Hepatitt C virus (HCV), cor, NS3, NS4, NS5 antigener, IgG antistoffer

Tapet i leveren med et type C-virus er et av de akutte problemene hos smittsomme spesialister og hepatologer. For sykdommens karakteristiske lang inkubasjonsperiode, hvor det ikke foreligger kliniske symptomer. På denne tiden er transportøren av HCV den farligste fordi den ikke vet om sin sykdom og er i stand til å infisere friske mennesker.

For første gang om viruset begynte å snakke i slutten av 1900-tallet, hvoretter fullskalaundersøkelsen begynte. I dag er det kjent om sine seks former og et stort antall subtyper. Slike variabilitet av strukturen skyldes patogenes evne til å mutere.

Grunnlaget for utviklingen av infeksjons-inflammatorisk prosess i leveren er ødeleggelsen av hepatocytter (dens celler). De blir ødelagt under direkte påvirkning av et virus med en cytotoksisk effekt. Den eneste sjansen til å identifisere det patogene stoffet i det prekliniske stadium er laboratoriediagnose, som innebærer søket etter antistoffer og virusets genetiske kit.

Hva er hepatitt C antistoffer i blodet?

En person som er langt fra medisin, er vanskelig å forstå resultatene av laboratorieundersøkelser, har ingen anelse om antistoffer. Faktum er at strukturen av patogenet består av et kompleks av proteinkomponenter. Etter å ha kommet inn i kroppen, forårsaker de immunforsvaret å reagere, som om det irriterer det med sin tilstedeværelse. Dermed begynner produksjonen av antistoffer mot hepatitt C-antigener.

De kan være av flere typer. På grunn av evalueringen av deres kvalitative sammensetning, klarer legen å mistenke infeksjon hos en person, samt å etablere sykdomsstadiet (inkludert utvinning).

Den primære metoden for påvisning av antistoffer mot hepatitt C er en immunoanalyse. Hensikten er å søke etter spesifikt Ig, som syntetiseres som svar på penetrasjonen av infeksjonen i kroppen. Merk at ELISA tillater å mistenke sykdommen, etter hvilken ytterligere polymerasekjedereaksjon er nødvendig.

Antistoffer, selv etter en fullstendig seier over viruset, forblir for resten av deres liv i humant blod og indikerer tidligere immunitetskontakt med patogenet.

Sykdomsfaser

Antistoffer mot hepatitt C kan indikere et stadium av infeksjons-inflammatorisk prosess, som hjelper spesialisten til å velge effektive antivirale legemidler og spore dynamikken i endringer. Det er to faser av sykdommen:

• latent. En person har ingen kliniske symptomer, til tross for at han allerede er virusbærer. Samtidig vil testen for antistoffer (IgG) til hepatitt C være positiv. Nivået av RNA og IgG er lite.
• akutt - preget av en økning i antistoff titer, spesielt IgG og IgM, som indikerer en intens multiplikasjon av patogener og uttalt ødeleggelse av hepatocytter. Deres ødeleggelse bekreftes av veksten av leverenzymer (ALT, AST), som avsløres av biokjemi. I tillegg er RNA-patogene middel funnet i høy konsentrasjon.

Positiv dynamikk på bakgrunn av behandling er bekreftet av en reduksjon i viral belastning. Ved gjenvinning oppdages ikke årsaksmidlets RNA, kun G immunoglobuliner forblir, som indikerer en overført sykdom.

Indikasjoner for ELISA

I de fleste tilfeller kan immuniteten ikke takle selve patogenet, siden det ikke gir et kraftig svar mot det. Dette skyldes en endring i strukturen av viruset, som et resultat av hvilke antistoffene som produseres er ineffektive.

Vanligvis er en ELISA foreskrevet flere ganger, siden et negativt resultat (ved sykdommens begynnelse) eller en falsk positiv (hos gravide kvinner, med autoimmune patologier eller anti-HIV-terapi) er mulig.

For å bekrefte eller avvise svaret fra ELISA, er det nødvendig å gjennomføre det etter en måned, samt gi blod til PCR og biokjemi.

Antistoffer mot hepatitt C-viruset undersøkes:

1. injiserende narkotikabrukere;
2. hos mennesker med levercirrhose;
3. hvis gravid er et carrier virus. I dette tilfellet er både mor og baby underlagt undersøkelse. Risikoen for infeksjon varierer fra 5% til 25%, avhengig av viral belastning og sykdomsaktivitet;
4. etter ubeskyttet sex. Sannsynligheten for overføring av viruset overstiger ikke 5%, men med skade på slimhinnen i kjønnsorganene, homoseksuelle, samt elskere av hyppige endringer av partnere, er risikoen mye høyere;
5. etter tatovering og kroppspiercing;
6. etter å ha besøkt en skjønnhetssalong med dårlig rykte, siden infeksjon kan oppstå gjennom forurensede instrumenter;
7. før du donerer blod, hvis en person ønsker å bli donor;
8. i medsotrudnikaov;
9. ombordstigning arbeidstakere;
10. nylig utgitt fra MLS;
11. hvis en økning i leverenzymer (ALT, AST) oppdages for å utelukke virusskade på orgelet;
12. i nær kontakt med virusbæreren;
13. hos mennesker med hepatosplenomegali (en økning i levervolum og milt);
14. hos HIV-infiserte;
15. hos en person med yellowness av huden, hyperpigmentering av palmer, kronisk tretthet og smerte i leveren;
16. før planlagt kirurgi;
17. når du planlegger en graviditet;
18. hos mennesker med strukturelle endringer i leveren, oppdaget av ultralyd.

Enzymimmunoassayet brukes som en screening for massescreening av mennesker og søket etter virusbærere. Dette bidrar til å forhindre et utbrudd av en smittsom sykdom. Behandlingen initiert ved første fase av hepatitt er mye mer effektiv enn terapi mot bakgrunnen av levercirrhose.

Typer antistoffer

For å kunne tolke resultatene av laboratoriediagnostikk riktig må du vite hva slags antistoffer det er og hva de kan bety:

1. anti-HCV IgG er den viktigste typen antigener som representeres av immunoglobuliner G. De kan detekteres ved den første undersøkelsen av en person som gjør det mulig å mistenke sykdommen. Hvis svaret er positivt, er det verdt å tenke på den svake smittsomme prosessen eller kontakten med immunitet med virus i fortiden. Pasienten trenger ytterligere diagnose ved hjelp av PCR;
2. anti-HCVcoreIgM. Denne typen markør betyr "antistoffer mot kjernefysiske strukturer" av det patogene middel. De opptrer kort tid etter infeksjon og indikerer en akutt sykdom. Økningen i titer observeres med en reduksjon i styrken av immunforsvaret og aktivering av virus i kronisk forlengelse av sykdommen. Når remisjon er svakt positiv markør;
3. anti-HCV totalt - en total indikator for antistoffer mot patogenens strukturelle proteinholdige forbindelser. Ofte lar den ham nøyaktig diagnostisere scenen av patologi. Laboratorieforskningen blir informativ etter 1-1,5 måneder fra øyeblikket av HCV-penetrasjon i kroppen. Totale antistoffer mot hepatitt C-viruset er en analyse av immunglobulin M og G. Deres vekst observeres i gjennomsnitt 8 uker etter infeksjon. De vedvarer for livet og indikerer en tidligere sykdom eller dens kroniske kurs;
4. anti-HCVNS. Indikatoren er et antistoff mot ikke-strukturelle proteiner av patogenet. Disse inkluderer NS3, NS4 og NS5. Den første typen er oppdaget i begynnelsen av sykdommen og indikerer immunitetskontakt med HCV. Det er en indikator på infeksjon. Langvarig bevaring av høyt nivå er et indirekte tegn på kroniskheten av den virale inflammatoriske prosessen i leveren. Antistoffer mot de resterende to typer proteinstrukturer blir detektert i det sentrale stadium av hepatitt. NS4 er en indikator på omfanget av organskade, og NS5 indikerer en kronisk sykdom i sykdommen. Redusere sine titere kan betraktes som begynnelsen på remisjon. Gitt den høye kostnaden for laboratorieforskning, brukes den sjelden i praksis.

Det er også en annen markør - dette er HCV-RNA, som innebærer søket etter et genetisk sett av patogenet i blodet. Avhengig av viral belastning kan infeksjonsbæreren være mer eller mindre smittsom. For studien brukes testsystemer med høy følsomhet, noe som gjør det mulig å oppdage det patogene stoffet i det prekliniske stadiet. I tillegg kan ved hjelp av PCR detekteres en infeksjon på scenen når antistoffer fortsatt er fraværende.

Tidspunktet for utseendet av antistoffer i blodet

Det er viktig å forstå at antistoffer opptrer på forskjellige tidspunkter, noe som gjør at du lettere kan etablere stadium av infeksjons-inflammatorisk prosess, vurdere risikoen for komplikasjoner, og også mistenker hepatitt ved begynnelsen av utviklingen.

Totale immunglobuliner begynner å registrere seg i blodet i den andre infeksjonsmåneden. I de første 6 ukene øker nivået av IgM raskt. Dette indikerer en akutt sykdomssykdom og høy aktivitet av viruset. Etter toppen av konsentrasjonen, observeres nedgangen, noe som indikerer begynnelsen av den neste fasen av sykdommen.

Hvis det oppdages klasse G antistoffer mot hepatitt C, er det verdt å mistenke slutten av den akutte scenen og overgangen til patologien til kronisk. De oppdages etter tre måneder fra infeksjonstidspunktet i kroppen.

Noen ganger kan totale antistoffer isoleres i den andre måneden av sykdommen.

Som for anti-NS3, oppdages de på et tidlig stadium av serokonversjon, og anti-NS4 og -NS5 - på et senere tidspunkt.

Dekoding av forskning

Til påvisning av immunoglobuliner ved bruk av ELISA-metoden. Den er basert på reaksjonen av antigen-antistoff, som går videre under virkningen av spesielle enzymer.

Normalt er ikke den totale indeksen registrert i blodet. For den kvantitative vurderingen av antistoffer brukte koeffisienten av positivitet "R". Det indikerer tettheten av den studerte markøren i det biologiske materialet. Referanseverdiene varierer fra null til 0,8. Utvalget av 0,8-1 indikerer en tvilsom diagnostisk respons og krever ytterligere undersøkelse av pasienten. Et positivt resultat vurderes når R-enheter overskrides.

Hepatitt C antigener

Minst 10 strukturelle og ikke-strukturelle proteiner kodet av HCV-genomet er kjent i dag. Strukturelle proteiner inkluderer kjerne, innhylle 1 og innhylle 2. Kjerneproteinet er et nukleokapsidprotein, mens innhylning 1 og innhylning 2 er glykoproteiner av virusets ytre skall. P7-proteinet er også kodet i struktur-sonen, hvis funksjon ikke er klar, men analogien med andre medlemmer av familien Flaviviridae antyder at dens funksjon er forbundet med frigjøring av virionen fra en infisert celle.
Dette proteinet spaltes av cellepeptidasen fra konvolutt 2, men ikke i alle tilfeller, som forårsaker eksistensen av konvolutt 2 i form av to flere og mindre utvidede former.

