Hva er normer for kvantifisering av hepatitt C?

Share Tweet Pin it

Hepatitt C-viruset kan multiplisere i blodceller og forårsake lymfoproliferative sykdommer. Takket være de mange mutasjonene, svetter kroppens immunforsvar, og genotyper og subtyper av viruset opptrer. Med riktig og rettidig bestemmelse av en bestemt type, avhenger effekten av antiviral terapi. Faren for infeksjon er at sykdommen er asymptomatisk. Kun 15 prosent av 100 kan oppleve kvalme og oppkast, vekttap og feber.

Definisjon av hepatitt C-virus

Standardhastigheten til hepatitt C er i størrelser fra 40 til 60 nm, med de fleste lipider, leverskade som skyldes et akutt eller kronisk sykdomsforløp. Hepatitt C, nemlig RNA-viruset til Togaviridae-familien, er ekstremt vedvarende, overføres ved blodtransfusjon eller bruk av ikke-sterile objekter, feil hygieneforsyning, etc. Kvantitativ analyse lar deg undersøke blodet og identifisere den genetiske strukturen til det infiserte viruset.

For å bestemme hepatitt C og dens genotyper utføres kvantitativ analyse. Avhengig av analysatoren kan tre nivåer av RNA virus forekomst bestemmes.

Subtypene kan produsere ulike modifikasjoner, så spesifisiteten og følsomheten til analysatoren må være hundre prosent. I tillegg til å oppdage sykdommen hos en pasient, er det nødvendig å bestemme graden av alvorlighetsgraden. Noen laboratorier har ikke alle dataene om RNA-virusdekoding, det er en mulighet for en falsk positiv respons.

Forskning på hepatitt C vil være mer nøyaktig når man studerer disse indikatorene:

Ved å gi oppmerksomhet til resultatene av disse indikatorene og kroppens generelle tilstand, vises et resultat som viser infeksjonsgraden, formen og antall hepatitt C-celler i blodet. Dette bidrar til helbredelsesprosessen og effektiviteten av antiviral terapi.

Typer av analyse for hepatitt C

En flerdimensjonal kjedereaksjon (PCR) gir en ide om antall DNA-partikler i pasientanalyser tatt, og vil riktig identifisere det smittefarlige middel.

Årsaker til smittsomme sykdommer kan forekomme. En infeksjon i leveren, som hepatitt C, kan behandles i vår tid når den oppdages i tide. Hvis et virus er mistenkt, utføres PCR-analyse.

Gitt at symptomene på viruset i lang tid kan maskeres, kan en person ikke føle sykdommenes utbrudd. Men med en grundig undersøkelse i 60-70% av tilfellene, oppdages hepatitt C, den første analysen, som er ELISA, følger PCR-diagnosen. Analysen utføres i visse perioder for å bestemme sykdomsstadiet og foreskrive riktig behandling. For å unngå det, uten å anvende alle disse prosedyrene, er det mulig å bli vaccinert mot hepatitt.

Kvalitativ og kvantitativ analyse

Det er kvalitativ og kvantitativ analyse. Essensen av den første er at den bestemmer tilstedeværelsen av infeksjon i blodet. Og det betyr at viruset infiserer friske leverceller. Når antistoffer mot hepatitt C er funnet hos en pasient, utføres en kvalitativ test umiddelbart. Hastigheten som resultatet skal gi er "ikke oppdaget i blodet". Ved bestemmelse av konsentrasjonen av et virus, er det behov for å kjenne følsomheten til diagnosesystemet, siden folk som gjennomgår antiviral terapi kan gjøre analysen. Analysatorens følsomhetsgrad bør ikke være mindre enn 50 IE / ml.

Når et virus oppdages, utføres en kvantitativ analyse, det vil si virusbelastningen, som bestemmer virusets konsentrasjon i blodet og alvorlighetsgraden av sykdommen.

Viral RNA, som er i en viss mengde blod, er definert som normen med en hastighet på 1 ml per 1 cm kubikk. Etter kvantifisering av virusbelastningen er det mulig å bedømme infeksjonsgraden av det fortsatt uinfiserte miljøet. Så snart konsentrasjonen av hepatitt C stiger i blodet, er det nødvendig å isolere fra miljøet.

