Kvalitativ og kvantitativ analyse av PCR for hepatitt C: negativ, positiv, transkripsjon

Share Tweet Pin it

Hepatitt C er en viral leversykdom forårsaket av flavivirus HCV (fra det engelske ordet hepatitt C-virus), hvis struktur inneholder et ribonukleinsyremolekyl (RNA). RNA bærer virusets genetiske kode. Dens tilstedeværelse tillater analyse av PCR for hepatitt C.

Faren for HCV for en person ligger i det faktum at det såkalte serologiske vinduet (tiden mellom infeksjon og utseendet av en reaksjon fra immunsystemet) kan være ganske lang - fra flere uker til seks måneder.

Det registrerer ikke infeksjon og starter behandling i tide.

Avhengig av organismens individuelle egenskaper kan bæreren av HCV manifestere seg i en akutt form, så vel som oppstå som en kronisk sykdom som vil kreve en lang og kostbar behandling. Når antistoffer mot HCV oppdages, utføres en rekke laboratorietester, inkludert PCR for hepatitt C. Denne testen er utført for alle personer i hvis blodantistoffer mot HCV er funnet.

Hva er PCR-analyse?

Laboratorieanalyse av PCR for hepatitt C - studiet av biologisk materiale for å oppdage nærvær av flavavirus.

Polymerasekjedereaksjonen (som forkortelsen står for) viser den kvantitative verdien av kroppens virale lesjon, dets kvalitative egenskaper, samt genotypen av viruset som inneholder RNA.

På grunnlag av dem, samt på grunnlag av ytterligere analyser, bestemmes metoden og varigheten av behandlingen, samt den epidemiologiske faktoren (grad av risiko for overføring til en annen bærer).

Hva er Hepatitt C RNA-analyse?

Hepatitt C-PCR kalles også RNA-analyse (HCV RNA), fordi Flavaviruset inneholder en RNA-partikkel med en virionsstørrelse på 30-60 nm. En av egenskapene til denne mikroorganismen er en høy tilbøyelighet til mutasjoner.

Hver av virusens underarter (genotyper) har en annen motstand, noe som medfører forskjellige behandlingsmetoder og arten av den videre prognosen for pasienten.

Biologisk materiale (venøst ​​blod) er gitt på tom mage og er som regel undersøkt med realtids-PCR-metoden (svært sensitiv sanntidsdiagnostikk med en lavere deteksjonsgrense på 15 IE / ml ved bruk av lukkede automatiserte systemer).

Det finnes andre tester, for eksempel COBAS AMPLICOR med en følsomhet på 50-100 IE / ml. For enhver laboratorietest er terskelen for følsomhet viktig, dvs. Reagens evne til å oppdage minimal konsentrasjon av virus i biologisk materiale.

Typer av analyse for hepatitt C ved PCR

Hepatitt C PCR inneholder tre viktige komponenter:

  • kvalitativ analyse;
  • kvantitativ analyse;
  • genotyping.

Disse tester tillater deg å bestemme arten av viremia, samt patogenens genetiske egenskaper. Avhengig av diagnostikkens følsomhet utføres studien en gang, og noen ganger utføres en andre test med et mer sensitivt reagens for å bekrefte eller finjustere resultatene.

Høykvalitets PCR av hepatitt C

Hepatitt C PCR-analyse kvalitativ er et annet vanlig navn for analysen av polymerasekjedereaksjonen. Standard følsomhet av testen, som gjør det mulig å oppdage tilstedeværelsen av virale lesjoner, ligger i området 10-500 IE / ml.

En negativ PCR-analyse for hepatitt C viser at viruskonsentrasjonen i pasientens blod er under følsomhetstrømen til diagnosesystemet.

Hvis høyverdig PCR ga svaret "ikke oppdaget", så for etterfølgende behandling er det viktig å finne ut av terskelen for følsomheten til reagenset.

Proteinfraksjoner til flavavirus fremkommer mye senere.

Hepatitt C Kvantitativ PCR

PCR hepatitt C kvantitativ er en indikator på virusbelastning, som reflekterer nivået av RNA-konsentrasjon av flavavirus i kroppen. Dette er en indikator som viser hvor mange fragmenter av virus RNA som finnes i kubikkcentimeter av blod. Resultatene av PCR av hepatitt C RNA i en kvantitativ test i det konvensjonelle systemet er indikert i internasjonale enheter per milliliter (IE / ml) og kan registreres på forskjellige måter, for eksempel 1,7 millioner eller 1,700,000 IE / ml.

Kvantitativ PCR-diagnostikk av hepatitt C er foreskrevet for pasienter før behandling med antiviralbehandling, og i uke 12 i behandling, for å evaluere resultatene av den valgte metoden for behandling av HCV. Viral belastning gjør det mulig å bestemme tre viktige indikatorer for sykdommen:

  • smittsomhet, dvs. graden av risiko for virusoverføring fra en bærer til en annen (jo høyere konsentrasjonen av flavavirus-RNA, desto større er sannsynligheten for å infisere en annen person, for eksempel gjennom seksuell kontakt);
  • metode og effektivitet av behandlingen;
  • Varighet og prognose for antiviral terapi (jo høyere viral belastning, jo lenger behandling varer).

Kvantitativ PCR-diagnostikk av hepatitt C er avhengig av type laboratorietest og terskelen for følsomheten. Den nedre grensen til normen anses å være indikatoren opptil 600.000 IE / ml, gjennomsnittsverdien er innenfor 600.000-700.000 IE / ml. Resultater på 800.000 IE / ml og over anses høye nivåer av RNA-holdig virus.

genotyping

På grunn av den høye mutasjonsaktiviteten til HCV i naturen, er det viktig å identifisere hvilken virusgenotype som er i pasientens blod ved testing. Totalt har 11 genotyper av hepatitt C-viruset blitt registrert på planeten, som inkluderer mange underarter (undertyper). På territoriet i Russland distribuert 1,2 og 3.

Hepatitt C PCR RNA sammen med genotyping er en svært viktig del av analysen siden gjør det mulig for legen å bestemme motstanden (motstanden) av viruset, velg de aktuelle legemidlene og foreskrive et behandlingsforløp.

Genotyping lar deg også indirekte bestemme tilstanden i leveren. For eksempel er 3 genotypen av HCV ofte ledsaget av steatosis, hvor fett akkumuleres i organets celler.

En blodprøve for PCR for hepatitt C bør produsere en figur som bestemmer genotypen. Laboratorie svar kan si "ikke skrevet" - og det betyr at et virus er i humant blod som ikke oppdages av testsystemet. Dette kan tyde på at genotypen ikke er typisk for et gitt geografisk område. I dette tilfellet bør du gjenta analysen med en høyere følsomhet for diagnosesystemet.

Dekoding av PCR-analyse for hepatitt C

Testen for hepatitt C PCR kvantitativ dekryptering kan baseres på dataene ovenfor. Når man får resultater fra laboratorietester, skrives vanligvis følgende data:

  • "Found" / "not found" (høy kvalitet PCR for hepatitt C);
  • antall RNA-holdige fraksjoner, for eksempel 831,680 ME / ml (kvantitativ PCR-analyse);
  • figuren som bestemmer genotypen for HCV, for eksempel - 1, 2, 3, 4;
  • Navnet på testen er oftest sanntid.