Den ikke-strukturelle regionen av HCV-genomet koder for 6 proteiner - NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A og NS5B. NS2-proteinet er en metallavhengig virusprotease. NS4A-proteinet virker som en effektor eller kofaktor for NS3-proteolytisk aktivitet i NS4A / NS4B-, NS4B / NS5A-, NS5A / NS5B-viruspolyproteinskjæringsstedene.

I dag brukes fragmenter av strukturelle og ikke-strukturelle proteiner oppnådd ved genteknologi (rekombinante proteiner) eller ved kjemisk syntese, som antigener i utformingen av enzymimmunoassay-testsystemer. Den første generasjonen enzymimmunoassaysystemer dukket opp på markedet i 1989 og var basert på direkte ELISA. Som en immunosorbent ble fragmenter av to proteiner, NS3 og NS4, betegnet som 5-1-1 og C100-3, anvendt.

Samtidig ble bekreftende tester basert på immunoblot med rekombinante proteiner (RIBA) utviklet. Sensitiviteten til disse førstegenerasjons testsystemene var bare 64% for ELISA og 55% for immunoblot. Testsystemer fra andre generasjon dukket opp på markedet i 1991. Som antigener som ble adsorbert på den faste fase, ble kapsidproteiner (fragment c22-3) og antigener av ikke-strukturelle regioner NS3 (fragmenter c200 og s3S3) og NS4 anvendt i disse testsystemene, noe som gjorde det mulig å øke sensitiviteten og spesifisiteten av studiene. Siden humoral immunresponsen mot kapsidantigener (strukturelle proteiner) er mer unormal, blir heme redusert til ikke-strukturelle proteiner, perioden fra infeksjon til påvisbar serokonversjon ble redusert til to måneder.

Bekreftende immunoblotbaserte testsystemer gjorde det mulig å identifisere antigenene som er involvert i reaksjonen. Resultatene som ble oppnådd ved bruk av disse testsystemene ble fortolket som positive bare når antistoffene i underlaget reagerte med minst to antigener, mens i nærvær av en reaksjon med bare ett av antigenene, ble resultatet vurdert usikkert. Det ble funnet at spesifisiteten til andre generasjon testsystemer var avhengig av antigenkilden. I 1993 dukket opp den tredje generasjonen av testsystemer på markedet. I tillegg til ovennevnte antigener, blir antigener også brukt i disse testsystemene, hvorav aminosyresekvensen tilsvarer de immunodominante regioner av NS5-proteiene.

I testsystemene i den første, andre og tredje generasjon ble enten rekombinante eller syntetiske peptider anvendt som antigener. I dag er det også mulig å sette ut testsystemer av den fjerde generasjonen, hvor kombinasjoner av rekombinante og syntetiske peptider anvendes som en immunosorbent.

Erfaringen med å bruke testsystemer av ulike generasjoner i verden er veldig stor. Det ble funnet at ved bruk av testsystemer i den første eller andre generasjon hos pasienter med akutt viral hepatitt C, ble det påvist 10-16 antistoffer, og i noen tilfeller 25-30 uker fra sykdomsbegynnelsen tillatt tredje generasjons diagnostikk å redusere denne perioden til 2-3 uker. I henhold til de generelle dataene er følsomheten til testsystemene i den første, andre og tredje generasjon henholdsvis 70-80%, 92-95% og 97%.

Samtidig, ifølge S. Colin, 2001, var sensitiviteten til tredje generasjons testsystemer 98,9% hos pasienter med kroniske leversykdommer og 97,2% i spesielle serumkontrollpaneler. Oppnåelse av høy følsomhet for immunoenzymtestsystemene i 3. og 4. generasjon er forbundet med noen problemer for å sikre spesifisiteten til forskning, noe som i noen tilfeller kan føre til falske positive resultater. I litteraturen er det bevis på mulige feil i spesifisiteten til ELISA 3 testsystemer. De er felles for alle ELISA testsystemer, inkludert testsystemer for diagnostisering av AIDS.

Falske positive resultater kan skyldes økte nivåer av gammaglobuliner i prøver (pasienter i afrikansk rase, myelom, reumatoid faktorer), leversykdom (skrumplever, kreft), autoimmune sykdommer (kollagenose, autoimmun hepatitt), andre virusinfeksjoner (HIV, hepatitt B ) og langsiktig lagring av serum i endrede temperaturforhold. Enhver immunisering kan også ledsages av en økning i frekvensen av falske positive reaksjoner. De anbefalte tiltakene for å eliminere dette problemet er som følger: a) gjeninnstilling av prøven i samme EFTS; b) gjentatt gjenkjenning av anti-HCV i en annen IFTS; c) bruk av bekreftende tester basert på ELISA og immunoblot.

Bruken av de foreslåtte metodene for å bekrefte resultatene fører imidlertid ofte til uoverensstemmelser i deres endelige tolkning, som vist av studier av russiske og utenlandske forskere.

For tiden oppnår produsenter av IPT for detektering av anti-HCV høy følsomhet eller på grunn av en mer fullstendig deteksjon av antistoffer mot NS3 eller antistoffer mot antigenkjernen. Sammenligningsstudier utført på ulike risikogrupper og spesielle kontrollpaneler viste at testsystemer som viste bedre antistoffer mot NS3, viste seg å være noe mer følsomme enn testsystemer som bedre oppdaget antistoffer mot kjerneantigener. Deres følsomhet var henholdsvis 99,9% og 98,6%.

Totalt markører og tolkning av analysen for antistoffer mot hepatitt C

Virale lesjoner av leveren i dag er ofte manifestert i praksis av gastroenterologer. Og lederen vil sikkert være hepatitt C blant dem. Når det gjelder kronisk stadium, forårsaker det betydelig skade på leverenceller, forstyrrer fordøyelsessystemet og barrierefunksjonene.

Hepatitt C er preget av en svak strøm, en lang periode uten manifestasjon av de viktigste symptomene på sykdommen og en høy risiko for komplikasjoner. Sykdommen gir ikke seg selv lenge, og kan bare avsløres med en test for antistoffer mot hepatitt C og andre markører.

Hepatocyttene (leverceller) påvirkes av viruset, det forårsaker dysfunksjon og ødeleggelse. Gradvis har sykdommen ført til døden til en person etter å ha passert kronisk stadium. Tidlig diagnose av pasienten for hepatitt C antistoffer er i stand til å stoppe utviklingen av sykdommen, forbedre pasientens kvalitet og forventet levetid.

Hepatitt C-viruset ble først isolert ved slutten av det 20. århundre. Medisin skiller i dag seks variasjoner av viruset og mer enn hundre av sine subtyper. Bestemmelse av typen mikrobe og dens subtype hos mennesker er svært viktig, siden de bestemmer sykdomsforløpet og derfor nærmer seg behandlingen.

Fra det øyeblikket viruset først kommer inn i det menneskelige blod, går det fra 2 til 20 uker før de første symptomene vises. I mer enn fire femtedeler av alle tilfeller utvikles en akutt infeksjon uten noen symptomer. Og bare i ett av de fem tilfellene er det mulig å utvikle en akutt prosess med et karakteristisk lyst klinisk bilde i henhold til alle regler for gulsottoverføring. Kronisk infeksjon anskaffer mer enn halvparten av pasientene, og flyttes deretter inn i levercirrhose.

Antistoffene som oppdages i tid til hepatitt C-viruset, er i stand til å diagnostisere infeksjonen i sitt mest primære stadium og gi pasienten sjansen til en fullstendig kur.

Hva er antistoffer mot hepatitt C?

Folk som ikke er relatert til medisin, kan ha et naturlig spørsmål - hepatitt C antistoffer, hva er det?

Viruset av denne sykdommen i sin struktur inneholder et antall proteinkomponenter. Når de inntas, forårsaker disse proteinene at immunsystemet reagerer, og antistoffer mot hepatitt C blir dannet for dem. Ulike typer antistoffer isoleres, avhengig av typen av det opprinnelige proteinet. De er bestemt laboratorium i ulike perioder av tid og diagnostiserer ulike stadier av sykdommen.

Hvordan utføres anti-hepatitt C antistoff testing?

For å oppdage antistoffer mot hepatitt C, tas en person inn i laboratoriet for å ta venøst ​​blod. Denne studien er praktisk fordi den ikke krever noen tidligere forberedelser, med unntak av å avstå fra å spise 8 timer før prosedyren. I et sterilt testrør lagres individets blod, etter at metoden med enzymbundet immunosorbentanalyse (ELISA), basert på antigen-antistoff-forbindelsen, er det påvist de tilsvarende immunglobuliner.

Indikasjoner for diagnose:

• forstyrrelser i leveren, pasientklager;
• økning i leverfunksjonsindikatorer i biokjemisk analyse - transaminaser og bilirubinfraksjoner;
• preoperativ undersøkelse;
• graviditetsplanlegging;
• tvilsomme ultralyddata, diagnose av bukhuleorganene, spesielt leveren.

Men ofte finnes det antistoffer av hepatitt C i blodet ved et uhell ved undersøkelse av en gravid kvinne eller en planlagt operasjon. For en person er denne informasjonen i mange tilfeller et sjokk. Men ikke panikk.

Det er en rekke tilfeller hvor både falsk-negative og falsk-positive diagnostiske resultater er sannsynlig. Derfor anbefales det, etter samråd med en spesialist, å gjenta den tvilsomme analysen.

Hvis det oppdages antistoffer mot hepatitt C, er det ikke verdt å tune inn det verste. Det er nødvendig å søke råd fra en spesialist og gjennomføre ytterligere undersøkelser.

Typer antistoffer mot hepatitt C

Avhengig av antigenet de dannes til, er antistoffer for hepatitt C delt inn i grupper.

Anti-HCV IgG-klasse G antistoffer mot hepatitt C-virus

Dette er den viktigste typen antistoff som er registrert for å diagnostisere infeksjon ved første screening hos pasienter. "Disse hepatitt C markørene, hva er det?" Enhver pasient vil spørre legen.

Hvis disse antistoffene til hepatitt C er positive, betyr det at immunsystemet har møtt dette viruset før, og en svak form av sykdommen kan være til stede uten et levende klinisk bilde. Ved prøvetaking er det ingen aktiv replikering av viruset.

Deteksjon av data om immunoglobuliner i humant blod er årsaken til ytterligere undersøkelse (påvisning av RNA i patogenet av hepatitt C).

Anti-HCV-kjerne IgM-klasse M-antistoffer mot HCV-nukleære proteiner

Denne typen markører begynner å skille seg ut umiddelbart etter at patogenet har kommet inn i menneskekroppen. Laboratoriet kan spores en måned etter infeksjonen. Hvis det oppdages antistoffer mot hepatitt C i klasse M, diagnostiseres den akutte fasen. Mengden av disse antistoffene øker ved tidspunktet for svekkelse av immunsystemet og aktiveringen av viruset under kronisk prosess av sykdommen.

Med en reduksjon i aktiviteten av patogenet og overgangen av sykdommen til kronisk form, kan denne typen antistoffer slutte å bli diagnostisert i blodet under undersøkelsen.