Det er viktig i de første stadiene å oppdage graden av konsentrasjon av hepatitt, for å bestemme tempoet i rehabilitering. Hvis graden av hepatitt C overskrides med mer enn 800 000 IE / ml, anses den for høy, med en økning på opptil en million kritisk. Hvis det kvantitative området er mindre enn 400 000 IE / ml, anses det at infeksjonen av de som er rundt, er mindre sannsynlig. Denne figuren gjør det klart at hepatitt C er tilstede i kroppen i svært små doser. Analysen kunne ikke bestemme den kvantitative verdien av RNA-partiklene av viruset, så det blir gjenutnevnt flere ganger for nøyaktigheten av diagnosen.

Resultater av kvantitativ analyse

Oppgaven med å bestemme mengden av virusbelastning i blodet til en pasient er identifikasjonen av infeksjonsgraden til andre.

Resultatene av PCR-analysen:

  1. Et positivt svar betyr at det er infeksjon i det biologiske materialet. Analysen tillater å bestemme eksakt antall infiserte celler.
  2. Det negative svaret indikerer fraværet av infeksjon, som er nøye søkt i kroppen.

Metoden for kvantitativ bestemmelse av hepatitt C er nøyaktig og informativ, utført på utstyr med høy følsomhet. Dekryptering av resultatene av analysen lar deg finne ut om infeksjonen og dens spesifikasjoner, for å se det minste antallet infiserte celler på svært sensitive analysatorer.

False-positive eller motsatte resultater er sjelden gitt av analysen, oftere skjer dette i immunanalyser.

Kvantitativ analyse av PCR for hepatitt C

Det er mange subtyper av HCV, derfor er det ikke alltid mulig å velge effektive antivirale legemidler og oppnå de ønskede resultatene i behandlingen. En rekke patogener på grunn av deres evne til å forandre strukturen, det vil si å mutere. Som et resultat har immuniteten ikke tid til å danne et kraftig respons mot det patogene middel, og legemidlene er ineffektive.

Hepatitt blir ofte diagnostisert ved skrumplever, som forutsetter sen diagnostisering av sykdommen på grunn av fravær av kliniske tegn. Kun ved laboratorieundersøkelse kan HCV detekteres i inkubasjonsperioden.

En kvantitativ analyse av hepatitt C gjør det mulig ikke bare å fastslå tilstedeværelsen av patogenet i blodet, men også for å beregne konsentrasjonen.

Anbefalinger for å forberede analysen

Spesifikt forberedelse til laboratoriediagnose er ikke nødvendig. Det er nok å følge følgende anbefalinger:

  1. kvantitativ analyse utføres på tom mage, med siste måltid - 8 timer før blodoppsamling;
  2. i to dager bør du forlate alkohol og "tunge" retter;
  3. Spesielt viktig er legemidlene som pasienten tar. De kan påvirke resultatet av studien, så legen skal vite om dem.

Også ikke ønskelig er tunge øvelser og fysioterapeutiske prosedyrer på dagen før blodprøvetaking. For å dekode kvantitativ analyse av hepatitt C viste seg å være pålitelig, ikke forsøm de ovennevnte anbefalingene.

Ofte mottar pasienten resultatet av analysen på en dag. Prisen på studien for å bestemme konsentrasjonen av patogenet i blodet avhenger av laboratoriet og kvaliteten på reagensene og kan nå 4000 rubler.

Laboratoriediagnose av hepatitt C

Blant de primære diagnosemetoder er ELISA, eller enzymbundet immunosorbentanalyse. Det er foreskrevet for påvisning av spesifikke antistoffer mot HCV. Dens effektivitet når 95%. Hvis transkripsjonen av studien gir et positivt resultat, er det verdt å mistenke tilstedeværelsen av patogenet i blodet.

Merk at i halvparten av emnene med en "+" -test i løpet av ytterligere diagnose, ble det ikke detektert viruset i blodet. ELISA angir i dette tilfelle en utsatt kontakt med HCV tidligere, som det fremgår av sirkulerende antistoffer.

