevidden av endringer". I det første tilfellet indikerer dette at infeksjonen ikke ble oppdaget. I det andre - at viruset er tilstede, men i små mengder. Denne situasjonen krever re-forskning.

Viral belastning bestemmes av mengden infeksiøs RNA og refereres til som IE / ml eller kopier / ml.

En normal indikator (norm) for en kvantitativ analyse for hepatitt C er intervallet fra 1,8x102 til 2,4x107 IE / ml.

Konsentrasjonen av virus i blodet kan være:

  • lav: fra 600 IE / ml til 3x10 4 / ml;
  • medium: fra 3x10 4 IE / ml til 8x10 5 IE / ml;
  • høy: mer enn 8x10 5 IE / ml.

Kvantitativ og kvalitativ analyse av PCR for hepatitt tillater å bestemme tilstedeværelsen av viruset i kroppen og nivået av konsentrasjonen. En flerdimensjonal kjedereaksjon er i stand til å diagnostisere sykdommen i sine tidlige stadier, men for dette er det nødvendig at pasientene så snart som mulig kontakter medisinske institusjoner for å få hjelp og følg nøye anbefalingene fra den behandlende legen.

Hvorfor kan det kreve bloddonasjon for PCR

En pålitelig, rask og svært sensitiv diagnostisk metode som er i stand til å identifisere de forårsakerne av forskjellige smittsomme sykdommer, identifiserer deres genetiske materiale (DNA eller RNA) i prøver oppnådd fra pasienten som undersøkes, kalles polymerasekjedereaksjonen (PCR).

Analyse av PCR (polymerasekjedereaksjon) ble først utviklet av American Carey Mulllis i 1983. Teknikken ble umiddelbart patentert av Cetus Corporation. I 1992 ble patentet solgt til Hoffman-La Roche-selskapet, men det viste seg at mange forskere fra forskjellige land samtidig jobbet i denne retningen, og bidro til utvikling av ny teknologi for å identifisere smittsomme sykdommer.

På en gang kalte mange forskere PCR-metoden et "revolusjonerende" gjennombrudd for virologer og smittsomme leger, noe som gjør det mulig å få resultatet av analysen om noen timer, i stedet for å vente på informasjonsdager og uker, som tidligere var nødvendig.

Essensen av PCR-metoden

Essensen av polymerasekjedereaksjonsmetoden er en multipel økning i de minste konsentrasjoner av DNA-fragmenter i hvilken som helst prøve. For dette:

  1. I en spesiell reaktor plasseres en liten mengde biologisk materiale i et reagensrør (spytt, blod, urin, utslipp fra kjønnsorganene), som kan inneholde DNA-fragmenter av mikroorganismen.
  2. Spesielle enzymer legges til dette materialet som binder til mikroorganismens DNA, syntetiserer kopien.
  3. Reaksjonen av DNA-kopiering er basert på prinsippet om en kjedereaksjon i flere stadier:

  • 2 nye molekyler dannes fra 1 DNA-molekyl;
  • den andre fasen - fra de eksisterende 2 molekylene blir det dannet 4 nye;
  • Etter en serie sykluser, i stedet for 1 kopi av DNA, er flere hundre / tusen eksemplarer klare for undersøkelse.

Fordelene med PCR over andre diagnostiske metoder

De klare fordelene som analysen av PCR for STI viser, bør tilskrives nøyaktigheten og selektiviteten av de oppnådde resultatene, siden PCR-reagenset nærmer infeksjons-DNA nøyaktig som nøkkelen til låsen. Det er et reagens for hvert patogen. Den samme bakposev er anerkjent som en like følsom metode, kjent i lang tid, utarbeidet til minste detalj, om enn mer plagsom. Imidlertid, når det gjelder implementering av såing, mister man signifikant molekylære diagnostiske metoder.

Selv det faktum at hvert patogen trenger sitt eget næringsmedium og for klamydia, er det for eksempel veldig dyrt, kan ikke betraktes som en avgjørende faktor for å bestemme utbredelsen av analysen, mens pasienten bare trenger å skille fra urinrøret til PCR.

Som det viste seg, gjør den eksisterende forskjellen mellom ELISA og PCR ikke det mulig å gjenkjenne enzymimmunoassaymetoden som det beste, siden den samme klamydia forårsaker et respons av det menneskelige immunsystem i form av produksjon av antistoffer IgA, IgM, IgG, og sistnevnte forblir i blodet i et år etter fullstendig kur og forårsaker tvetydig ved første øyekast resultatene av laboratorieundersøkelser - ELISA-positiv PCR er negativ (det er antistoffer, men mikroorganismen DNA er ikke fordi pasienten allerede har blitt kurert).

I tillegg svekket av sterke infeksjoner, kan immunsystemet være sent for å begynne å produsere antistoffer detektert av ELISA, eller ikke å produsere dem i det hele tatt. I dette tilfellet er resultatene av analysen som følger - ELISA-negativ PCR er positiv, noe som indikerer begynnelsen av sykdommen, selv om det fortsatt ikke finnes kliniske og laboratoriemessige manifestasjoner av det.