Anti-HCV totalt - totale antistoffer mot hepatitt C (IgG og IgM)

I praktiske situasjoner blir det ofte referert til denne typen forskning. Hepatitt C virus totale antistoffer er deteksjon av begge klasser av markører, både M og G. Denne analysen blir informativ etter akkumulering av den første klassen av antistoffer, det vil si 3-6 uker etter infeksjonen. To måneder senere, etter denne dato, blir klasse G-immunoglobuliner aktivt produsert. De er bestemt i blodet av en syk person hele livet eller til eliminering av viruset.

Totale antistoffer mot hepatitt C er en universell metode for primær screening av sykdommen en måned etter infeksjon av en person.

Anti-HCV NS - antistoffer mot ikke-strukturelle proteiner av HCV

Ovennevnte markører tilhørte de strukturelle proteinholdige forbindelser av patogenet av hepatitt C. Men det er en klasse av proteiner som kalles ikke-strukturelle. Det er også mulig å diagnostisere pasientens sykdom. Dette er NS3, NS4, NS5 grupper.

Antistoffer mot NS3-elementer oppdages i første fase. De karakteriserer det primære samspillet med patogenet og tjener som en uavhengig indikator for tilstedeværelsen av infeksjon. Langvarig bevaring av disse titrene i et stort volum kan være en indikator på økt risiko for at infeksjonen blir kronisk.

Antistoffer mot elementene NS4 og NS5 finnes i sykdommens senere perioder. Den første som indikerer nivået av leverskade, det andre - på lanseringen av kroniske infeksjonsmekanismer. En reduksjon i titrene på begge indikatorene vil være et positivt tegn på utstedelsen av remisjon.

I praksis sjekkes tilstedeværelsen av ikke-strukturelle hepatitt C antistoffer i blodet sjelden, da dette øker studiekostnaden betydelig. Oftere brukes kjerneantistoffer mot hepatitt C til å studere levertilstanden.

Andre markører av hepatitt C

I medisinsk praksis er det flere andre indikatorer som dømmer tilstedeværelsen av hepatitt C-virus hos en pasient.

HCV-RNA - Hepatitt C Virus RNA

Kausjonsmiddelet for hepatitt C-RNA - som derfor er mulig, er det mulig ved PCR-metode med revers transkripsjon å utføre deteksjon av genet av patogenet i blodet eller biomaterialet tatt fra en leverbiopsi.

Disse testsystemene er svært sensitive og kan oppdage enda en partikkel av viruset i materialet.

På denne måten er det ikke bare mulig å diagnostisere sykdommen, men også å bestemme sin type, som bidrar til å utvikle en plan for fremtidig behandling.

Antistoffer mot hepatitt C: dekodingsanalyse

Hvis en pasient har mottatt resultatene av en analyse for deteksjon av hepatitt C av ELISA, kan han kanskje lure på - hepatitt C antistoffer, hva er det? Og hva viser de?

I studien av biomaterialet for hepatitt C blir det ikke registrert totale antistoffer normalt.

Tenk på eksemplene på ELISA-tester for hepatitt C og deres tolkning:

"HEPATITIS C VIRUS: antigener av viruset og responsen av immunsystemet til mikroorganismen til dem. Informasjon-metodisk guide Novosibirsk UDC 616.36-002.14: 578.891] -078.33 Hepatitt C-virus :. "

Virus HEPATITIS C:

virusantigener og reaksjon

på dem immunforsvaret

Hepatitt C-virus: antigener av viruset og responsen til immunforsvarets immunsystem:

informasjon og metodologisk håndbok / L.I. Nikolaev.

- Novosibirsk: "Vector-Best", 2009. 78 s.

Håndboken beskriver den nåværende forståelsen av molekylærbiologien til hepatitt C-viruset (HCV), dets antigener og immunforsvaret til makroorganismen når den er smittet med dette viruset. Forskjellene i spesifikk humoral immunitet hos mennesker med akutt og kronisk hepatitt C, mønstre av endringer i innholdet av antivirale immunglobuliner under naturlig akutte og kroniske infeksjoner, samt egenskapene til spesifikk humoral immunitet hos barn med markører for HCV-infeksjon vurderes.

Håndboken er ment for ansatte i biologiske og medisinske forskningsinstitutter, for ansatte i medisinske og diagnostiske sentre og studenter på doktorgradsutdanning.

LI Nikolaeva - Doctor of Biological Sciences, en ledende forsker ved Forskningsinstituttet for Virologi. DI Ivanovsky RAMS.

Publisert i forfatterens utgave.

© Nikolaev, L.I., 2009 © JSC "Vector-Best", 2009

LISTE OVER FORKORTELSER

aco-aminosyrerest (er) ALAT - alaninaminotransferase AIC - antigenpresentative celler ASAT - aspartataminotransferase kDa - kilodalton LDL - lipoproteiner med lav densitet VLDL - lipoproteiner med svært lav tetthet MCA - monoklonale antistoffer MHC - major histocompatibility complex NTO - ikke-oversatt region OGS - stopp første hepatitt C RT-PCR - revers transkripsjon polymerasekjedereaksjon HPV - psevdovirusnye partikler PCR - polymerase chain reaction CHC - kronisk hepatitt C TCL - T-hjelper-lymfocytter kunne CTL - cytotoksiske T-lymfocytter EPR - endoplasmatiske retirulum

INNHOLD

Kapittel 1. HEPATITISK VIRUS

1.1. Organiseringen av genomet av viruset

1.2. Virion struktur

Kapittel 2. HOVED ANTIGENSER AV VIRUSHEPATITISK C.

2.1. Struktur, funksjon og epitoper av skallglykoproteiner

2.2. Nukleokapsid antigen

2.3. Egenskaper av NS2-proteinet

2.4. Struktur, funksjon og epitoper av NS3-proteinet.

2.5. NS4a og NS4b polypeptider og deres determinanter. 35

2.6. Biologisk betydning og epitoper av proteinene NS5a og NS5b

Kapittel 3. ROLEN AV IMMUNESYSTEMET I BEGRENSNING HCV INFEKSJON

3.1. De viktigste faktorene i immunsystemet som påvirker eliminering av viruset i den akutte fasen av infeksjon. _

3.2. T-celle responsens rolle i hepatitt C

3.3. Humoral respons på hepatitt C antigener. 49 3.3.1. Spesifikke antistoffer i den akutte fasen av infeksjon. _ 3.3.2. Spesifikk humoral immunitet i naturlig forlengelse av kronisk hepatitt C. 55.3.3. HCV-spesifikk humoral immunitet hos personer som har hatt en akutt infeksjon med utvinning

3.3.4. Spesifikke humorale immuniteter hos barn med markører av HCV-infeksjon

INNLEDNING

For tiden, i Russland, som i de fleste land, er det en ugunstig epidemiologisk situasjon med hensyn til parenteral viral hepatitt [1-3]. Det forventes at innen 2015-2020 Antallet infiserte mennesker over hele verden vil doble [2, 3]. Siden 2001 har det i vårt land vært en tendens til en reduksjon i forekomsten av akutt hepatitt C (GHS) [1, 4]. Etter 2004 begynte en nedgang i påvisning av personer med kronisk hepatitt C (CHC) [5, 6].

Men blant barn frem til 2006 var det en økning i antall pasienter med kronisk hepatitt C [1, 5, 6]. Ifølge eksperter er 1,4-2,4% av innbyggerne i Den Russiske Federasjon smittet med hepatitt C-viruset (HCV), og flertallet av disse menneskene har allerede en kronisk form for infeksjon [7, 8]. For CHC kjennetegnes av en progressiv kurs som fører til dannelse av levercirrhose (opptil 30%), primært hepatocellulært karcinom (opptil 15%) og ekstrahepatiske manifestasjoner (opptil 74%) [9, 10].

Til tross for en intensiv studie av HCV-infeksjon har det ennå ikke vært mulig å fastslå årsaken til den hyppige utviklingen av infeksjonens kroniske form, for å identifisere egenskapene til immunresponsen som forårsaker naturlig eliminering av viruset i den akutte fasen av infeksjonen, og også for å skape en forebyggende vaksine. Det er kjent at HCV-antigener er i stand til å indusere B- og T-cellespons, som hos 15-25% av personer med akutt hepatitt C er tilstrekkelig til å eliminere viruset [2, 11]. Men oftest blir den akutte fasen av infeksjonen kronisk mot en mer eller mindre uttalt adaptiv immunrespons [12, 13].

Hepatitt C-virus er et unikt patogen som kan eliminere immunkontroll, skape nye genetiske og antigeniske varianter, forsinke dannelsen av T-hjelperen og T-killer responsen i akutt hepatitt C og forårsake re-infeksjon hos gjenvunnne personer. En intensiv studie av HCV-infeksjonen begynte etter identifisering av patogenet i 1989 og fulgte primært hovedmålet - opprettelsen av en forebyggende vaksine [14, 15]. Ved slutten av 1990-tallet, etter mislykkede forsøk på å utvikle en slik vaksine basert på rekombinante HCV-konvoluttproteiner, var fokuset på studien på antiviral immunitet på den spesifikke T-celle responsen.

Det skal bemerkes at studiet av beskyttende immunmekanismer i hepatitt C i stor grad hemmes av mangelen på en tilgjengelig laboratoriemodell for infeksjon, påvirker viruset bare mennesker og sjimpanser. Men som A. Basset og medforfattere viste, har sjimpanser infisert med viruset en mildere form for infeksjonen, og gjenoppretting skjer oftere enn hos mennesker [16].

Denne håndboken oppsummerer nåværende data på HCV antigener og diskuterer mulighetene for immunforsvaret til menneskekroppen under denne infeksjonen. Spesiell oppmerksomhet er gitt til den spesifikke humorale responsen, siden det var han som falt ut av feltet intensiv studie. Som utenlandske forskere noterer, skyldes dette hovedsakelig mangel på tilgjengelige metoder for å analysere antistoffer mot separate (individuelle) HCV antigener [17]. Siden 1998 har immunoferment test systemer blitt produsert i vårt land for å analysere immunoglobuliner for individuelle HCV antigener, som har gjort det mulig for innenlands spesialister å få verdifull informasjon om funksjonene i humoral respons på virale proteiner.

6 Kapittel 1. HEPATITIS C VIRUS

1.1. Organisasjon av virusgenomet I 1989-1990 ble det mulig, ved å utvikle molekylære genetiske metoder, kloning og isolering av HCV-genomet, og da selve viruset, som tidligere var spådd, ble mulig [14, 15, 18, 19]. Egenskapene ved organisasjonen av HCV-genomet gjorde det mulig å inkludere det i familien Flaviviridae i det nye slekt Hepacivirus, hvis medlemmer senere ble andre virus [15, 20, 21]. HCV-genomet er representert ved enkeltstrenget RNA, som har en positiv polaritet, og inneholder ca. 9400-9600 nukleotidrester. Den er preget av en unik åpen leseramme, korte 5- og 3-terminale utranslaterte regioner (UTR), og områder med høy mutasjonsrate [21, 22].