En mer nøyaktig studie er polymerasekjedereaksjonen, eller på annen måte PCR. Det lar deg bestemme konsentrasjonen av RNA-patogen i blodet. Finne et genetisk sett av viruset i det biologiske materialet, bekrefter doktoren hepatitt C.

PCR er tildelt pasienten for å bekrefte diagnosen. Det gjør det mulig å identifisere RNA på scenen når antistoffer ikke er tilgjengelige ennå. Det finnes flere typer genetiske studier:

  1. kvantitativ analyse av PCR for hepatitt C, som ikke bare etablerer tilstedeværelsen av patogenet i blodet, men gir også informasjon om dens konsentrasjon;
  2. kvalitet - bekrefter infeksjon
  3. genotyping - lar deg bestemme genotypen for det patogene stoffet og velge de mest effektive legemidlene mot det.

Polymerasekjedereaksjon

Som nevnt er det flere typer laboratorietester:

  • kvalitativ analyse indikerer tilstedeværelsen av et patogent middel i blodet. Denne typen diagnose har et visst nivå av respons, derfor er det ikke alltid pålitelig. For å kunne tydeliggjøre resultatene og oppnå reelle indikatorer, anbefales det å bruke et testsystem med sensitivitet på minst 50 IE / ml for forskning. Analysesatsen er "negativ respons" eller "virus ikke oppdaget." Dette indikerer fraværet av et genetisk sett av patogenet i testmaterialet. Hvis resultatet er positivt, er det nødvendig med ytterligere undersøkelse av pasienten;
  • Kvantitativ analyse av PCR for hepatitt C bestemmer virusbelastningen, det vil si konsentrasjonen av det patogene middel i blodet. Resultatet av studien viser antall RNA-enheter i et fast volum biologisk væske;

Viral belastning er telling av smittsomt RNA i en milliliter av blodet som undersøkes. Måleenheter er IE / ml, men enkelte laboratorier definerer "kopier / ml", mens man peker på skjemaet for analysenorm for sammenligning og evaluering av resultater.

  • genotyping. På grunn av patogenes evne til å endre valget av effektive antivirale stoffer, bør terapi baseres på genotypen. Ikke bare resultatet, men også varigheten av behandlingskurset avhenger av det. Således krever HCV 1 hepatitt utnevnelsen av medisiner i et år, men en positiv utvikling er kun observert i 60% av tilfellene. Når det gjelder andre og tredje genotyper, er de mindre resistente mot virkningen av antivirale legemidler, på grunn av hvilken effektiviteten av behandlingen overstiger 85%. Ved mottak av et slikt resultat av studien - "viruset er ikke skrevet", er det verdt å mistenke forekomsten av patogenet, som ikke er anerkjent av standard testsystemer.

Indikasjoner for analyse

Dekoding av kvantitativ analyse av hepatitt C er nødvendig for:

  1. videre undersøkelse av pasienten når antistoffer mot HCV ble påvist under ELISA;
  2. bekreftelse av diagnosen;
  3. etablere virusbelastning under blandet infeksjon, når en person er smittet med flere typer patogener;
  4. bestemme behandlingstaktikk (valg av antivirale legemidler, erstatning eller fullføring av terapi);
  5. vurdere dynamikken i sykdomsprogresjonen, samt effektiviteten av narkotika;
  6. bestemme stadiet av patologi (akutt, kronisk).

PCR har følgende fordeler:

  1. god følsomhet, som gjør det mulig å beregne til og med en liten mengde av viruset;
  2. identifikasjon av selve patogenet (RNA) og ikke antigener;
  3. spesifisiteten til teknikken - etablering av en bestemt type patogen agent;
  4. hastighet for å oppnå resultater, fordi analyse ikke krever dyrking av avlinger i næringsmedium. Svaret er klart om 5 timer;
  5. universalitet - lar deg identifisere det genetiske settet av ulike patogener, både RNA og DNA-holdig (hepatitt B);
  6. påvisning av latent infeksjon.

Laboratorieforskning bidrar til å bekrefte diagnosen og er en integrert del av en omfattende undersøkelse (analyse av kliniske symptomer, resultater av ELISA og biokjemi).