Det viktigste ved å dekode analysen av PCR for hepatitt C er andre leddet, som viser virusbelastningen, som bestemmer prognosen, metoden og varigheten av behandlingen.

Hvis PCR-testen for hepatitt C er negativ, og ELISA er positiv - hva betyr dette?

For å dekode laboratorietester, er det viktig å kontakte en hepatolog eller en smittsom sykdomsspesialist som vil forklare informasjonen som er oppnådd i henhold til type diagnostisk system og dens følsomhetsgrense. I medisinsk praksis er det mange data om blodprøver som kan villede en person uten medisinsk utdanning.

For eksempel, hvis testen for hepatitt C-PCR er negativ, og ELISA er positiv, kan det bety at det ikke er noen HCV i pasientens blod for øyeblikket, men tidligere har han hatt en akutt form for hepatitt C. Det antas at en positiv enzymbundet immunosorbentanalyse (ELISA) viser at Det er antistoffer i blodet som er produsert etter invasjonen av viruset tidligere. Men i moderne medisinsk praksis anses ELISA-analyse å være utilstrekkelig pålitelig og gir ofte ujevne resultater, slik at leger bruker det som en primær screening. Ved diagnostisering av en sykdom styres spesialister nettopp ved PCR-test.

Nyttig video

Følgende video gir en svært detaljert og interessant beskrivelse av essensen av PCR-metoden, hvordan analysen utføres:

konklusjon

For analyse av PCR for hepatitt C, er vanligvis venøs blod tatt. Ofte er det et dobbelt inntak av biologisk materiale - for ELISA, og direkte for PCR-test. For riktige testresultater kreves det i samsvar med grunnleggende regler for laboratorieprøvetaking av biologisk materiale:

  • Blod for analyse er gitt i første halvdel av dagen på tom mage;
  • mellom måltid og blodprøver bør ta minst 8 timer;
  • alkohol og stekt mat bør også utelukkes før testen utføres;
  • i løpet av dagen før du donerer blod, er det nødvendig å unngå høy fysisk anstrengelse.

Blodtestresultater er vanligvis klare neste dag.

Diagnose av hepatitt C-virus

Hepatitt C-virus (HCV) er et RNA-inneholdende virus fra Flaviviridae-familien. Denne infeksjonen er i stand til å multiplisere i blodceller (monocytter, nøytrofiler, B-lymfocytter og makrofager), og påvirker også cellene i leveren selv - hepatocyttene. På grunn av den høye grad av mutasjonsaktivitet, er denne typen hepatitt i stand til å unngå eksponering for det menneskelige immunsystemet.

Det er 11 genotyper og massen av subtyper av et slikt virus, som varierer i graden av leverskade og påvirker varigheten av behandlingen av hepatitt. Et slikt utvalg av hepatitt C krever forskjellige metoder for antiviral terapi. For eksempel må hepatitt 1 og 4 genotyper behandles i 48 uker, og for et behandlingsforløp mot virus av 2. og 3. type, kan det ta bare 24 uker.

Etter at den raske testen for hepatitt C ga et positivt resultat, utføres PCR-analyse for å detektere RNA av viruset i blodprøver.

PCR-diagnostikk

Polymeraskjedereaksjon (PCR) er en eksperimentell teknikk for å detektere virus. En slik analyse av hepatitt C kan signifikant øke konsentrasjonen av noen DNA-fragmenter eller RNA av viruset i de overførte prøver. Dette gjør det mulig å gjenkjenne dem og til og med telle tallet.

Denne hepatitt C-testen utføres i henhold til følgende fremgangsmåte:

  1. En blodprøve (genetisk materiale) som kan inneholde det ønskede hepatittgenet, settes inn i et reagensrør. Spesielle stoffer, primere, er plassert på den, de er korte lengdesegmenter fra det ønskede genet, som kjemisk syntetiseres. DNA eller RNA-polymerase er også tilsatt dette fartøyet, det er i stand til å bygge opp kjeder av nukleinsyre som er helt identiske med originalen. Et utvalg av frie nukleotider, som er spesielle byggematerialer for DNA og RNA, tilsettes sammensetningen, og en av dem inneholder små partikler av radioaktivt fosfor.
  2. Den resulterende blanding oppvarmes opprinnelig til 95 grader, hvilket resulterer i at begge DNA-helixene sammenflettet i normal tilstand blir viklet.
  3. For å fortsette analysen, blir stoffet avkjølt, hvorpå primrene fester til ønsket del av hepatittvirusgenomet, som forhindrer DNA i å dannes i en dobbelt helix. Når blandingen avkjøles, ser polymerasen etter enkle kjeder av nukleotider. Under vedlegget av dette enzymet glir det langs DNA-kjeden (som en blokk langs tauet), og på dobbeltspiralen er det ikke i stand til å "arbeide", for dette formål oppvarmes blandingen.
  4. For å forlenge analysen utføres reheat, noe som igjen fører til separasjon av nukleotidkjedene. Når slike PCR-sykluser utføres i prøven, øker antallet av de ønskede hepatittgenene i en geometrisk andel, og de gjenværende genetiske materialer blir bare dannet (dannet) i et lineært mønster.
  5. For å fullføre studien, rengjøres løsningen fra resterende nukleotidpartikler. De separeres ved elektroforese, med separasjon av parametrene for molekylvekten til DNA-kjedene. Slike tester for hepatitt C ved bruk av PCR lar deg bestemme om de ønskede virusgenene er tilstede i prøven eller ikke.

Fordelen med denne testen er den høye terskelen av PCR-reaksjonen. En slik teknikk for diagnose, ideelt sett, kreves av bare ett virusgenom for hele prøven.

I tillegg er denne PCR helt spesifikk. I hvert av gener er det en unik sekvens av nukleotider som, som et fingeravtrykk, ikke kan gjentas hvor som helst. For denne analysen på hepatitt C, blir primere syntetisert slik at de helt svarer til de unike områdene av genene som er søkt, som ingen annen sekvens har.

Denne teknikken lar deg også analysere for hepatitt C og bestemme dem, og bidra til å etablere den endelige diagnosen.

En slik laboratorieanalyse gir informasjon mer enn bare nærvær eller fravær av RNA av hepatitt C-virus eller en annen type i blodprøver. Ved å bestemme parameteren for radioaktiv stråling, er det mulig å identifisere hvor mye av det ønskede genetiske materialet som opprinnelig var i prøven under studien. Dette lar deg bestemme parameteren for den såkalte virale belastningen - konsentrasjonen av partikler av RNA av hepatitt i et bestemt volum.

Kvalitativ analyse av PCR

Denne analysen tillater å bestemme tilstedeværelsen av hepatitt B-virus i blodprøver. Det bør utføres for alle mennesker som har funnet antistoffer mot hepatitt.

Som et resultat av slik forskning kan det bare være to verdier:

  • "Oppdaget". Et slikt positivt testresultat tolkes som følger: I den analyserte prøven fra biologisk materiale ble det funnet fragmenter av RNA fra hepatittviruset. Det følger av dette at det var det faktum at pasienten var infisert med dette viruset. Dette kan indikere at patogen hepatitt multipliserer i kroppen og smitter nye celler, som ødelegger leveren.
  • "Ikke oppdaget." Dette resultatet sier at i en prøve som ble analysert i dette laboratoriet, ble det ikke påvist noen RNA-fragmenter som er spesifikke for hepatitt C-viruset. Det er også en mulighet for at konsentrasjonen av RNA i patogenviruset i prøven var så liten at testen ikke kunne oppdage det.. I slike tilfeller er det sagt at konsentrasjonsnivået er under sensitivitetstrømen for analysen.