En åpen leseramme koder for en enkeltproteinforløper, kalt et polyprotein, som består av 3008-3037 aminosyrerester (aco) [23]. Som et resultat av co-og post-translasjonell proteolytisk spaltning av polyproteinet og bearbeiding av produkter dannes strukturelle og ikke-strukturelle proteiner. Oppsettet for virale antigener i polyproteinet, virkningsstedene for proteaser og graden av homologi mellom de forskjellige isolatene av viruset er presentert i fig. 1 [24].

På grunn av det genetiske mangfoldet av HCV tidlig på 1990-tallet var det vanskelig å klassifisere isolatene. I 1994 ved II International Conference on Hepatitis C og Related Virus ble det inngått enighet om å basere klassifiseringen av viruset på regionen av genomet som koder for NS5b-proteinet [25]. Som et resultat ble 6 genotyper og ca. 80 subtyper av HCV isolert.

(5-NTO) * (3-NTO) 92% 81% 55% 65% 57% 70% 65% 66% 70% 26% Fig. 1. Skjema for lokalisering av virale antigener i polyproteinet [24]. Virkningsstedene for cellulære proteaser er indikert med pilene over, for serinproteasen av HCV - nedenfra. Regionen spaltet av NS2 / NS3 viral protease er merket med en stjerne.

Nedenfor er andelen av homologi mellom virusisolater, tatt hensyn til NTO.

Hovedgenotypene er homologe ved 65-70%, subtyper (subtyper) ved 77-80%, og genetiske varianter innen ett isolat ved 95-97%. Senere i 2005 klarte en ekspertgruppe HCV-klassifiseringen [26]. Det anbefales å holde begrepet "genotype" i stedet for "Clyde" foreslått av enkelte forskere. Når du skriver virusisoler, bør kjernen / E1, NS5b-genomområdet regnes, og nukleotidsekvensen for hele virus-RNA skal bestemmes dersom rekombination er mistanke [27]. Det har blitt foreslått å klassifisere alle HCV-isolater som er kjent for dato i seks genotyper, og å vurdere genotyper 7-10 introdusert av enkelte forskere som undertyper.

Den mest konserverte regionen HCV RNA er 5-terminal NTO - ca 92% homologi [22]. Takket være denne konservative regionen ble det mulig å oppdage viralt RNA i forskjellige isolater ved hjelp av metoden for RT-PCR (revers transkripsjons-polymerasekjedereaksjon) [28, 29]. I en infisert organisme eksisterer HCV som et sett av genetisk heterogene, men nært beslektede varianter, kalt kvasi-arter, hvor forskjellene i nukleotidsekvensen utgjør noen få prosent [30].

Under infeksjonsprosessen blir viruset utsatt for et immuntrykk: Noen varianter av HCV fjernes av vertsimmunsystemet, mens andre oppstår [31, 32]. Nye varianter av viruset oppstår på grunn av fraværet av HCV RNA-polymerase RNA-polymerase, korrigering av 3-5-eksonukleaseaktivitet [33]. Derfor elimineres feil som oppstår under replikering av virus-RNA.

De fleste endringene i nukleotidsekvensen av HCV RNA finnes i de såkalte synonyme stedene, mutasjoner der ikke påvirker virusets biologisk viktige egenskaper. Sammenligning av synonymiske nettsteder gjør det mulig å angi avviket mellom matchede varianter av viruset. I studien av HCV-isolater isolert i forskjellige territorier ble det således funnet at penetrasjonen av viruset i den menneskelige befolkning trolig fant sted for tusen år siden [34, 35].

Det første elementet i HCV-genomet, den 5-terminale UTR, består av 341 nukleotidrester og utfører viktige biologiske funksjoner. Denne regionen gir interaksjonen av viralt RNA med 40S-underenheten av ribosomet, som danner en kompleks struktur av bindingsstedet, referert til i den engelske forkortelsen IRES (indre ribosom-inngangssted) [36]. IRES HCV har en kompleks romlig struktur (figur 2) [37, 38].

- 480 60- 140-440-5-500

Fig. 2. Ordningen med den sekundære strukturen til IRES med de fire hoveddomenene (I - IV), pseudo node, hoved (1) og ytterligere (2) kodoner er gitt med små modifikasjoner fra artikkelen D.M. Forton et al. [38].

Etter binding av IRES av HCV til 40S-underenheten av ribosomet, begynner dannelsen av et aktivt translasjonskompleks og oversettelse av virusgenomet via en cap-uavhengig mekanisme [37, 39]. For å starte oversettelse, brukes AUG-kodonen i posisjon 342 (figur 2). Det har blitt fastslått at samspillet mellom virus-RNA og 40S-underenheten av ribosomet i sistnevnte fører til komplekse konformasjonsendringer, noe som er en unik prosess [40].

For translasjon av HCV-genomet er de vanlige (kanoniske) cellulære initieringsfaktorene eIF2 og eIF3 nødvendige. Da den aktive komplekset dannes translasjonell langsomt, er den første oversettelseshastigheten lav, men det øker interaksjonen mellom pluss tråd RNA noncanonical celleaktivator proteiner, slik som antigen La, heterogen kjerne ribonukleoprotein L, og ribosomalt protein rpS5 flere uidentifiserte cellulære protein [41-44 ].

Evnen til IRES av HCV å binde seg til ribosomet kan hemme noen cellulære proteiner, peptider og vitamin B12 [45-49].

Korte RNAer som er komplementære til IRES, kalt kort forstyrrende RNA, binder til det og stopper oversettelsen av virusgenomet [50]. Det er vist at den antivirale effekten av alfa-, beta- og gammainterferoner også manifesterer seg på nivået av IRES-mediert oversettelse [51]. HCV har vist seg å ha vevsspesifikke forskjeller i strukturen til IRES [38, 52, 53]. Det er mulig at dette er en av måtene for å sikre virusets vedholdenhet i cellene i mange vev.

I prosessen med replikasjon av HCV-genomet, blir RNA dannet med negativ polaritet, kalt den negative kjeden av RNA. Det er ustabilt og brytes ned av cellulære enzymer (nesten 60% i 30 minutter) [54]. I en infisert celle er forholdet mellom pluss og minus kjeder av RNA 10: 1 [55]. For effektiv replikasjon av virusgenomet er det nødvendig med et cellulært protein PTB (polypyrimidinkanalbindende protein) som binder polypyrimidin-RNA-systemet [56]. I modelleksperimenter ble det funnet at ca. 1000 eksemplarer av pluss-kjeder av RNA og ca. 100 eksemplarer av negative kjeder av RNA dannes i en infisert celle per dag [57].

Det endelige elementet av genomet, den 3-terminale UTR, er involvert i initiering av replikasjon (initieringsstedet er lokalisert i den negative kjeden av RNA), i reguleringen av translasjon og stabilisering av genomisk RNA [41, 59-61]. I strukturen til den 3-terminale UTR er det tre elementer:

1) en kort seksjon med en variabel sekvens bestående av 40 nukleotidrester, 2) en polyuridin-kanal som inneholder 36 eller flere uridinrester, og 3) en unik konservativ region av X bestående av 98 nukleotider [60]. Region X har en kompleks sekundær struktur der en lang og to korte hårnåler utmerker seg [61]. Det er blitt fastslått at denne regionen er direkte involvert i dannelsen av et replikativt kompleks, regulering av oversettelse initiering og replikering [41, 62, 63].

1.2. Strukturen av virionet I tidlige forsøk med HCV filtrering gjennom filtre med forskjellige pore diameter har vist seg at et virion-størrelse på 30 til 60 nm, som faller sammen med data fra elektronmikroskopi-analyse av virus i biologiske prøver [64, 65]. På begynnelsen av 1990-tallet ble RNA-holdige partikler isolert fra blodserumet hos mennesker med hepatitt C, som i løpet av gradient-ultracentrifugering ble konsentrert i fem soner i tetthetområdet 0,95-1,21 g / ml [66-68]. Hver av disse sonene ble brukt til å infisere sjimpanser [68]. Og det viste seg at sonen med en tetthet på 0,95-1,10 g / ml hadde maksimal smitteevne. Denne uvanlige lave tettheten av virale partikler er forklart av sammensetningen av HCV med serumdensitetslipoproteiner (LDL) og meget lav tetthet (VLDL) [19, 66].

Lipoproteiner er sfæriske partikler dannet av et monolag av fosfolipider med kolesterol inneslutninger og apolipoproteiner B og E, partiklens indre kavitet er fylt med triglyserider [69]. Hovedfunksjonen til lipoproteiner er levering av triglyserider og kolesterol til forskjellige celler. Syntese av lipoproteiner forekommer i endoplasmatisk pensjonering (EPR) av hepatocytter, hvor de formentlig interagerer med protein-lipidhylsteret av HCV, danner et kompleks [70]. Nettstedene til HCV-skallet som er ansvarlig for dannelsen av viruskomplekset med LDL / VLDL er ennå ikke blitt fastslått. Dette komplekset kalles lipoviruspartikler. Virions i komplekset er beskyttet mot virus-nøytraliserende antistoffer og kan trenge inn i hepatocytter ved hjelp av reseptoren for LDL [68]. Omtrent 75% av lipoproteiner som sirkulerer i blodet, går tilbake til hepatocytter gjennom en spesiell reseptor for LDL; resten kommer inn i hepatocytter forskjellig. Det har blitt fastslått at rundt 20% av virioner ikke er assosiert med serumlipoproteiner [71].

Undersøkelse av motstanden av HCV til organiske løsningsmidler, A.M. Prins og kollegaer viste at viruset har en lipid-proteinmembran som dannes av vertscellelipidene og overflateproteiner av viruset [72]. I de senere år ble strukturen av HCV raffinert ved bruk av høyoppløselig elektronmikroskopisk analyse av leverbiopsier hos pasienter med hepatitt C og kunstige viruslignende partikler (HPV). HPV'er dannes etter ekspresjon av et fragment av HCV-genomet (kalt et replikon) i forskjellige vektorer. Vesikulær stomatittvirus, vaksiniavirus og baculovirus ble brukt som vektorer [73-75]. Når inkorporert inn i genomet til en retrovirus (HIV eller leukemi-virus fra mus) en nukleotidsekvens som koder for kappeproteinene til HCV, i stand til å motta psevdovirusnye partikler (HPV), i et skall som inneholdt E1 og E2-proteiner med HCV, og alle andre elementer av partiklene er retrovirale [76, 77 ]. Bruken av HPV lette studiet av morfologi og samling av HCV, samt studiet av egenskapene til proteiner. Spesielt ble dimensjonene av virionen bestemt, hvis diameter var 50 nm, hvilket tilsvarer moderne data oppnådd i studien av det native virus isolert fra pasienter med hepatitt C [78, 79].

På fig. 3 viser elektronmikrografen til HPV oppnådd ved bruk av et transmisjonselektronmikroskop [79].

Fig. 3. Elektronmikrografi med negativ kontrast av HPV [79].

Nederst til venstre, med høyere forstørrelse, vises en enkelt virion med T-formet utragende overflateproteiner.

Under HCV-konvolutten ligger nukleokapsiden, som dannes av kjernen (kjernen) proteinet og inneholder viralt RNA (figur 4). Nukleokapsidets størrelse, som bestemt ved elektronmikroskopisk analyse av uformede viruspartikler, er 33-40 nm [74].