I tillegg er PCR mye brukt i allergologi, genetikk, og også for å etablere fakta om faderskap.

Dekoding av kvantitativ analyse av hepatitt C-viruset

Evalueringen av resultatene av laboratoriediagnostikk utføres av en lege ved å sammenligne dataene som er oppnådd med normen.

Dekrypteringsanalyse for hepatitt C

Leversykdommer i den moderne verden er svært relevante, fordi dette organet er utsatt for negativ påvirkning fra miljøet, feil livsstil, etc.

Men det er sykdommer som absolutt alle kan bli smittet med, og det er ekstremt vanskelig å forutsi om dette vil skje eller ikke. Dette for eksempel viral hepatitt, som overføres hovedsakelig gjennom blodet og i utgangspunktet ikke gjør seg kjent. Spesielt snakker vi om C-hepatitt.

Det faktum at viruset i utgangspunktet ikke viser noen spesielle tegn, kompliserer alvorlig diagnosen, men det er likevel ganske effektive og mangfoldige studier som vil bidra til å finne frem til problemet.

Det grunnleggende prinsippet for å oppdage HCV sykdom er å dekode testene for hepatitt C, det vil si å sammenligne visse indikatorer med normer.

Betingelser for å få veibeskrivelse

Diagnose av hepatitt C utføres av mennesker av ulike grunner, hovedsakelig:

  • mistanke om mulig hepatitt;
  • en person er i fare;
  • diagnose er nødvendig med tanke på arbeidets spesifikke egenskaper;
  • kvinner under graviditet eller ved planlegging.

Det finnes flere typer diagnostikk: Noen av dem er overfladiske studier, andre er dype og svært nøyaktige, og prinsippet om dette er studiet av minimal avvik fra normale indikatorer eller påvisning av bestemte stoffer.

For deteksjon av hepatitt C-virus i humant blod, brukes 3 typer diagnostiske metoder, disse er:

  1. Enzymbundet immunosorbentanalyse (ELISA). Utført i laboratoriet ligger prinsippet i bestemmelse av antistoffer mot hepatitt, spesielt: IgG, IgM. Denne diagnosen vil ikke gi et detaljert svar: en person er syk eller ikke, fordi en tredjedel av bærerne av antistoffene ikke blir oppdaget. Dette skjer på grunn av gapet mellom viruset som kommer inn i kroppen og produksjon av antistoffer mot det, så dette er en tvilsom og meget overfladisk analyse.
  2. Rekombinant immunoblotanalyse. Det utføres bare for å bekrefte laboratorietester, hvis resultatet er positivt, betyr det at personen er eller var en bærer av sykdommen. Antistoffer mot viruset vises ikke umiddelbart, selv etter vellykket behandling av hepatitt. I tillegg er et falskt resultat mulig på grunn av noen tredjepartsfaktorer.
  3. Polymerase (PCR) analyse. Hva er den mest nøyaktige metoden for å bestemme hepatitt? - unikt PCR. Det er den yngste og mest nøyaktige måten å diagnostisere. Det PCR kan gi et detaljert svar om sykdomsforløpet, lar deg sette konsentrasjonen av viruset i blodet og dets genotype (det er 6). Prinsippet er basert på deteksjon av DNR / RNA-virus i blodplasmaet. Denne metoden omgår alle de ovennevnte med hensyn til kvaliteten på diagnosen: minst 20 dager bør passere før de kliniske manifestasjonene av hepatitt, og maksimalt 120 dager før produksjon av antistoffer - 10-12 uker etter penetrasjon av viruset. Men deteksjon av kausjonsmiddelet i blodet kan ikke være falskt på noen måte, den eneste begrensningen: 5 dager må passere fra infeksjonstidspunktet, fordi det ikke kan være et virus i det studerte blodvolumet.

PCR utføres for nøyaktig diagnose, det skjer tre underarter:

  1. Kvalitativ analyse. Med det er bare tilstedeværelsen av viruset bestemt.
  2. Kvantitativ diagnostikk. Brukes til å bestemme nøyaktig innholdet av viruset i blodvolumet; under behandling brukes til å teste effekten.
  3. Genotypisk diagnose. Brukes til å bestemme genotypen, og senere fenotypen av viruset. Å kjenne genotypen av patogenet er ekstremt viktig for terapi, fordi, avhengig av egenskapene, endres kurset og konsentrasjonen av stoffinntaket.