En slik test kan også være falsk positiv eller falsk-negativ på grunn av forurensning av biomaterialet eller tilstedeværelsen i prøver av bestemte stoffer som reagerer med de kjemiske komponenter som er nødvendige for analysen.

Det bør understrekes at i den akutte fasen av hepatitt C kan en kvalitativ studie ved hjelp av PCR-metoden oppdage RNA etter 1-2 uker fra organismens øyeblikk. Dette betyr at sykdommen kan oppdages lenge før utseendet av dets ytre symptomer eller utseendet av antistoffer mot hepatitt i kroppen.

Blodprøvetaking (fra en vene) utføres fortrinnsvis på tom mage.

PCR kvantitativ analyse

Ved hjelp av denne analysen bestemmer du nivået av konsentrasjon av hepatittviruset i pasienten (viral belastning). En slik test må bestås for å estimere mengden av virus-RNA per enhet av et visst volum.

Dekryptere tester for hepatitt C, utført i henhold til denne metoden, kan ha følgende resultater:

  • Kvantitativ indikator (i tall)

Viruskoncentrasjonen (mengden) er gitt i numeriske termer. For dette brukes ulike måleenheter: enten IE / ml (internasjonal enhet per milliliter) eller kopier / ml (antall kopier av virus-RNA per milliliter). I gjennomsnitt tilsvarer 1 IE / ml 4 kopier / ml, da forskjellige testsystemer har forskjellige konverteringsfaktorer for slike enheter.

De lave viralbelastningsverdiene anses å være mindre enn 400.000 IE / ml, og 8.000.000 IE / ml er høy.

En slik kvantitativ vurdering gjør det mulig å bestemme infeksjonsnivået av sykdommen ("smittsomhet") hos pasienten. Jo mer denne indikatoren for analyse, desto større er sannsynligheten for risikoen for overføring av patogenet til andre mennesker (gjennom seksuell kontakt eller vertikalt).

Denne dommen betyr at den kvantitative metoden ikke kunne oppdage hepatitt-RNA, men selve viruset er tilstede i kroppen, bare i svært lave konsentrasjoner. Dette ble bekreftet ved ytterligere kvalitativ analyse av PCR, og ved sitt positive resultat vitner det til forekomsten av hepatitt.

  • Resultat ikke oppdaget

    Denne positive tolkningen av analysen antyder at den kvantitative testen selv i en blodprøve ikke kunne oppdage bestemte RNA-partikler av hepatitt C-viruset.

  • En kvantitativ analyse av PCR utført ved ulike perioder med antiviral terapi (1., 4., 12. og 24. uke) tillater oss å bedømme effektiviteten av behandlingen og foreta de nødvendige endringene.

    Analyse spesifisitet

    Denne testen må bestås for å bestemme de forskjellige genotypene av hepatitt C. For tiden er det 11 genotyper av dette patogenet og mange subtyper. I vårt land er genotypene av hepatitt C av 1., 2. og 3. arten vanlige. I laboratorier kan de identifisere ulike subtyper av disse artene: 1a, 1b, 2a, 2b eller 3, 4, 5, 6 genotyper med ulike modifikasjoner av subtyper. For alle disse hepatittene er spesifisiteten av bestemmelsen 100%.

    Spesifisering av modifikasjonen av genotypen gjør det mulig å velge riktig behandling. Tilstedeværelsen av en bestemt type genotype hos en pasient indikerer ikke at sykdommen er lettere eller mer komplisert, de er bare varianter av hepatittviruset, og ikke mer.

    I de tilfellene når genotypen av viruset ikke kan isoleres i laboratoriet, kan resultatet gis: "Ikke skrevet. Ble undersøkt genotyper: slik-og-slik "(for eksempel 1a, 2c, 3av). Denne dekodningen antyder at i dette laboratoriet var det ingen passende reagenser som kunne bestemme genotypen av hepatittviruset. Studien ble testet for virus, dataene i listen, men deres overensstemmelse med RNA-prøver ble ikke identifisert.

    For å få en endelig diagnose er bare en type analyse utilstrekkelig. Hver av testene kan gi et falskt positivt resultat. For å nøyaktig bestemme type hepatitt og omfanget av skade på denne infeksjonen i kroppen, utfør en omfattende studie. Dette er gjort en leverbiopsi og testing av enzymer: ALT, ASAT, samt alkalisk fosfatase og LDH. En bilirubin-test og protrombinindeksanalyse kan også utføres.

    Bare et sett av slike tester og laboratorietester, med en generell analyse av pasientens tilstand, vil bidra til å bestemme tilstedeværelsen av hepatitt i kroppen, dens form, samt alvorlighetsgraden. Legen kan avgjøre videre behandling og gjøre en mulig prognose for pasienten.

    HCV, RNA-kvantifisert [sanntids-PCR]

    En studie for å identifisere årsaksmedlet til hepatitt C (HCV), hvor forekomsten av virusets genetiske materiale (RNA) og dets kvantitet (virusbelastning) i en blodprøve bestemmes ved bruk av realtids-polymerasekjedereaksjonsmetoden (RT-PCR).

    HCV RNA kan detekteres ved en konsentrasjon som ligger utenfor den nedre grensen for det lineære konsentrasjonsområdet. Linjært konsentrasjonsområde er området der du nøyaktig kan beregne antall kopier av patogenet. For denne analysen er det lineære området for HCV DNA-konsentrasjoner bestemt av detekteringsforsterkeren 7,5 × 10 2 - 1,0 x 108 kopier / ml prøve.

    Russiske synonymer

    Hepatitt C-virus (HCV), kvantitativ bestemmelse av RNA.

    Engelsk synonymer

    Hepatitt C-virus RNA, kvantitativ realtid PCR, blod, HCV viral belastning, hepatitt C virus RNA Quant.

    Forskningsmetode

    Realtids revers transkriptase-polymerasekjedereaksjon.

    Hva biomateriale kan brukes til forskning?

    Hvordan forbereder du på studien?

    Ikke røyk i 30 minutter før du donerer blod.

    Generell informasjon om studien

    Hepatitt C-virus (HCV) er et RNA-virus fra familien Flaviviridae som infiserer leveren. Det er i stand til å formere seg i blodceller (nøytrofiler, monocytter og makrofager, B-lymfocytter) og forårsake kryoglobulinemi, Sjogrens sykdom og B-celle lymfoproliferative sykdommer. HCV, på grunn av sin høye mutasjonsaktivitet, er i stand til å unngå eksponering for immunsystemets beskyttende mekanismer. Det er 6 genotyper og mange subtyper av viruset, som har forskjellige betydninger for å forutsi utviklingen av sykdommen og effektiviteten av antiviral terapi.

    Hovedmodus for overføring er gjennom blodet (legemidler for blod og plasma transfusjoner, donororganer, ikke-sterile sprøyter, nåler, verktøy for tatovering, piercing). Infeksjon gjennom seksuell kontakt og barnet fra moren under fødsel er sannsynlig, men dette skjer sjelden.