Hittil har det ikke vært mulig å isolere HCV i en mengde som er tilstrekkelig for den detaljerte studien, enten fra syke mennesker eller fra sjimpanser. Dette skyldes virusets lave innhold, dets heterogenitet, samt evnen til å danne komplekser med antistoffer og blod lipoproteiner. Den første rapporten om dyrking av HCV i transplanterbare cellekulturer ble laget av P.G. Deryabin og medforfattere i 1997 [81]. I 2005 publiserte fire grupper av forskere eksperimentelle data om uttrykket av viruset i transplanterte cellekulturer med produksjon av smittsomme viruspartikler [82-85].

Morfogenese av HCV utføres i membranene i endoplasmatisk pensjon, Golgi-apparatets vakuoler og cytoplasma av cellen. Strukturelle proteiner av viruset spaltes fra polyproteinet av cellulære enzymer (signalpeptidaser og peptidpeptidaser). Kjerneproteinet forblir på den cytoplasmatiske overflate av EPR og i lipoplastene i cytoplasmaen, og konvoluttproteinene trer delvis inn i EPR's indre hulrom.

I endoplasmatisk retikulum danner E1- og E2-proteiene et kompleks og gjennomgår behandling, som sannsynligvis slutter i Golgis sekretoriske vakuoler. Nukleokapsid etter pakking av RNA er dekket med et skall, og viruset ekstruderes i ESR-cisterner. Basert på resultatene av analysen av leverbiopsiprøver hos pasienter med CHCV. V. Falcon og medforfattere foreslo at sluttfasen av virusmorfogenese forekommer i cytoplasmens EPR-lignende vesikulære strukturer [86]. Dannede viruspartikler forlater cellen som en del av sekretoriske vakuoler [87].

Graden av dannelse av virioner hos pasienter med kronisk HCV-infeksjon kan nå 1012 partikler per dag, og halveringstiden for virioner i blodet er ca. 3 timer [88].

Kapittel 2. HOVED ANTIGENER AV VIRUSHEPATITISEN MED HØYRE HCV-proteiner er konvoluttproteinene E1 og E2, nukleokapsiden og ikke-strukturelle proteiner NS2, NS3, NS4a, NS4b, NS5a, NS5b.

I tillegg til disse blir små polypeptider også overført fra virusgenomet: p7-peptidet, F-proteinet og et dårlig studert polypeptid med en molekylvekt på ca. 8 kDa [89].

De siste to mindre proteiner syntetiseres som et resultat av å lese genetisk informasjon fra ytterligere initierende kodoner lokalisert i regionen av genomet som koder for kjerneproteinet [22]. Det er blitt fastslått at et lite studert polypeptid med en molekylvekt på ca. 8 kDa er lest fra kodon 2 (se figur 2). Arrangementet av HCV-proteiner i EPR-membranen er vist i fig. 5.

P7-peptid, også kalt HCV-viroporin, danner heptamerer som danner en kation-spesifikk kanal, hvis betydning i virusets biologi ennå ikke er fullt utklart [91]. Det antas at han er involvert i de tidlige stadiene av morfogenese av viruset. Effekten av p7-peptidet på HCVs smittsomme egenskaper har nylig blitt vist [92].

Protein F syntetiseres ved å skifte leserammen av den genetiske koden med en nukleotidrest (et nytt initierende kodon starter fra den 341. nukleotidrest, se figur 2) og har

Hule EPR Figur. 5. Oppsettet av HCV-proteiner i EPR-membranen er gitt med små endringer fra artikkelen av B. Lindenbach og C.M. Ris [90].

konservativ aminosyresekvens [93, 94]. Det er blitt hypothesized at dette proteinet er involvert i utviklingen av vedvarende HCV-infeksjon [94, 95]. Kanskje det er en sammenheng mellom utseendet av protein F og leverstatatose i kronisk hepatitt C. Det har vist seg at antistoffer mot dette proteinet finnes bare hos 10% av pasientene med kronisk hepatitt C, men hvis de utvikler leverstatatose, øker gjenkjenningsgraden av disse antistoffene tre ganger [96]. For tiden pågår en intensiv studie av de biologiske funksjonene til mindre HCV-proteiner.

2.1. Struktur, funksjoner og epitoper av innhyllede glykoproteiner E1 (aco 192-383) og E2 (aco 384-746) innkapslingsproteiner er polyproteinfragmenter som ligger bak kjernekjernen (se figur 1) [97, 98]. Ifølge elektroforetisk analyse er molekylmassen av E1-proteinet 31 kDa, E2 - 70 kDa. Begge proteiner tilhører transmembrane proteiner og inneholder karbohydratrester [97]. Hovedfunksjonene til disse proteinene

- interaksjon med reseptorer og sikring av penetrasjon av det virale genomet i cytoplasma av cellen.

Biosyntesen av HCV-proteiner utføres på ribosomer assosiert med EPR. Takket være et spesielt translokasjonssignal kommer en stor del av polyproteinområdet som svarer til E1- og E2-proteinene inn i hulrommet til EPR-tankene. Der spaltet cellulære signalpeptidaser disse proteinene fra hverandre, så vel som fra kjerneproteinet [62, 97-99]. (Virkningsstedene for peptidaser er vist i figur 1.) Etter dette forblir HCV-konvoluttproteinene bundet til EPR-membraner på grunn av transmembranområder lokalisert i de COOH-terminale områdene av deres polypeptidkjeder [99,100].

Den komplekse prosessen med romlig folding eller folding av E1- og E2-proteinene begynner samtidig med oversettelsen og blir fullført etter det. Hovedstadiene av foldingen av E1-proteinet utføres i 1 time ved hjelp av den cellulære proteinet chaperon calnexin, som danner et kortsiktig kompleks med det [101, 102]. Med deltakelse av calnexin dannes fire disulfid (S-S) bindinger fra åtte cysteinrester av glykoproteinet El. Innen en time vil stabiliteten av E1 glykoproteinet stabiliseres [103].

Foldingen av E2-proteinet er lengre (ca. 4 timer) enn den for E1-proteinet.

Tydeligvis skyldes dette tilstedeværelsen av 18-20 cysteinrester i molekylet, som kan danne 9-10 disulfidbindinger, og den intensive glykosyleringen av E2-proteinet [104]. Romlig folding av E2-protein forekommer med deltagelse av calnexin og ikke-identifiserte chaperoner, så vel som E1-protein [103, 104].

Det antas at ved ferdigstillelsen dannes 8-9 disulfidbindinger innenfor grensene for ett polypeptid og en S-S-binding mellom to E2-E2-polypeptider i sitt E2-protein.

Komplekset av E1 - E2 skallproteiner dannes uten utseende av kovalente bindinger [103-105]. Støkiometrien til dette komplekset er ennå ikke fastslått, E2-proteinet er trolig den overveiende komponenten [104]. Proteinfolding og dannelse av et kompleks av skallglykoproteiner forekommer ikke alltid korrekt, feilkorrigerte E1- og E2-proteiner, så vel som deres komplekser, finnes i EPR-tanker i form av høymolekylære aggregater [105].

Under virkningen av cellulære enzymer i EPR-nettverket, glykosyleres E1- og E2-proteiner som danner den såkalte chitobiose-kjerne [97].

Glykosyleringsprosessen starter samtidig med folding av proteiner og ender i vakuolene i Golgi-apparatet. Glykosylering sikrer riktig romlig folding, dannelse av en bestemt antigenstruktur og utseendet av biologisk aktivitet i skallglykoproteiner. I tillegg, etter glykosylering, kan E1- og E2-proteinene utskilles fra cellene og er bedre beskyttet mot visse proteolytiske enzymer i cellen.

Begge HCV-glykoproteiner tilhører type I transmembranproteiner, som er preget av tilstedeværelsen av den NH2-terminale ectodomain (den del av proteinet som er eksponert fra lipid-bilaget av viruskappen) og den COOH-terminale transmembrane regionen. I E1- og E2-proteiner ble en eller to transmembranstrenger som er involvert i dannelsen av E1-E2-komplekset og beholdt glykoproteiner i lipid-bilaget av viruskappen funnet [106-108].

Nylig har forskere lagt stor vekt på å søke etter HCV-konvoluttglykoproteiner av et fusjonspeptid (fusjonspeptid), som kombinerer endosom lipid-bilayers og viruset. For HCV er det foreslått en modell (som allerede er delvis bekreftet) for penetrering i cellen i analogi med prosessegenskapen ved kryssbåren encefalittvirus. Ifølge denne modellen, ved kontakt av HCV med reseptoren, dannes et virus-reseptorkompleks som i form av endocytose vacuoler trenger inn i cellen (denne prosessen kalles også reseptormediert endocytose). I neste fase slår endocytosevakuolen sammen med endosomet (cytoplasmatisk vesikulær struktur av cellen), som er preget av lave pH-verdier. Under virkningen av det sure miljøet i endosomet gjennomgår overflate glykoproteinene av HCV konformasjonsendringer som fører til eksponering og inkorporering av fusjonspeptidet i endosomalmembranen. Denne prosessen utløser fusjonen av lipid-dobbeltlaget av viruset og endosommembranen, som slutter med frigjøring av HCV RNA i cytoplasma av cellen.

Så langt har det ikke blitt fastslått hvilken av de to HCV-konvoluttglykoproteiner fusjonspeptidet er lokalisert. Det er flere antagelser om lokaliseringen i E1-proteinet: på stedet med aminosyrerester 265-287, 272-281 eller 275-293 [107, 109]. Likheter ble funnet i den primære strukturen av det antatte peptidet av HCV subtype 1a fusjon (Aco 265-287) med lignende peptider i enkelte medlemmer av familien Flaviviridae (figur 6) [109].

I glykoproteinet E1 av HCV er fire N-glykosyleringssteder identifisert: disse er asparaginsyrer i posisjonene 196, 209, 234 og 305 [110-112]. Ved å bruke metoden for punktmutasjoner i regionen viral RNA som koder for E1-proteinet, var det mulig å vise at forsvinden av glykosyleringssteder i posisjon 209 og 234 ikke påvirker dannelsen av E1-E2-komplekset [110, 113]. Oligosakkaridrester

Fig. 6. Den primære strukturen til fusjonspeptidet i enkelte medlemmer av familien Flaviviridae [109].

TBE - tick-båret encefalittvirus, HLV-gul febervirus, WNE - japansk encefalittvirus, VDEN-dengue-virus, KUNV-Kunyan-virus, VNV-West Nile-virus. Aminosyrerester som er vanlige med HCV (2 glycin og 2 cystein) er understreket, aminosyrerester tilsvarende i deres fysisk-kjemiske egenskaper er uthevet i kursiv.

i stillinger 196 og 305 er nødvendig for riktig romlig folding av E1-proteinet, så vel som for dannelsen av E1-E2-komplekset av glykoproteiner. I tillegg har det blitt vist at karbohydratrester i posisjon 196 og 209 av E1-glykoproteinet er nødvendige for å bevare virusets infeksjonsevne [112].