Hjelpeanalyser

I diagnosemetodene spilles en viktig rolle av ytterligere tester, som til tider endrer egenskapene til behandlingen, og noen ganger kan det til og med indikere en annen diagnose.

Biokjemisk analyse

For å ordentlig foreskrive behandling og ikke forverre bildet, må du på en pålitelig måte bestemme graden av leverskade, for dette bruker en biokjemisk blodprøve, som vil vise avvik fra normen i sammensetningen.

Endringer karakteriserer funksjonene i leveren vevskader, det er: stadiet av sykdommen, alvorlighetsgraden av fibrose, forstyrrelse av leveren. Den biokjemiske metoden viser ekte tall for bilirubin, protein, urea, kreatinin, sukker, AST og ALT, alkalisk fosfatose, jern og gamma-glutamyltranspeptidase i blodet. I tillegg vil lipidprofilen og kvaliteten på proteinmetabolismen bli bestemt.

fibrose diagnose

Fibrose er en skade på leveren vev, kurset avhenger av sin grad, derfor er diagnosen av alvorlighetsgraden av vevskader svært viktig. Dømmer etter bildet av sykdomsløpet, kan legen dømme hvor viktig behandlingen er: Hvis situasjonen er ukritisk, kan den til og med bli utsatt for ikke å skade andre organer med stoffene.

Andre analyser

Noen ganger, for å få et komplett bilde av sykdommen, brukes en ultralydsskanning av bukhulen og skjoldbruskkjertelen, et komplett blodtall. Eldre mennesker diagnostiseres med kardiovaskulære og fordøyelsessystemer, lunger.

Hvis det ikke er mulig å utføre standard ELISA / PCR analyser, utføres det spesifikke analyser av spytt og andre væsker for tilstedeværelsen av patogenet.

indikatorer

Teknologier for diagnostisering av hepatitt C er på et høyt nivå, og gir ofte ikke falske resultater.

Til tross for dette er det umulig å gi 100% garanti for nøyaktighet: Falske positive resultater er mulige.

En blodprøve kan gi et feil svar i tilfelle manglende overholdelse av analysene eller andre faktorer. Hovedårsakene til forvrengningen av resultatene:

  • noen spesifikke infeksjoner som reagerer med screeningsmidler og testen er positive;
  • graviditetsforskning;
  • Tilstedeværelsen av sekundære stoffer i kroppen;
  • forstyrrelse av immunforsvaret;
  • brudd på reglene for blodprøvetaking.

Dekryptere tester for hepatitt C

Dekodingstester for hepatitt omhandler en erfaren spesialist som vil avgjøre abnormiteter av hver indikator og skrive en konklusjon om sannsynligheten for hepatitt.

Ved diagnostisering ved hjelp av ELISA, vil deteksjon av antistoffer i blodet tydeliggjøre at det er eller var hepatittvirus i menneskekroppen: enten pasienten er syk nå eller har hatt sykdommen, og antigenene ganske enkelt ikke har tid til å komme seg ut av kroppen. Det skal huskes at antistoffer ikke fungerer umiddelbart - en viss tid må passere for at en slik analyse skal gi pålitelige resultater. Derfor må du om nødvendig donere blod til testing.

Hvis PCR-diagnosen ga en positiv respons, så er det med en sannsynlighet på 99% i legemet. I dette tilfellet er det nødvendig å bestemme alvorlighetsgraden og utføre rna genotyping for å korrigere kurset, og så begynne behandlingen umiddelbart slik at hepatitt ikke blir kronisk. Disse polymeraseanalysene anses som meget nøyaktige, fordi de kan oppdage opptil 1 som er representative for viruset i cellen. Hvis strømningshastigheten av polymerasekjedereaksjonen ikke brytes, er svaret negativt, og det er ikke nødvendig å bekymre seg.

Ved etablering av hepatitt C brukes kvantitativ bestemmelse av bilirubin, ALT og AST, proteiner. Deres innhold indikerer også graden og alvorlighetsgraden av sykdommen.