    Akutt viral hepatitt karakteriseres vanligvis av et asymptomatisk forløb og forblir uoppdaget i de fleste tilfeller. Bare i 15% av smittede er sykdommen akutt, med kvalme, kroppssmerter, mangel på appetitt og vekttap (sjelden ledsaget av gulsott). 60-85% av infiserte mennesker utvikler kronisk infeksjon, noe som er 15 ganger høyere enn hyppigheten av kronisk infeksjon i hepatitt B. Kronisk viral hepatitt C forekommer med en økning i leverenzymer og en dårlig manifestasjon av symptomer. Hos 20-30% av pasientene fører sykdommen til levercirrhose, noe som øker risikoen for leversvikt og hepatocellulær karsinom.

    Påvisning av HCV RNA indikerer multiplikasjon av viruset i kroppen og er en metode for diagnostisering av sykdommen. Det genetiske materialet til viruset kan detekteres ved PCR 10-12 dager etter infeksjon. I denne perioden er spesifikke antistoffer, som dannes flere måneder etter infeksjon, fraværende, og de biokjemiske indikatorene for leverfunksjon er innenfor referanseverdier.

    Gjennom PCR oppdages virus RNA enten kvalitativt eller kvantitativt. På grunn av den kvalitative metoden er tilstedeværelsen av hepatitt C-viruset og dets aktive reproduksjon bekreftet. Kvantitativ bestemmelse av virusbelastningen med hensyn til HCV-genotypen lar deg overvåke pågående behandling og forutsi sykdomsforløpet.

    Effektiviteten av behandlingen vurderes av mengden av RNA før og under behandlingen. Vanligvis reduseres virusbelastningen av blodet flere ganger i de tre første månedene av vellykket behandling. Med effektiv behandling reduseres viremia med to størrelsesordninger i de første 4-12 ukers behandling, og etter behandlingsforløpet blir det genetiske materialet av viruset ikke detektert i blodet. Fraværet av en reduksjon i viremia etter 12 uker fra starten av behandlingen indikerer at den er ineffektiv. Det ble anbefalt å utføre analysen før behandlingsstart, 4., 12. og 24. behandlingsuke og 24 uker etter avsluttet kurs. Varigheten av behandlingen og frekvensen av kvantifisering av Hepatitt C-virus-RNA avhenger av virusgenotypen og graden av leverskade.

    Hva brukes forskning til?

    • For å bekrefte diagnosen "viral hepatitt C".
    • Å forutsi løpet av viral hepatitt C.
    • Å overvåke antiviral terapi og bestemme videre behandlingsteknikker.

    Når er en studie planlagt?

    • Med kvalitativ deteksjon av RNA av hepatitt C.
    • Ved akutt og kronisk viral hepatitt C.
    • Når blandet hepatitt.
    • Ved planlegging, under og etter slutten av antiviral terapi.

    Hva betyr resultatene?

    • Ikke oppdaget - ingen hepatitt C-virus-RNA oppdaget eller en verdi under følsomhetsgrensen for metoden (200 kopier / ml = 400 IE / ml).
    • kopier / ml (IE / ml) - Hepatitt C-virus RNA oppdaget. Lav viremi (den mest gunstige prognosen for sykdommen og effektiviteten av behandlingen).
    • > 2 * 10 ^ 6 kopier / ml (> 4 * 10 ^ 6 IE / ml) - Hepatitt C-virus RNA er detektert. Høy viremi.
    • > 1,0 * 10 ^ 8 kopier / ml (> 2 * 10 ^ 8 IE / ml) - Hepatitt C-virus RNA detekteres ved en konsentrasjon over det lineære konsentrasjonsområdet.

    Det lineære området for RNA-konsentrasjoner av hepatitt C-viruset, bestemt av detekteringsforsterkeren, er 7,5 * 10 ^ 2 - 1,0 * 10 ^ 8 kopier / ml (1,5 * 10 ^ 3-2 * 10 ^ 8 IE / ml).

    Hva kan påvirke resultatet?

    Upålitelige resultater kan fås ved å:

    • biomaterialkontaminering;
    • Tilstedeværelsen i prøven av inhibitorer - kjemiske og proteinstoffer som påvirker de ulike komponentene i PCR;
    • Tilstedeværelsen av heparin i blodet.

    Viktige notater

    • Nivået på viral blodbelastning indikerer ikke graden av skade på leveren og alvorlighetsgraden av sykdommen. For deres vurdering er det nødvendig å undersøke biokjemiske parametere og biopsi-materialer.
    • Ved planlegging av behandling er det svært viktig å bestemme genotypen for hepatitt C-viruset.

    Anbefales også

    Hvem gjør studien?

    litteratur

    • Zh.I. Vozianova Infeksiøse og parasittiske sykdommer: I 3 tonn. - K.: Helse, 2000. - Vol. 1.: 600-690.
    • Kiskun A.A. Immunologiske og serologiske studier i klinisk praksis. - M.: OOO MIA, 2006. - 471-476 s.
    • Harrisons prinsipper for internmedisin. 16. utg. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.
    • Lerat H, Rumin S, Habersetzer F, og andre. In vivo-celler i hepatitt C-viruset er det påvirkninger av viral belastning, viral genotype og cellefenotype. Blood. 1998 15 mai, 91 (10): 3841-9.PMID: 9573022.
    • Revie D, Salahuddin SZ. Humane celletyper for hepatitt C-virusreplikasjon in vivo og in vivo: gamle påstander og nåværende bevis. Virol J. 2011 11 juli; 8: 346. doi: 10.1186 / 1743-422X-8-346. PMID: 21745397.

    PCR-studie for hepatitt C: typer, indikasjoner, transkripsjon

    Viral hepatitt C er en alvorlig sykdom som oppstår med skade på leveren. I åtti prosent av pasientene blir det kronisk. Viruset multipliserer i leveren celler - hepatocytter - og forårsaker deres død. Dødt vev erstattes av bindevev, fibrose utvikler seg.

    Etter hvert som fibrose utvikler seg, lever ikke i stand til å utføre sine funksjoner, begynner levercirrhose, noe som er farlig på grunn av komplikasjoner: økt trykk i portalveinsystemet, gastrointestinal blødning, nedsatt blodkoagulasjon, mentale forandringer på grunn av skade på hjernekjerner ved giftige produkter.

    Årsaken til sykdommen er infeksjon av et virus fra familien Flaviviridae, som tilhører typen RNA-virus. Dette betyr at det genetiske materialet ved hvilket patogenene av patogenet syntetiseres, er kodet i ribonukleinsyremolekylet. Infeksjon skjer gjennom blod, seksuelt, og fra en gravid kvinne til fosteret. Dessverre kan en tilstrekkelig stor mengde tid passere mellom infeksjon og begynnelsen av antistoffproduksjonen - fra to uker til seks måneder. Dette tillater ikke å bestemme infeksjonen ved hjelp av metoden for immunoassay og begynne behandling i de tidlige stadier.

    Hva er PCR-analyse?

    PCR er en metode for molekylær analyse, som gjør det mulig å oppdage patogenes genetiske materiale allerede i den første uken etter infeksjon ved bruk av polymerasekjedereaksjon. Studien har høy spesifisitet, nøyaktighet, og tillater ikke bare å bestemme tilstedeværelsen eller fraværet av viruset, men også dets konsentrasjon og genotype.