På fig. 7 viser en hypotetisk modell for den rumlige foldingen av E1-proteinet, beregnet i henhold til proteomanalyse, datasimulering og komparativ analyse med konvoluttproteinet E av kryssbåren encefalittvirus.

Oligosakkaridkjeder av HCV-glykoproteiner blir oftest dannet av 6-9 mannoserester festet til to N-acetylglukosaminrester [114, 115]. Kun E2-protein har en mer kompleks type oligosakkarider med et mindre antall mannoserester, som delvis erstatter fukose, og N-acetylglukosaminrester er i terminalposisjonene til oligosakkaridkjeden [115].

I glykoprotein E2 ble 11 glykosyleringssteder funnet for asparaginsyrer i posisjonene 417 (1), 423 (2), 430 (3), 448 (4), 476 (5), 532 (6), 540 (7), 556 ), 576 (9), 623 (10) og 645 (11) [111, 112, 115].

Det ble vist at komplekset av glykoproteiner E1 - E2 ikke danner hvis

Fig. 7. Ordningen med den estimerte romlige strukturen av E1-proteinet er presentert i en lysmodifisering fra R.F. Garry og S. Dash [107].

Legend: sele - polypeptidkjede, sylindere - alfa helix, piler - beta struktur, tridents - oligosaccharidkjeder, svarte segmenter - disulfidbindinger.

ingen oligosakkaridkjede i posisjon 10 av HCV E2-protein.

Et virus taper sin smitteevne hvis E2-glykoproteinet ikke inneholder karbohydratrester i stillingene 1, 2, 4, 8, 10 og 11 [111]. I tillegg ble det funnet at oligosakkaridkjeder i stillinger 1, 6 og 11 er involvert i dannelsen av epitoper på hvilke nøytraliserende antistoffer dannes [108, 116].

Subtype 1a og 3a-virus har vist seg å variere i antall oligosakkaridkjeder i konvoluttproteinene [117]. I glykoprotein E2, i motsetning til E1-protein, er det modifiserte oligosakkaridrester i posisjonene 423 og 430 [115, 116].

Glykoprotein E2 er dårlig egnet til studier av fysisk-kjemiske metoder for å analysere proteinstrukturen, hovedsakelig på grunn av det store antall karbohydratrester. Overflasjonen av oligosakkaridkjeder i E2-glykoproteinet gjør det vanskelig å oppnå en proteinkrystall for røntgendiffraksjonanalyse og å utføre atommagnetisk resonans. Derfor ble det laget en sekundær strukturmodell for den forkortede formen (ectodomain) av E2 proteinet ved hjelp av dataprogrammer som forutsier proteinfolding og en komparativ analyse av skallproteinene fra familien Flaviviridae som allerede studerte [112]. Ektodomain er et fragment av E2-glykoproteinet (aco 384-660) uten dets transmembrane del, som har mange biologiske egenskaper iboende i fullstørrelses E2-proteinet. Det kan danne et kompleks med glykoprotein E1, interagere med monoklonale antistoffer mot konformasjonsepitoper av E2-proteinet, så vel som med heparinsulfat og noen cellulære reseptorer.

I denne romlige modellen av ectodomain av E2 glykoproteinet foreslått av A.T. Yagnik og medforfattere avslørte et lavt innhold av elementer i den sekundære strukturen (ca. 37%) og forekomsten av uordente steder [113]. Elementene i den sekundære strukturen er hovedsakelig representert av beta-foldede seksjoner og flere korte alfa-heliske fragmenter. Dette er den første og hittil den eneste modellen av glykoproteinet E2, som åpenbart reflekterer sin virkelige sekundære struktur med litt tilnærming. I lys av kompleksiteten og tvetydigheten til denne modellen er den ikke klart representert.

En av hovedtrekkene til den primære strukturen til E2-proteinet er tilstedeværelsen av seksjoner med ikke-konstant aminosyresekvens, som kalles variabel og hypervariabel [118, 119]. Tre steder med svært høy frekvens av aminosyresubstitusjoner ble funnet i E2-protein, disse er hypervariable regioner (HWR). Den første HVR er lokalisert i den NH2-terminale delen av E2-proteinet på stedet med aminosyrerester 384-411, den andre HWR - på stedet med rester 474-482 og den tredje, nylig oppdaget, på stedet med rester 431-466 eller 434-450 [120- 122].

Det er fastslått at den første HWR, til tross for høyfrekvensen av aminosyresubstitusjoner, alltid beholder total positiv ladning og stabil hydrofilitets / hydrofobicitetsprofil.

I tillegg er de fire aminosyrerester i posisjonene 385, 389, 406 og 409 meget konservative, dvs. De er svært vanlige i de studerte HCV-isolatene [123, 124]. Hele varianten av aminosyresekvensene til den første HWR kan reduseres til en konsensussekvens som består av de vanligste aminosyrerester i hver av de 27 stillingene (384-411) av denne delen av E2-proteinet [124, 125]. Den første HVRs biologiske rolle er å gi de første trinnene av HCV-sorption på celleoverflaten og å presentere "glidemålet" til immunsystemet, som dannes ved konstant å endre nye antigenvarianter av denne regionen av E2-proteinet [31, 123, 126].

Det er tegn på at den andre og tredje HVR er involvert i binding av HCV til celle reseptorer [121, 127].

På grunn av aminosyrevariabiliteten av alle tre hypervariable regioner i E2-glykoproteinet dannes såkalte fluktvarianter av viruset, dvs. de som det for øyeblikket ikke er noen immunrespons på.

En annen egenskap ved E2-skallproteinet er tilstedeværelsen av polypeptidkjedesteder som ligner på andre proteiner.

Dette fenomenet kalles molekylær mimicry. Således danner tolv konservative aminosyrerester (posisjon 660-671) av E2-proteinet PEHD-domenet identisk med fosforyleringsstedet i den ribosomale translationsinitieringsfaktor eIF2a [128]. På grunn av denne likheten kan HCV stoppe den antivirale effekten av IFN-alfa. Etter aktivering av interferon-alfa, bør protein kinase R fosforylere faktor eIF2a, som igjen fører til opphør av oversettelse av HCV RNA. Men E2-proteinet, ved hjelp av RephD-domenet, interagerer med proteinkinasen R i stedet for eIF2a-faktoren, og biosyntesen av virale proteiner fortsetter [129].

I den NH2-terminale delen av E2-proteinet ble molekylær mimicry funnet med områder av immunoglobulins lette og tunge kjeder og med en T-cellereceptor [118]. Det antas at denne strukturelle likheten kan være årsaken til utviklingen av autoimmune forstyrrelser hos pasienter infisert med HCV, slik som blandet cryoglobulinemi type II og B-celle ikke-Hodgkins lymfom [130].

Som nevnt ovenfor gir HCV-konvoluttproteinene vekselvirkning av viruset med cellulære reseptorer. Det har blitt fastslått at oligosakkaridrester av disse innhyllede glykoproteiner kan spille en nøkkelrolle i bindingen av viruset til dets potensielle reseptorer som DC-SIGN (CD209), L-SIGN (CD209L) og asialoglykoproteinreseptoren [117, 131, 132]. De to første potensielle reseptorene er type C-lektiner og fungerer som overflatemessige molekyler som gir cellulære kontakter mellom dendritiske, endotel- og T-celler. L-SIGN-reseptorer er tilstede på overflaten av endotelceller i sinusoider i leveren og lymfeknuter, og DC-SIGN er tilstede på overflaten av de dendritiske celler. Disse reseptorene inneholder en spesiell kalsiumavhengig karbohydratgenkjenningsregion av CRD (karbohydratgjenkjenningsdomene), som kan binde seg til karbohydratrester av E1- og E2-proteinene [117, 131]. Siden DC-SIGN og L-SIGN-reseptorene ikke finnes i hepatocytter, kan de ikke betraktes som hovedmålene for HCV. Disse reseptorene fanger opp, akkumulerer viruset og overfører det til T-celler og muligens til hepatocytter.

Asialoglykoproteinreseptoren er tilstede på overflaten av leverceller og sikrer penetrering av glykoproteiner i dem, som ikke har en sialinsyrerest i enden av karbohydratkjedene. Denne reseptoren er spesifikt forbundet med rekombinante El- og E2-proteiner, oppnådd ved å uttrykke de tilsvarende HCV-RNA-fragmenter i insektceller [132].

Det er blitt fastslått at det rekombinante E2-proteinet interagerer med en annen potensiell virusreceptor (eller ko-reseptor), transmembranproteinet CD81 [133]. Denne reseptoren er tilstede på overflaten av de fleste celler (unntatt erytro og blodplater) og er involvert i cellulære funksjoner assosiert med adhesjon, motilitet, aktivering av metabolisme og transformasjon. CD81 tilhører tetraspaninproteingruppen og har en karakteristisk struktur: 4 transmembranstrenger og store og små ekstracellulære sløyfer. Den store ekstracellulære sløyfen CD81 har blitt vist å binde spesifikt til det rekombinante virusproteinet E2 [133].

I modell A.T. Yagnik og medforfattere i denne interaksjonen deltar i to overflateområder av E2-proteinet med aco 474-494 og 522-551 [112]. Imidlertid ble det i en senere studie funnet at aminosyrerester av E2-proteinet i posisjonene 420, 527, 530 og 535 kommer i kontakt med den store sirkel av CD81 [134].

Eksperimenter med HPV, HPV og det native viruset fra serum hos pasienter med CHC bekreftet at CD81 er involvert i prosessen med HCV-penetrasjon i cellen, men bortsett fra det er det behov for et annet endocytosestimulerende protein [77, 78, 134]. Med CD81 og dette proteinet vil virioner som ikke er assosiert med lipoproteiner, komme inn i cellen, fordi kontakten til det virale glykoproteinet E2 og CD81 er nødvendig. Det er kjent at innholdet av slike virioner er ca. 20% (se avsnitt 1.2). Virioner som ikke er assosiert med lipoproteiner, kan komme inn i cellen langs denne banen, siden dannelsen av HCV-komplekset med dem forhindrer tilsynelatende kontakt av E2-glykoproteinet med CD81-reseptoren.

Opptil 80% av HCV er funnet i kroppen av infiserte mennesker i form av et kompleks med lipoproteiner (disse er såkalte lipoviruspartikler). Disse partiklene kommer inn i cellene ved hjelp av reseptoren for LDL (se avsnitt 1.2) og en annen SR-BI-reseptor (også kjent som Cla-1) [126]. SR-BI-reseptoren er funnet på overflaten av mange celler, men det høyeste innholdet er funnet i leveren og steroidogen vev. Hovedfunksjonen til denne reseptoren er å levere lipidene som utgjør høyt tetthet lipoproteinet i cellene. SR-BI-reseptoren refererer til transmembrane proteiner. Den har to membranstrenger, en stor ekstracellulær sløyfe og to korte cytoplasmiske steder i NH2- og COOH-terminale områder [135]. Det er blitt fastslått at den første HWR av det rekombinante E2-protein, HPV, og viruset som er oppnådd fra en cellekultur, kan bli assosiert med denne reseptoren [136-138]. Men HCV fra serum hos mennesker med hepatitt C, interagerer med SR-BI-reseptoren uten deltagelse av det første HWR- og E2-proteinet [118].