Pasienter oppfordres til å donere blod til PCR, siden denne metoden har følgende fordeler i forhold til eksisterende teknologier for å oppdage latente infeksjoner:

  1. Høy følsomhetsmetode. Etter å ha bare noen få DNA-molekyler i en mikroorganisme, bestemmer laboratoriespesialister, som utfører PCR-analyse, tilstedeværelsen av en infeksjon, noe som er ekstremt viktig ved diagnostisering av kroniske latente patologier. I noen tilfeller, når mikroorganismen utvinnes på annen måte, er en slik analyse den eneste objektive metoden for å identifisere patogenet.
  2. Ethvert biologisk materiale (spytt, blod, hår, kjønnsseksjoner, epitelceller) er egnet for høy kvalitet og rask forskning.
  3. Automatisert prosess lar deg få resultatene av studien etter 4-5 timer. Det er til og med den mest moderne PCR-metoden i sanntid, da en visuell vurdering av PCR-resultater, som en elektroforese-metode ble brukt, erstattes av fluorescerende metoder for å detektere amplifikasjonsprodukter. Som et resultat av å anvende en modifisert analysemetode blir det enklere, raskere og mer pålitelig å skaffe og tolke analyseresultatene.
  4. Til tross for metodenes universalitet utvikles mer spesialiserte teknologier på grunnlag av den, slik at en erfaren lege ikke tenker på hvilken laboratorieundersøkelse som foreskriver - femoflor eller PCR når man undersøker urogenitalkanalen hos kvinner. Det er femoflor basert på bruk av polymerasekjedereaksjonen som er anerkjent som den beste metoden ved hvilken PCR-diagnostikk av urogenitale infeksjoner gir et nøyaktig kvalitativt og kvantitativt bilde av det betingelsespatogene og normale bildet av den kvinnelige urogenitale delen i "sanntid" -modus.
  5. Legen kan identifisere flere typer patogener når pasienten bare sender 1 prøve av materiale til analyse. Dette øker prosessen med å diagnostisere sykdommen, reduserer materialkostnadene ved laboratorietester dramatisk.
  6. Kvantitativ analyse av PCR er også anerkjent som en viktig faktor som bestemmer fordelene ved å diagnostisere en latent sykdom ved hjelp av polymerasekjedereaksjonsmetoden - for å evaluere effektiviteten av behandling av mange kroniske infeksjoner.

Ellers blir i de siste fasene av metning, når det er for mange kopier oppnådd som følge av PCR, både substratene (deoksyribonukleosidtrifosfater) og enzymet i seg selv blir reaksjonens begrensningsenheter. Faktisk blir for molekylene det for mye matrised DNA i form av produkter av polymerasekjedereaksjonen. Under disse forhold er ferdigstillelsen av neste fase av PCR ikke lenger ledsaget av en dobling av antall DNA / RNA-kopier, men små kvantitative forskjeller mellom tidlige og sentlige prøver utjevning, selv om forskjellene i de første trinnene av PCR er ganske tydeliggjort.

  • Resepsjonsområde, registrering, analyse og forbehandling av materialet;
  • DNA / RNA isolasjonssone i et eget rom;
  • sone-fremstilling av reaksjonsblandingene og PCR;
  • deteksjonssone amplifikasjonsprodukter.

Den opprettede tilførsels- og eksos- eller eksosventilasjon, selv om det er tillatt å installere klimaanlegg, innebærer 5-6 m³ / time luftstrøm og 6-7 m³ / time for avtrekksluft. Hvis arrangementsreglene for PCR-laboratoriet brytes, kan resultatene av analysen være falsk-positive.

Hvordan forberede dere på analysen?

For å oppnå pålitelige resultater av PCR-studier anbefaler vi at du foretar forberedende forberedelser for slik diagnostikk:

  1. Før levering av spyt, er det nødvendig å avstå fra å spise mat, samt medisiner 4 timer før innsamling av materiale. Umiddelbart før prosedyren, må du skylle munnen med kokt vann. De samme reglene bør observeres når man tar en prøve for analyse fra kinnets indre overflate. Etter å ha skyllet munnen, er det nødvendig å massere huden i kinnområdet for å markere hemmeligheten til kjertelen.
  2. Urin for analyse samles vanligvis hjemme. Riktig forberedelse til levering av PCR-urin er som følger - det er nødvendig å gjennomføre et grundig toalett i kjønnsorganene, og deretter samles 50-60 ml av en middels del av urinen i en steril plastbeholder. For å sikre renheten av materialpreparatet for analyse av PCR for kvinner involverer innføring av en tampong i skjeden. Menn bør definitivt åpne penisens hode. Du kan ikke passere materialet til PCR-analyse i menstruasjonsperioden.
  3. Før du gir spermier - bør du avstå fra samleie i 3 dager før du tar materialet. Vi anbefaler deg ikke å gå til badstuen, til og med et varmt bad, spise krydret mat og alkohol. Og 3 timer før analysen, er det nødvendig å urinere for å avstå fra urinering i fremtiden.
  4. Når et urogenitalt smør er tatt, må kvinner og menn gi opp sex i 3 dager.
  5. Det er umulig å utføre PCR etter antibiotika - i 2 uker før analysen er det nødvendig å nekte å ta antibakterielle stoffer.
  6. En uke før analysen - det er nødvendig å stoppe bruken av intime salver, geler, vaginale suppositorier og douching. 3 timer før testen - avstå fra urinering. Under menstruasjonen utføres ikke gjerdet - 3 dager etter at blodutløpet er opphørt, kan du ta et urogenitalt smør for polymerasekjedereaksjon.
  7. PCR under graviditet har sine egne egenskaper. Siden svangerskapet i løpet av svangerskapet kan enhver infeksjon forårsake skade på fosteret, spesielt forårsaket av en STI, anbefales det sterkt å bli undersøkt tidlig i svangerskapet for å fastslå tilstedeværelse eller fravær av patologi som kan føre til abort, tidlig fødsel. En analyse skal sendes ved registrering, med en svangerskapstid på opptil 12 uker.

Relaterte Artikler Hepatitt