    For studien tas en pasients blod der virus-RNA kan være lokalisert. Primerer legges til de kunstig syntetiserte regioner av det ønskede gen av liten lengde, og RNA-polymerase er et spesielt enzym som øker mengden av genetisk materiale av patogenet flere ganger. Ved hjelp av et spesielt apparat, utføres flere sykluser av oppvarming og kjøling. Deretter analyseres materialet og sammenlignes med de kjente genene til viruset, på basis av hvilket det dannes en konklusjon om nærvær eller fravær av infeksjon.

    Typer av PCR-analyse for hepatitt C

    Det finnes tre typer PCR-analyse:

    1. Kvalitativ analyse av PCR. Den første fasen av studien. Det lar deg identifisere genetisk materiale av viruset i blodet.

  • Kvantitativ analyse av PCR. Lar deg bestemme virusbelastningen - konsentrasjonen av det genetiske materialet til patogenet i en milliliter blod. Denne studien utføres før behandlingsstart, og deretter i første, fjerde, tolvte, og (hvis løpet er lang), tjuefire uke med behandling for å evaluere effektiviteten.

  • Genotyping. Den forårsakende agensen av hepatitt C muterer ofte og raskt. Det var syv varianter av denne virusgenotypen funnet på planeten. I Russland er den første, andre og tredje typen vanlige. Hver av genotypene har en annen motstand mot terapi, for eksempel er effektiviteten av behandlingen av den første typen seksti prosent, og for den andre og tredje når denne tallet åttifem. Derfor, for å kunne velge de riktige stoffene og foreskrive et behandlingsforløp av tilstrekkelig varighet, er det nødvendig å avgjøre nøyaktig hvilken type virus pasienten er infisert med.
  • Indikasjoner for PCR-analyse for hepatitt C

    PCR-studien er foreskrevet i følgende tilfeller:

    • kontakt med en syk person der infeksjon kan oppstå;
    • positiv enzymimmunoassay;
    • tegn på skrumplever: endringer i leverens størrelse, utbredelse av milten, utseende på underlivet av subkutan venøs plexus;
    • Utseendet på symptomer på leverskade: smerte i høyre underliv, guling av huden;
    • økt aktivitet av ALT og AST i den biokjemiske analysen av blod;
    • før behandling begynner å bestemme viral belastning;
    • å overvåke effekten av antiviral terapi;
    • etter behandling for å kontrollere tilbakefall
    • i nærvær av diagnostisert hepatitt B, for å utelukke blandet leverskade.

    Forklaring av PCR-studier på hepatitt C

    Dekoding av PCR-analyse og enzymimmunoassay for hepatitt C skal utføres av en spesialist på hepatolog eller smittsomme sykdommer. Analysere resultatene av PCR er nødvendig i kombinasjon med data om biokjemisk analyse av blod, biopsi og ultralyd. Kun en kvalifisert lege vil kunne analysere resultatene av forskning og, basert på dem, foreskrive riktig behandling.

    Dekoding av kvalitativ analyse.

    I det analyserte biologiske materialet fant det genetiske materialet til patogenet. Infeksjon bekreftet.

    Infeksjon er fraværende, eller mengden av patogenens RNA er under følsomhetsgrensen.

    Dekoding av kvantitativ analyse.

    Normal sats for friske mennesker. Det betyr at det ikke finnes hepatitt C-RNA i materialet som er studert, eller konsentrasjonen er under følsomhetsgrensen for studien.

    RNA-konsentrasjonen er under rekkevidden av kvantifisering. Disse resultatene tolkes svært nøye, korrelerer dem med data fra andre studier, ofte gjenstudier.

    Nivået av viral belastning ved en gitt konsentrasjon regnes som lav. Vanligvis betyr en reduksjon i mengden virus at terapien er vellykket.

    Mer enn 8 * 10 ^ 5 IE / ml

    Nivået av viral belastning ved en gitt konsentrasjon anses høy.

    Mer enn 2,4 * 10 ^ 7 IE / ml

    Mengden av RNA er over den øvre grense for kvantifikasjonsområdet. Det er umulig å trekke konklusjoner om graden av virusbelastning med dette resultatet. Vanligvis i slike tilfeller gjentas testen med fortynning av en blodprøve.

    Dekoding av genotyping.

    Oppdaget RNA av en bestemt genotype

    Hepatitt C-virus av en bestemt genotype og subtype ble påvist i biomaterialet. Resultatet er kodet i romerske tall og latinske bokstaver, for eksempel - 1a, 2b. Totalt er det syv genotyper og sekstisju subtyper, men i Russland er det bare tre første typer.

    Hepatitt C virus RNA oppdaget

    RNA ble funnet i blodet av en sjelden genotype for Russland, som ikke kan tilskrives den første, andre eller tredje typen. Mer forskning er nødvendig.

    Dette resultatet indikerer at pasienten er sunn, eller at mengden av patogen-RNA er for liten.

    Det er mulig at PCR-analyse for hepatitt C er negativ, og enzymbundet immunosorbentanalyse gjenkjenner antistoffer mot viruset. Dette betyr at pasienten hadde akutt hepatitt C og gjenopprettet alene. Omtrent tjue tilfeller av infeksjon resulterer i spontan utvinning dersom pasientens kropp har tilstrekkelig motstand mot infeksjonen.

    Selv om PCR er en svært nøyaktig analyse, kan resultatet bli forvrengt i følgende situasjoner:

    • blodet ble transportert til laboratoriet under upassende forhold, temperaturen ble brutt;
    • biomaterialprøven var forurenset;
    • det var rester av heparin og andre antikoagulantia i blodet;
    • Undersøkere ble funnet å være inhibitorer - stoffer som reduserer eller stopper polymerasekjedereaksjonen.

    Fordelene med PCR over andre metoder

    1. Diagnose i de tidlige stadier. PCR detekterer det genetiske materialet til det forårsakende middel. Ved hjelp av immunfluorescensanalyse kan bare immunoglobuliner bestemmes - stoffer som kroppen produserer som svar på en infeksjon. I tilfelle infeksjon med hepatitt C, kan intervallet mellom infeksjon og utbruddet av immunresponsen være flere uker og måneder, da vil ELISA være ineffektivt. PCR vil gi svar i den første uken etter infeksjon.

  • Lav sannsynlighet for feil. I materialet som studeres, bestemmer området for genetisk materiale, som er karakteristisk for bare en type patogener. Dette eliminerer falske resultater. Når ELISA-feil er mulige, siden samme type antistoffer kan frigjøres mot forskjellige virus - slike antistoffer kalles kryssantistoffer.

  • Høy følsomhet. PCR gjør det mulig å oppdage forårsakerens RNA selv i små mengder. Dette gjør det mulig å identifisere skjulte infeksjoner.
  • Hvordan forberede seg på bloddonasjon for PCR-studier

    For PCR-analysen av hepatitt C samles venøs blod. Vanligvis tas to porsjoner blod fra pasientens vene om gangen: den første sendes til PCR og den andre av ELISA. Dette er gjort for å mer nøyaktig vurdere hvor mye en pasient er infisert med et virus, og hvordan immunitet bekjemper den.

    Vanligvis er pasienten pålagt å følge følgende regler:

    • en blodprøve blir tatt om morgenen;
    • Intervallet mellom det siste måltidet og bloddonasjonen skal være åtte til ti timer;
    • to eller tre dager før analysen, er det nødvendig å forlate stekte og fete matvarer og alkohol;
    • i tjuefire timer før analysen, bør pasienten unngå fysisk anstrengelse: ikke bære vekter, ikke gå til treningsstudio eller svømmebasseng.