For å forklare dette fenomenet har det blitt foreslått at viruset kommer inn i cellen ved bruk av et multikomponent reseptorkompleks dannet av CD81 - SR-BI [77, 138].

Det er kjent at de negativt ladede karbohydratkjedene av overflate glykoproteiner av en celle kan tjene som de primære bindingssteder for forskjellige virus [139]. På grunn av denne prosessen øker virusinnholdet på celleoverflaten og sannsynligheten for interaksjon med en bestemt reseptor øker. Eksperimenter på binding av HCV til hepatomcellekulturer har vist at denne prosessen kan blokkeres av heparin og suramin, som har en negativ ladning [140]. Nettstedet som heparin binder spesifikt antas å være lokalisert i den første HVR av E2 glykoproteinet og / eller i sonen med AKO 559-614, hvor et høyt innhold av positivt ladede aminosyrerester ble påvist [112, 126]. I eksperimenter med pseudovirus HCV-partikler var det imidlertid ikke mulig å oppdage interaksjonen av E2-proteinet med heparin [141]. Åpenbart krever involvering av glukosaminoglykaner i den komplekse prosessen med HCV-inngang i cellen ytterligere studier.

Som studier har vist i det siste tiåret, har HCV en bred cellulær tropisme. Viruset replikerer i hepatocytter, perifere mononukleære celler og ascites, lymfe og monocytter [142-144], dendrittiske celler [52], 145, hematopoietiske forløperceller [146], [38] mikroglia kardiomyocytter [147], tarmepitelet [ 148], osteoblaster [149] og b-cellefollikler av lymfeknuter [150]. Dette er sannsynligvis hvorfor det er mer enn en reseptor for HCV.

Mye oppmerksomhet i studiet av skallproteiner er gitt til analysen av deres antigeniske og immunogene egenskaper, siden denne informasjonen er nødvendig for utvikling av hepatitt C-vaksiner.

Det er blitt fastslått at glykoproteiner E1 og E2 har høy immunogenicitet. Immunisering av sjimpanser med rekombinante hylsterproteiner ga således spesifikke antistoffer mot disse proteinene med en titer på 1/819200 [15]. Imidlertid er den humorale responsen til E1 og E2 virale glykoproteiner med den naturlige forløpet av akutt og kronisk hepatitt C svært svakere.

Publiserte data om identifisering av lineære B-epitoper i proteiner El og E2 er presentert i tabell. 1. For analyse av disse epitoper ble peptidscaning, fagvisning og monoklonale antistoffer anvendt. Metoden for peptidscaning er basert på bruk av syntetiske peptider som spenner over hele aminosyresekvensen av proteinet og bestemmer deres immunreaktivitet, dvs. evnen til å interagere med antistoffer fra pasienter med hepatitt C. For første gang ble denne studien av HCV-konvoluttproteiner utført i Chiron Corporation (USA) [151]. Senere ble i 1997 publisering av resultater av peptidskanning av glykoproteiner El og E2, hvor

unike sera fra kvinner smittet 17 år siden med et enkelt HCV-isolat som forurenset anti-D-immunoglobulin-legemidlet ble brukt [152].

Takket være innsatsen fra tre forskningsgrupper ledet av J. Dubuisson, M. Flint og A.H. Patel, bank murine og humane monoklonale antistoffer ble etablert (ICA) til HCV med hvilke kunne identifisere noen lineære og konformasjonelle B-epitoper skall E1 og E2-proteiner [79, 109, 153-155].

På fig. 8 viser utformingen av B-epitoper i E2-glykoproteinet, identifisert av ICA.

Av spesiell interesse er B-epitoper, bindingen av antistoffer som fører til nøytralisering av viruset. En slik nøytraliserende epitop ble detektert i den første HWR av E2-proteinet [156].

En annen epitop som nøytraliserer bindingen av et virus til en celle (den såkalte NOB-epitopen fra nøytralisering av binding) har

Fig. 8. Plassering av B-epitoper identifisert ved bruk av ICA i E2-protein.

Ordningen er gitt med små endringer i publikasjonene av R.F. Clayton et al. [79] og A.M. Owsianka et al. [155].

I toppen markerer rektangler ICA som gjenkjenner ectodomain av E2-proteinet, E2-proteinet i full størrelse i kombinasjon med E1- og E2-proteinet i HPV. Bunnen viser at ICA interagerer med ectodomain av E2-proteinet eller med fullstørrelses E2-proteinet i kombinasjon med E1-proteinet. I svart isoleres ICA som hemmer bindingen av CD81 ectodomain E2, full lengde E2 proteinet i kombinasjon med E1 og HPV. ICA hemmer binding av HPV til CD81 er markert i grått.

konformasjonsstrukturen i formasjonen som, ved antagelse, en gruppe av forfatterne involvert aminosyrerester 406-644 av E2-proteinsekvens [76, 156, 157] og, i henhold til andre - rester av sekvensene 414-443 og 490-519 [158 ].

Det er vist at en annen mer kompleks konformasjonell B-epitop, som ikke har nøytraliserende egenskaper, kan dannes av aminosyrerester fra 3 steder:

297-306 av E1-proteinet, 480-494 og 613-621 av E2-proteinet [167].

I E1- og E2-glykoproteiner er T-helper (CD4 +) og T-killer (CD8 +) epitoper identifisert (tabell 2).

Foreløpig er studier på lokalisering og struktur av B- og T-epitoper av HCV-konvoluttproteiner pågår. Informasjon om dette emnet finnes på nettstedet til Los Alamos National Laboratory (USA): http://hcv.lanl.gov.

* Hvis 20-ledd peptider ble brukt til å bestemme epitopen, så er det ingen presis lokalisering.

2.2. Nucleokapsid antigen Skjemaet for nukleokapsidproteinlokalisering (synonymer: kjerne, kjerne) i et polyprotein er vist i fig. 1. Dette proteinet er involvert i viktige stadier av virusmorfogenese: den danner den virale nukleokapsiden, initierer emballeringen av HCV RNA og samlingen av viruskuvertet [74, 178, 179].

Kjerneproteinet har trolig andre biologiske funksjoner. Således, i forskjellige modellforsøk viser at den kommuniserer med de regulatoriske proteinene og visse strukturelle elementer av cellen: Protein p53 [179], en første reseptor for tumor nekrose faktor [180] reseptor lymfotoksin-beta [181], transcriptional LZIP faktor [182 ], STAT3 protein (som forsterker transkripsjon signal) [183], heterogen kjerne ribonukleoprotein K [184] helikase DDX3 [185] cytoplasma triglyserid vesikler [186], mitokondrier [187] cytokeratin celler [188]. Corbeloc antas å være involvert i utviklingen av steatose og hepatocarcinogenese hos pasienter med kronisk hepatitt C [179, 186].

Nukleokapsidproteinet dannes først blant alle virale proteiner i biosynteseprosessen, det spaltes fra polyproteinet ved bruk av cellepeptidaser [190]. I den endelige proteolytiske hydrolysen av kjerneproteinet deltar den nylig oppdagede signalpeptidpeptidase SPP, som utfører en uvanlig intramembran spaltning [189, 190].

Behandlingen av nukleokapsidproteinet ledsages av overgangen av sin p23-form (193 ako) til p21 (173 aco) og fosforylering av serinrester på OH-gruppene [189]. Det spaltede området (174-193 aco) bærer translokasjonssignalet, på grunn av hvilket den NH2-terminale delen av E1-proteinet faller inne i EPR-tankene [191].

Den modne form av kjerneproteinet har en veldefinert amfipatisk struktur: en hydrofil NH2-terminal region og en hydrofob COOH-terminal region [192]. Følgelig er D1 (hydrofilt) domene og D2-domene (hydrofobe) isolert i proteinet. En lignende struktur er karakteristisk for nukleokapsidproteiner av Flaviviridae-familien. Noen ganger er et tredje domene (sentralt), som har et uvanlig høyt innhold av tryptofanrester, også isolert i kjerneproteinet [46].

Det hydrofile domenet D1 inneholder RNA-bindingsstedet, de viktigste konservative B-epitoper og fragmentet som er ansvarlig for dannelsen av kjerneproteindimeren [192]. Den funksjonelt aktive form av nukleokapsidproteinet er dannet av to polypeptidkjeder, dvs. Kjerneproteinet er en dimer dominert av alfa-helix strukturell organisasjon. I det hydrofobe domenet D2, som gir en forbindelse med membranene og lipidinneslutninger av cytoplasmaen, finner man amfipatiske alfa-helikser med uttalt hydrofile og hydrofobe overflater.

Blant alle virale proteiner kjennetegnes kjerneproteinet av det høyeste innholdet av konservative soner i primærstrukturen [193].

Oppsettet av de viktigste funksjonelt viktige områdene av nukleokapsidproteinet er vist i fig. 9. I disse viktige områder bør bemerkes region ankeret protein med 72 til 91 aminosyrerester som kommuniserer med kapselproteinet E1 [194] porsjon med residuer 69-104 nødvendig for å bevare infektivitet hos HCV [195] sone 65 rester -72, som sannsynligvis vil være i kontakt med p7-peptidet i de tidlige stadier av virusmorfogenese [195].

Ifølge elektronmikroskopidata er kjerneproteinet lokalisert i cellen på EPR-membraner, på lipidvesikler i cytoplasma, og også i kjernen. Overføringen av kjerneproteinet i cellekernen utføres ved hjelp av biparnin NLS cellulært transportprotein, som interagerer med en spesiell signalsekvens i kjerneproteinet [196].

Studien av nativ nukleokapsid fra serum og deres analoger oppnådd ved bruk av HCV replikoner viste at uavhengig av opprinnelsen har de en sedimenteringskoeffisient på ca. 100 S, flytende tetthet i gradient

Fig. 9. Oppsettet av de viktigste funksjonelt viktige stedene i nukleokapsidproteinet er gitt med små modifikasjoner fra C.L. Murray et al. [195].

På bunnen av sifrene merket antall aminosyrerester.

cesium er 1,28 g / ml og en diameter på 33-46 nm, bestemt ved bruk av et transmisjonsmikroskop [197, 198]. Ifølge elektronmikroskopisk analyse av leverbiopsiprøver av personer med kronisk hepatitt C har det blitt fastslått at størrelsen på virusnukleokapsidet i dette tilfellet svinger mer intensivt: fra 28 til 48 nm [198].

Kjerneprotein er et av de mest immunogene antigenene av HCV. Data på dets B- og T-epitoper er gitt i tabellen. 3 og 4.

Det skal bemerkes at B-epitoper av nukleokapsidproteinet er konsentrert hovedsakelig i det hydrofile domenet og konserverte områder.

2.3. Karakterisering av NS2-proteinet NS2-proteinet er et ikke-strukturelt HCV-protein, det ligger i polyproteinet etter p7-peptidet (se figur 1). NS2-proteinet har en molekylvekt på ca. 23 kDa, inneholder ikke karbohydratrester, og er forbundet med EPR-membraner [206, 207]. Den nøyaktige topografien av proteinet i membranen er ikke fastslått, det antas at det danner 3 transmembranstrenger (se figur 5) [90]. NS2 protein er dårlig løselig, så det er vanskelig å studere.

Den viktigste biologiske funksjonen til NS2-proteinet er eliminering av HCV serinprotease. For utførelsen danner NS2-proteinet et kompleks med et polyproteinsted tilsvarende NS3-proteinet [206, 208].

"Kazan (Volga region) Federal University Scientific Library. NI Lobachevsky. Ny bokoppføringer til fondets nasjonalbank fra 27. juni til 4. september 2015. Kazan. Registrert i RUSMARC-format ved hjelp av Ruslan AIS. Materialet er ordnet i systematisk rekkefølge av grener av kunnskap, innenfor seksjoner - i alfabetet av forfattere og titler. Omslaget, abstrakt og innholdet i publikasjonen finnes i den elektroniske katalogen. Ukjent tittel. Materialer fra den russiske konferansen s. "

"RUSSISK FEDERASJONS MINISTERIE OG Vitenskapsdepartementet Forbunds statsbudsjett institusjon for høyere yrkesutdanning" TYUMEN STATE UNIVERSITY "Institutt for biologi Institutt for økologi og genetikk O.N. Zhigileva ØKOLOGISK PARASITOLOGI Opplærings- og metodisk kompleks. Arbeidsprogram for studenter i retning av opplæring 06.03.01 Biologi (grunnnivå), treningsprofiler "Bioekologi", heltidsutdanning Tyumen State. "

"RUSSISK FEDERASJONS MINISTERI FOR UTDANNELSE OG VIDENSKAP Statlig utdanningsinstitusjon for høyere faglig utdanning TYUMENSTAT UNIVERSITET Institutt for biologi Institutt for zoologi og evolusjonær økologi av dyr A.V. Tolstikov, V.A. Stolbov ENTOMOLOGI Opplærings- og metodisk kompleks. Arbeidsprogram for studenter i opplæringsretning 35.03.10 Landskapsarkitektur, treningsprofil Dekorativ planteavl og planteskoler, heltidsutdanning Tyumen. "

"RUSSISK FEDERASJONS MINISTERIE OG VITENSKAP Føderasjonens statsbudsjett institutt for høyere faglig utdanning" TYUMEN STATE UNIVERSITY "Institutt for biologi Institutt for anatomi og human og dyrfysiologi Lepunova O.N. MENNESK ANATOMI OG MORFOLOGI Opplærings-metodisk kompleks. Arbeidsprogram for studenter 06.03.01 områder av "Biologi", profiler: botanikk, zoologi, fysiologi, genetikk, bioekologi, biokjemi; form for utdanning. "

"MUNICIPAL EDUCATION" BEGANITSKY DISTRICT "MUNICIPAL BUDGET EDUCATIONAL INSTITUTION" BERGANIKA SECONDARY SCHOOL "Avtalt om godkjenning av metodisk råd av skoledirektør Protokoll nr. 1 av 27. august 2014 _ / S.К. Mikheev Ordre nr. 71 av 29. august 201 ARBEIDSPROGRAM OM OPPDATERINGSMÅLSYSTEMET BIOLOGI grunnleggende alminnelig utdanning, klasse 6 for skoleåret 2014-2015 Lærer Vasilyeva Irina Bezhanitsy 2014 1. Det klargjørende arbeidsprogrammet i biologi overholder den føderale. "

"REGISTRERING AV LANDBRUK AV DEN RUSSISKE FEDERASJONEN Forbunds statsbudsjettutdanningsinstitusjon for høyere yrkesutdanning" KUBAN STATE AGRARIAN UNIVERSITY "Institutt for mikrobiologi, epizootologi og virologi METODOLOGISKE INSTRUKSJONER om temaet: trening 36.06.01 Veterinær- og husdyrteknologi, fokus: "Veterinær mikrobiologi, virologi. "

"KALUGA-REGIONS MINISTERIE FOR REGIONAL REGION Statlig budsjettinstitusjon for supplerende utdanning i Kaluga-regionen" Regionalt økologisk og biologisk senter "Tilleggsutdanning for generell opplæringsprogram" Naturens lagringsrom "for studenter i grunnskolealderen (7-11 år) gjennomføringsperiode -2 år Kompilatorer: lærere i tilleggsutdanning : Timoshina E.V. Glebova S.V. Kaluga Innholdsfortolkning Forklarende merknad Aktualitet av programmet: Mål og mål for programmet. "

" TEORETISKE MEKANIKKER "Retningslinjer for praktiske øvelser i 2. år av fakultet for medisin og biologi i 1. semester i akademisk år 2012-2013 spesialitet 201000 - Biotekniske systemer og teknologier 1. Innledende leksjon. Bevegelsesligninger og ligninger i et punkts bane. Løs de følgende oppgavene: 1. I henhold til bevegelsens ligningsligning finner du ligningene i bane i koordinatform og angir bevegelsesretningen i figuren: 1) x = 3t -5, y = 4 - 2t; 2) x = 2t, y = 8t2; 3) x = 3t2, y = 4t2; "

"Http: / / www.bio.bsu.by/zoology/shalapyonok_en.phtml Page 1 Skriv ut nettside for fakultetet for biologi utskriftsversjon eller returnere Shalapenok Elena Semenovna Personalia ved Institutt for zoologi ved Det biologiske fakultetets biologi. PERSONALE AV DOKUMENTET ZOOLOGI Undervisningsansvar Pedagogisk støttepersonale Forskningsassistenter Doktorgradsstudenter og universitetsstudenter Elena Shalapenok (1931-2010) Lektor i zoologi, Ph.D., lektor i vitrysk. "

"UDDANNELSES- OG Vitenskapsdepartementet av den russiske føderasjon PENZA STATE UNIVERSITY Jeg godtar: rektor _ A.D. Gulyakov " 201. Antall intrauniversitetsregistrering HOVED PROFESSIONELL UTDANNELSESPROGRAM FOR HØYERE UTDANNING Opplæringsområde 020400 Biologi Opplæringsprofil Biokjemi Kvalifikasjon (grad) av kandidat Bachelor Studieform på heltid Penza, 2013 INNHOLD 1 ALMINDELIGE BESTEMMELSER. 1.1 Grunnleggende faglig utdanningsprogram for høyere utdanning. "

"Kommentar til arbeidsprogrammet om emnet" biologi "for studieåret 2014-2015 Grad 9 Arbeidsprogrammets formål er å skape forhold for planlegging, organisering og styring av pedagogisk prosess i fagbiologi til avsnittet" Grunnleggende om generell biologi ". Arbeidsprogrammet inneholder følgende seksjoner: Seksjon 1. Forklarende merknad, som spesifiserer de generelle målene for generell utdanning, tatt i betraktning spesifikasjonene av fagfaget. Arbeidsprogrammet er basert på hovedprogrammets omtrentlige program. "

"RUSSISK FEDERASJONS MINISTERIE OG Vitenskapsdepartementet Forbunds statsbudsjett institusjon for høyere yrkesutdanning" TYUMEN STATE UNIVERSITY "Institutt for biologi Institutt for økologi og genetikk O.N. Zhigileva BASER OF ECOLOGY Opplærings- og metodisk kompleks. Arbeidsprogram for studenter i retning av opplæring 42.03.02 Journalistikk (grunnnivå), treningsprofiler "Print", "Television journalism", "Convergent journalism". "

"RUSSISK FEDERASJONS MINISTERI FOR UTDANNELSE OG VIDENSKAP Føderal statsbudsjett institusjon for høyere faglig utdanning TYUMENSTAT UNIVERSITET Institutt for biologi Institutt for botanikk, bioteknologi og landskapsarkitektur Marina Semenova Biologisk grunnlag for sammensetning med planter Pedagogisk metodisk kompleks Arbeidsprogram for studenter i veibeskrivelse 35.03.10 Landskapsarkitekturprofil Landskapsarbeid og landskap. "

"RUSSISK FEDERATIONS UDDANNELSE OG VIDENSKAP Føderasjonsuniversitet Utdanningsinstitusjon for høyere faglig utdanning TYUMENSTAT UNIVERSITET Institutt for biologi Institutt for botanikk, bioteknologi og landskapsarkitektur Belozerova A.A. Arbeidsprogram for studenter i veibeskrivelse 35.03.10 Landskapsarkitektur av heltidsutdanningsprofil Dekorativ ornamental og. "

"RUSSISK FEDERATIONS UDDANNELSE OG VIDENSKAP Føderal statsbudsjett institutt for høyere faglig utdanning" TYUMEN STATE UNIVERSITY "Institutt Institutt for dyre- og dyrøkologi Økologi OA Aleshina GRUNNLEGGENDE OPPLYSNINGS GENERELL BIOLOGISK PRAKSIS: ZOOOLOGI AV INVERTILITETET Opplærings- og metodisk kompleks. Arbeidsprogram for studenter i opplæringsretning 06.03.01 - "Biologi" (akademisk bachelor), treningsprofil. "

"RUSSISK FEDERASJONS MINISTERIE OG VITENSKAP Føderasjonens statsbudsjett institutt for høyere faglig utdanning" TYUMEN STATE UNIVERSITY "Institutt for biologi Institutt for anatomi og human og dyrfysiologi Lepunova O.N. MOLECULAR BIOLOGY OF VIRUSES AND OTHER INTRACELLULAR PARASITES Utdannelses-metodisk kompleks. Arbeidsprogram for studenter 06.03.01 retning "Biologi", profil: biokjemi; studieform - heltid tyumen. "

"Federal Medical and Biological Agency" FEDERAL STATE BUDGETARY INSTITUTION OF HEALTH. "

"RUSSISK FEDERATIONS UDDANNELSE OG VIDENSKAP Føderasjonsstatlig utdanningsinstitusjon for høyere faglig utdanning TYUMENSTAT UNIVERSITET Institutt for biologi Institutt for botanikk, bioteknologi og landskapsarkitektur S.P. Arefyev SKATTERING Opplærings- og metodisk kompleks. Arbeidsprogram for studenter i retningen 35.03.10 Landskapsarkitektur av heltidsutdanning av profil Dekorativ planteavl og planteskoler Tyumen State University. "

"Far Eastern State University V.V. Isaeva SYNERGETIK FOR BIOLOGIER Initialkurs Studieveiledning Vladivostok Studieveiledningen er basert på en forelesningsforelesning for studenter fra Cellebiologi-avdelingen i Fjernøsten Statens Universitet, lest av forfatteren i flere år, og er en forenklet og illustrert beskrivelse av de grunnleggende ideene om ikke-lineær vitenskap (ofte kalt synergi), inkludert teorier om bifurcations og. "

"MUNICIPAL BUDGETARY EDUCATIONAL INSTITUTION" SECONDARY SCHOOL №18 "Betraktes på møtet" Avtalt " Godkjent "ShMO Natural Sciences Vicedirektør Direktør MBOU" Secondary School No. 18 "Leader T.I. Antonovich på UVR LA Ishutin V.N. Nikitina Protokol nr. 1 datert 23. mai 2014. EDUCATIONAL PROGRAM BIOLOGY 5 9 CLASS (GEF) Abakan Forklarende merknad Dette biologiprogrammet er basert på Federal State Educational Standard. "