    Hva er Hepatitt C RNA?

    Studien av RNA i hepatitt C-viruset er den viktigste prosedyren, som gjør det mulig å fastsette varighet og metoder for behandling av pasienter med stor nøyaktighet. Diagnosen av sykdommen består av flere forskjellige blodprøver, for eksempel:

    • hepatitt C markører (anti-HCV);
    • bestemmelse av hepatitt C-virus RNA (HCV RNA).

    Den første studien er utført ved første mistanke om hepatitt. Det andre alternativet er den mest signifikante i behandlingen av HCV RNA, så betrakt det mer detaljert.

    Hva er viral hepatitt C?

    Viral hepatitt C, eller HCV, er en smittsom sykdom som påvirker leveren. Infeksjon med viruset skjer gjennom blodet. Du kan bli smittet ved å gjøre blodtransfusjon når regler for sterilisering av medisinske instrumenter ikke følges. Oftere er det tilfeller når sykdommen oppnås seksuelt eller fra en gravid mor til fosteret. Hepatitt C kan være av 2 typer.

    Kronisk hepatitt C er den farligste. Det er en form for sykdom som kan vare i livet. Det fører til alvorlige problemer i leverfunksjonen, som skrumplever eller kreft. I 70-90% av infiserte mennesker blir sykdommen kronisk.

    Den viktigste faren for hepatitt C er at den fortsetter skjult, uten icteric tegn. Samtidig klager de oftest på feber, kvalme og oppkast, fysisk svakhet, økt tretthet, tap av matlyst og vekt. På samme tid, på grunn av en liten herding av leverenvevet, opptrer den ondartede degenerasjonen ganske ofte. Av denne grunn blir hepatitt C ofte referert til som en "tidsbombe" eller "kjærlig morder".

    En annen funksjon av sykdommen er den svært sakte utviklingen, beregnet i dusinvis av år.

    Som regel føler de smittede ikke noen symptomer og er ikke klar over sin sanne tilstand. Ofte kan en sykdom kun oppdages ved å kontakte en lege på et annet emne.

    På risiko er:

    • barn som fikk hepatitt C-viruset fra sine mødre;
    • narkomane;
    • folk som gjennomsyret deler av kroppen eller tatoverte med ikke-sterile instrumenter;
    • mottar donorblod eller organer (fram til 1992, da hemodialyse ikke ble utført);
    • folk smittet med hiv;
    • medisinsk personale i kontakt med infiserte pasienter.

    Bestemmelse av hepatitt C RNA

    Definisjonen av hepatitt C-virus-RNA, også kalt hepatitt C-PCR, er en studie av biologisk materiale (blod) som kan brukes til å bestemme direkte tilstedeværelse av hepatittvirusgenomater i kroppen (et enkelt virus er et enkelt RNA).

    Hovedprøven er PCR, eller polymerasekjedereaksjonsmetoden.

    Det finnes to typer blodprøver for HCV RNA:

    Kvalitetstest

    Gjennomføring av en kvalitativ analyse gjør det mulig å avgjøre om viruset er i blodet. Alle pasienter der C-hepatittantistoffer er funnet, må bestå denne testen. Ifølge resultatene kan du få 2 svar: "tilstede" eller "fravær" -virus. Ved et positivt testresultat (detektert) kan man dømme den aktive reproduksjonen av et virus som infiserer friske celler i leveren.

    Testen utført på PCR av høy kvalitet er innstilt til en bestemt følsomhet, fra 10 til 500 IE / ml. Hvis hepatittviruset oppdages i blodet med et spesifikt innhold på mindre enn 10 IE / ml, kan deteksjon av viruset bli umulig. Et svært lavt spesifikt virusinnhold observeres hos pasienter som har antiviral terapi blitt foreskrevet. Derfor er det viktig at følsomheten til det medisinske systemet er høyt for å diagnostisere og sette et kvalitativt resultat i polymerasekjedereaksjonen.

    Ofte utføres polymerasekjedereaksjonen av C-hepatitt umiddelbart etter å finne de tilsvarende antistoffer. Etterfølgende tester, under gjennomføringen av antiviral terapi, utføres på 4., 12. og 24. uke. Og en annen analyse etter avslutning av HTP er gjort etter 24 uker. Så - en gang i året.

    Kvantitativ test

    Kvantitativ analyse av PCR RNA, som noen ganger kalles viral belastning, bestemmer konsentrasjonen (spesifikt innhold) av viruset i blodet. Med andre ord, viral belastning er definert som en viss mengde viralt RNA, som kan være i en bestemt mengde blod (det er vanlig å bruke 1 ml, lik 1 cm i en terning). Enhetene for testresultater er internasjonale (standard) enheter dividert med en milliliter (IE / ml). Virusets innhold forekommer noen ganger annerledes, det avhenger av laboratoriene der forskningen utføres. For hepatitt C bruker kvantitativ bestemmelse noen ganger verdier som kopier / ml.

    Du må forstå at det ikke er noen spesifikk avhengighet i alvorlighetsgraden av C-hepatitt på konsentrasjonen av denne stammen i blodet.

    Sjekk "viral load" lar deg bestemme graden av smittsomhet av sykdommen. Dermed øker risikoen for å infisere en annen person med et virus med en økning i konsentrasjonen av hepatitt i blodet. I tillegg reduserer det høye innholdet av viruset effekten av behandlingen. Derfor er lav viral belastning en svært gunstig faktor for vellykket behandling.

    I tillegg har hepatitt C-testen og dens bestemmelse ved PCR en stor rolle i anvendelsen av terapi for sykdommen og bestemmer suksessen av behandlingen. Basert på testresultatene er det planlagt et rehabiliteringskurs. For eksempel, hvis den spesifikke konsentrasjonen av hepatittviruset er for sakte, er antiviral terapi forlenget, og vice versa.

    I moderne medisin antas det at belastningen på mer enn 800000 ME / ml er høy. En belastning på over 10 000 000 ME / ml anses kritisk. Men eksperter fra forskjellige land har fortsatt ikke den samme oppfatningen om grensene for virusbelastningen.

    Frekvensen av den kvantitative testen

    I generelle tilfeller utføres en kvantitativ analyse av hepatitt før antiviral terapi og 3 måneder etter avslutning av medisinske prosedyrer for å bestemme kvaliteten på den utførte behandlingen.

    Som et resultat vil en kvantitativ test bli vurdert som en kvantitativ vurdering av resultatene for prøven spesifisert ovenfor. Som et resultat vil dommen "under det målte området" eller "ikke oppdaget i blodet" bli utstedt.

    Sensitivitetsparameteren til en kvalitativ test er vanligvis lavere enn sensitiviteten til en kvantitativ analyse. Den "Manglende" transkripsjonen viser at begge typer analyser ikke fant virus-RNA. Når testindeksen var "under det målte området", fant en kvantitativ type analyse sannsynligvis ikke hepatitt-RNA, selv om dette bekrefter tilstedeværelsen av et virus med et svært lite spesifikt innhold.

    Hepatitt C og dens genotyper

    Hepatitt C-virus RNA-genotyping diagnostiserer tilstedeværelsen av forskjellige genetiske typer hepatitt C. Mer enn 10 typer av det virale genomet er kjent for vitenskap, men for medisinsk praksis er det tilstrekkelig å utelukke flere genotyper som har størst andel i regionen. Å bestemme den genetiske typen spiller en nøkkelrolle i valg av behandlingstidspunktet, noe som er svært nødvendig dersom du tar hensyn til det store antallet bivirkninger av medisiner for hepatitt.

    Metoder for behandling av viral hepatitt C

    Den eneste effektive måten å kurere hepatittviruset, er som regel en kombinasjon av 2 medisiner: interferon-alfa sammen med ribavirin. Individuelt er disse stoffene ikke like effektive. Den anbefalte dosen av legemidler og tidspunktet for bruk bør kun foreskrives av lege og individuelt for hver pasient. Behandling med disse legemidlene kan ta fra 6 til 12 måneder.

    I dag ikke oppfunnet narkotika som garanterer et hundre prosent utvinning fra viruset. Men med riktig behandling kan helbredelse av pasienter nå opptil 90% av antall tilfeller.

    Kvalitativ analyse av PCR for hepatitt C

    Hepatitt er en alvorlig sykdom som har mange årsaker. Grunnlaget for utviklingen er direkte eller indirekte skade på leveren. Med tanke på dens betydning for hele organismen, kan man bare gjette hvor vanskelig patologien er. I denne artikkelen vil vi nærmere undersøke funksjonene i kurset og laboratoriediagnosen av hepatitt C.

    Årsaken til sykdommen er et virusmiddel som refererer til RNA-holdige patogener. Den har en særegen egenskap - evnen til å mutere, det vil si å forandre strukturen. På grunn av dette unngår infeksjonen fra angrepet av immunsystemet og fører i de fleste tilfeller til kronisk betennelse i leveren.

    Gitt eksistensen av forskjellige undertyper av viruset, bør valget av medisiner være basert på resultatene av genotyping. Til tross for en lang studie av sykdommen og strukturen av HCV, har det ennå ikke vært mulig å utvikle en spesifikk vaksine for sykdommen.

    Vanskelighetene med tidlig diagnose ligger i det asymptomatiske løpet av hepatitt, noe som fører til at en person besøker en lege på cirrhosisstadiet. For å oppdage sykdommen i tide, er det nødvendig med vanlige medisinske undersøkelser. Bare ved laboratorietesting av blod er det mulig å oppdage HCV og forhindre forurensning av andre. Faktum er at transportøren av infeksjonen i lang tid ikke kan gjette om patologien og fortsette å overføre viruset til friske mennesker.

    Fremgangsmåter for overføring

    I de fleste tilfeller sprer viruset gjennom blodet, da det inneholder den høyeste konsentrasjonen av patogene stoffer. Dermed overføres infeksjonen:

    • med hemodialyse;
    • med en infisert nål;
    • i ferd med å kjempe, når huden er skadet, og blodkontakt oppstår;
    • med blodtransfusjon (blodtransfusjon).

    Sannsynligheten for infeksjon under intimitet er ubetydelig, da sæd og vaginal utslipp inneholder en liten mengde patogener. Risikoen for infeksjon økes betydelig i strid med integriteten til slimhinnen i kjønnsorganene. Dette observeres med aggressiv og analsex.

    Når det gjelder vertikal modus for overføring, utføres den i arbeidsprosessen. I fosterets svangerskapstid kan patogen ikke trenge gjennom moderkaken til embryoet. Ved naturlig fødsel blir det patogene stoffet overført til barnet når huden er skadet, når kontakt med moderens blod blir observert.

    Etter patogenes inntrengning i en sunn organisme begynner syntesen av antistoffer, som er beskyttelse mot infeksjon og tilhører immunstrukturer. De er funnet i den første studien av en person som bruker ELISA.

    En polymerasekjedereaksjon utføres for å bekrefte pasientens diagnose. Det er en analyse av det genetiske materialet til et patogent middel og bestemmelsen av viral belastning.

    Laboratoriediagnose av hepatitt C

    Laboratoriediagnose starter med enzymimmunoassay. Hovedoppgaven er å oppdage antistoffer produsert mot patogenet. Dens effektivitet er nesten 95%. Takket være denne undersøkelsen er det mulig å identifisere virusbæreren i det prekliniske stadiet og sende det til videre undersøkelse.

    En kvalitativ analyse av ELISA indikerer tilstedeværelse eller fravær av immunglobuliner i pasientens blod. Resultatet kan være "positivt" eller "negativt". Etter å ha mottatt det første svaret, blir personen sendt til neste undersøkelse - PCR. Prisen avhenger av kvaliteten på reagensene og laboratoriet. Kostnaden for polymerasekjedereaksjonen kan nå 4000 rubler.

    PCR-funksjoner

    Ved hjelp av en polymerasekjedereaksjon, tillater selv en liten mengde biologisk materiale oss å estimere virusbelastningen i blodet, det vil si å beregne konsentrasjonen av patogener i en milliliter væske.

    Med forekomsten av PCR har diagnosen hepatitt blitt mye lettere. Analysen gjør det mulig å identifisere HCV RNA, for å etablere stadium av den smittsomme prosessen og infektiøsiteten av virusbæreren.

    Det finnes flere typer genetisk diagnose:

    1. Kvalitativ analyse av PCR for hepatitt C - bekrefter tilstedeværelse eller fravær av HCV i emnetes blod:
    2. kvantitativ, der du kan beregne konsentrasjonen av virus og etablere scenen av sykdommen. Resultatet er gitt i IE / ml eller kopier / ml (avhengig av laboratoriet);
    3. genotyping - nødvendig for å bestemme genotypen av HCV. Dette kreves for det nøyaktige utvalg av stoffer som vil være mest effektive i dette tilfellet. Analyse indikerer indirekte alvorlighetsgraden av den patologiske prosessen i leveren. Således, med den tredje genotypen av patogenet, observeres steatosis oftest, grunnlaget for dette er akkumulering av fett i hepatocytter (dets celler). I tillegg påvirker typen av virus utfallet og varigheten av terapeutisk kurs.

    Kvalitativ analyse av PCR for hepatitt C

    Først og fremst blir biologisk materiale undersøkt i laboratoriet for tilstedeværelse av HCV RNA. Det er viktig å huske at en kvalitativ analyse av hepatitt C har et visst følsomhetsnivå, og derfor kan det ikke alltid gi riktig svar. I dette tilfellet anbefales det å gjennomføre laboratoriediagnostikk ved hjelp av andre reagenser.

    For å oppnå pålitelige resultater, bør testsystemer med følsomhet på minst 50 IE / ml brukes.

    Det diagnostiske resultatet kan enten være "positivt" eller "negativt". Hvis patogenet ikke er funnet i blodet, er studien fullført. Hvis det oppdages et patogent middel i en prøve, kvantifiseres en viral belastning.

    En falsk-negativ respons oppnås når en teknologisk prosess brytes, for eksempel, aktive komponenter som undertrykker byggingen av kopier av patogenet, kommer inn i mediet. Dermed er det ikke mulig å vise et ekte blodbilde, og derfor er ikke en persons infeksjon diagnostisert.

    Et falskt positivt resultat kan oppnås hvis røret for innsamling av biologisk materiale, samt miljøet for studien, var forurenset. I tillegg er slik analyserespons mulig med blandede infeksjoner, når leveren er påvirket av flere virus, for eksempel hepatitt C og D.

    Indikasjoner for kvalitativ forskning

    Legen kan foreskrive en pasient en kvalitativ studie om identifisering av RNA i hepatitt C-viruset:

    • ved mottak av et positivt eller tvilsomt enzymimmunoassayrespons;
    • for bekreftelse av diagnosen;
    • bestemme viral belastning;
    • sette scenen av sykdommen;
    • diagnose av blandet infeksjon. Hepatitt C infiserer ofte leveren samtidig med "D" -viruset;
    • Bestemmelse av terapeutisk taktikk under hensyntagen til kausjonsmiddelets genotype;
    • vurdere dynamikken i endringer under behandling med antivirale medisiner.

    Fordelene ved polymerasekjedereaksjonen inkluderer:

    1. høy følsomhet av teknikken, som gjør det mulig å fastslå faktumet av infeksjon i det prekliniske stadium;
    2. identifisering av patogenets genetiske materiale, og ikke antistoffer mot det;
    3. muligheten for å etablere en subtype av et patogent middel;
    4. høy hastighet på diagnostikk, da det ikke krever såing av materialet på næringsmediet, og det er nok å bruke spesifikke testsystemer. En person mottar resultatet etter 5 timer;
    5. allsidighet. Analysen tillater å identifisere ethvert genetisk materiale (RNA, DNA). På grunn av dette kan legen bekrefte hepatitt C og andre typer sykdommen (B);
    6. evnen til å oppdage latent infeksjon.

    Kvantitativ forskning

    I studien av blod ved hjelp av polymerasekjeden kan reaksjonen beregne antall patogener i et fast volum biologisk materiale. Indikatoren er presentert i IE / ml. Gjennom analyse er det mulig å bestemme graden av smitte av pasienten, bestemme stadium av den smittefarlige prosessen, og også vurdere effektiviteten av medisinering.

    På grunnlag av PCR bestemmer spesialisten hvilke doser medikamenter som kan blokkere reproduksjon av patogener. I tillegg bestemmes varigheten av antiviral behandling og prognose for livet. Det er viktig å huske at testsystemene har høy følsomhet, slik at metoden gjør det mulig å bekrefte infeksjon av en person i det prekliniske stadiet.

    genotyping

    Gitt patogenes evne til å mutere, er genotypen nødvendig for å bestemme behandlingens taktikk og valg av antivirale legemidler. For eksempel varer behandling av hepatitt B HCV 1 48 uker, med en positiv utvikling observert i bare 60% av tilfellene. Genotyper 2 og 3 har en mer gunstig prognose. Antivirale legemidler er foreskrevet i 8 måneder, og deres effektivitet når 85%.

    Ifølge statistikk er HCV 1, 2 og 3 i de fleste tilfeller registrert i Russland.

    Når deklarerer en laboratorietest, kan dette svaret angis - "ikke skrevet". Dette betyr at et virus sirkulerer i pasientens sirkulasjonssystem og ikke kan gjenkjennes av testsystemet. Resultatet av analysen i dette tilfellet indikerer at patogenet ikke er typisk for et gitt geografisk område.

    Hvordan får du pålitelige resultater?

    For at en kvalitativ studie av PCR for å oppdage RNA av det fremkallende middel av hepatitt C viste de riktige resultatene, er det nødvendig å observere kravene til å forberede laboratoriediagnostikk:

    1. blodprøvetaking utføres på tom mage, og det "sultne" gapet bør ikke være kortere enn 8 timer;
    2. To dager før studien anbefales det å slutte å drikke alkoholholdige drikkevarer og forlate krydret, fett og røkt mat;
    3. Avbryt introduksjonen av legemidler som reduserer blodproppene, for eksempel heparin. Hvis disse medisinene er foreskrevet av helsehensyn, må du varsle legen. I tillegg bør spesialisten være oppmerksom på inntak av andre legemidler som kan påvirke resultatet av laboratorieforskning;
    4. På tærskelen til samlingen av biologisk materiale, bør ikke fysioterapeutiske prosedyrer utføres og ikke utsettes for alvorlig fysisk anstrengelse.

    Resultatene av analysen kan påvirkes ikke bare av den personen som donerer blod, men også av andre faktorer, nemlig:

    • dårlig kvalitet blod prøvetaking;
    • manglende overholdelse av anbefalinger om transport av biologisk materiale
    • Utilstrekkelig opplæring av laboratoriearbeidere;
    • manglende overholdelse av forskningsteknikken;
    • innføring av antikoagulantia (heparin) på kvelden før blodprøvetaking. Denne gruppen medikamenter reduserer koagulering, og derved reduserer arbeidet med reagenser.

    I ulike laboratorier kan det diagnostiske svaret avvike noe, men disse feilene påvirker ikke det endelige resultatet av studien.

    Spesiell oppmerksomhet er lagt til hvilke typer testsystemer som brukes i laboratoriet. Ofte er det gitt fortrinnsvis reagenser med høy følsomhet. Dette er viktig for pasienter med lav viral belastning, da det er vanskelig å oppdage.

    Hvor ofte utføres en laboratorietest?

    Primær polymerasekjedereaksjon utføres hos mennesker som har blitt påvist ved immunoassay-antistoffer mot patogenet av hepatitt. I dette tilfellet er det tildelt å bekrefte det faktum at infeksjon av en person og etablere scenen av sykdommen. I tillegg tillater analysen å bestemme virus subtypen, noe som er spesielt viktig for valg av medisiner.

    Neste periode for obligatorisk laboratorietesting er 3 måneder fra starten av antiviral terapi. Diagnostikk gjør det mulig å evaluere effektiviteten av medisiner, justere dosen eller erstatte dem.

    I tillegg til grunnleggende tester kan PCR i tillegg utføres ved 4 og 24 uker fra starten av behandlingen. Positiv prognose av sykdommen er bekreftet av en reduksjon i viral belastning etter tre måneders behandling. For eksempel bør den reduseres fra 1 million IE / ml til flere hundre tusen.

    Hvis konsentrasjonen av patogene stoffer i blodet forblir på samme nivå eller øker noe, indikerer dette ineffektiviteten av antivirale legemidler og krever erstatning. Ved bruk av PCR ved slutten av behandlingen, er det mulig å bekrefte pasientens utvinning.

    For å korrekt tolke resultatene av laboratoriediagnostikk, er det nødvendig med konsultasjon av en hepatolog eller smittsom sykdom. Gitt den høye frekvensen av falske responser i ELISA, brukes analysen utelukkende til primær screening. For en grundigere undersøkelse av den anvendte polymerasekjedereaksjonen.

    Er det mulig å kurere hepatitt C uten bivirkninger?

    I dag er moderne medisiner av den nye generasjonen Sofosbuvir og Daclatasvir sannsynlig å helbrede hepatitt C for 97-100%. Du kan få de nyeste medisinene i Russland fra den offisielle representanten for den indiske farmasøytiske giganten Zydus Heptiza. Bestilte stoffer vil bli levert med bud innen 4 dager, betaling ved mottak. Få en gratis konsultasjon om bruk av moderne rusmidler, samt lære om hvordan man skal anskaffe, kan du på den offisielle nettsiden til leverandøren Zydus i Russland.


    Relaterte Artikler Hepatitt