Generell tabell med indikatorer på stoffer i blodet som kan indikere C-hepatitt etter biokjemisk analyse:

Hepatitt C. Kvantitativ analyse. Norm, transkripsjonsresultater

Hepatitt C. Hva er farlig for mennesker? Hvordan diagnostisere en infeksjon. Hva er nødvendig for analyse

Hepatitt C-virus. Hvor farlig det er. Hvordan identifisere det i tide.

Hepatitt C-virus eller HCV er en smittsom sykdom som bærer et ribonukleinsyremolekyl.

Denne typen virus kan lett tilpasse seg habitatbetingelsene og blir ofte forvandlet til ulike former for sykdommen, og derfor er vårt forsvarssystem i kroppen så vanskelig å takle det. Seks store genetiske typer infeksjoner og dusinvis av subtyper er klassifisert. I vår region er de tre første typer virus ofte funnet.

Ifølge statistikken forekommer bare en fjerdedel av tilfeller av HCV sykdom uten komplikasjoner, i alle andre tilfeller, normen, hvis infeksjonen utvikler seg til en kronisk prosess som påvirker de indre organene negativt. Så hepatitt kan være komplisert ved hepatisk fibrose - prosessen med å erstatte leverceller. Ytterligere komplikasjoner utvikles i henhold til en kjedereaksjon: Som et resultat av fibrose opptrer kreftvulster, og leversykdom utvikler seg til cirrhose.

I de fleste tilfeller kommer infeksjonen inn i menneskekroppen gjennom blodårene. Hepatitt C-virus er diagnostisert ved flere metoder. Overvåk nivået av konsentrasjon av antistoffer mot HCV. Infeksjonen oppsto ikke dersom antistoffer mot det ikke ble funnet i pasientens blod. Ellers blir viruset studert dypere, utfør en annen test-PCR. Kun denne metoden gjør det mulig å identifisere virus-RNA bare en og en halv uke etter infeksjon, på et tidspunkt da kroppen ikke har tid til å produsere antistoffer mot infeksjon, og konsekvensene av infeksjon blir ikke reflektert på noen måte i den generelle tilstanden, særlig i resultatene av andre studier, som for eksempel BAC og biopsi.

Analyse av PCR for RNA: kvantitativ og kvalitativ. Dekoding resultater

Viral belastning eller kvantitativ analyse av PCR - en analyse for å bestemme infeksjonsnivået i plasma. I hovedsak er kvantitativ analyse antall smittsomme ribonukleinsyremolekyler i en milliliter blod.

R-DNA er en rask, billig og ikke den mest nøyaktige kvantitative metoden for å bestemme et virus basert på deteksjon av forgrenede celler. Denne testen kan ikke identifisere infeksjoner som er tilstede i kroppen på grunn av dårlig sensitivitet - ca 450 IE / ml.

Den kvantitative metoden for transkripsjonal amplifikasjon lar deg finne celler i kroppen av RNA. Denne metoden virket relativt nylig, det er billig og er et ganske effektivt diagnostisk verktøy. Sensitiviteten til testen er ca. 10 IE / ml.

La oss prøve å forklare resultatene av analysene. Nedenfor er en tabell og dekoding.

PCR-studie for hepatitt C: typer, indikasjoner, transkripsjon

Viral hepatitt C er en alvorlig sykdom som oppstår med skade på leveren. I åtti prosent av pasientene blir det kronisk. Viruset multipliserer i leveren celler - hepatocytter - og forårsaker deres død. Dødt vev erstattes av bindevev, fibrose utvikler seg.

Etter hvert som fibrose utvikler seg, lever ikke i stand til å utføre sine funksjoner, begynner levercirrhose, noe som er farlig på grunn av komplikasjoner: økt trykk i portalveinsystemet, gastrointestinal blødning, nedsatt blodkoagulasjon, mentale forandringer på grunn av skade på hjernekjerner ved giftige produkter.

Årsaken til sykdommen er infeksjon av et virus fra familien Flaviviridae, som tilhører typen RNA-virus. Dette betyr at det genetiske materialet ved hvilket patogenene av patogenet syntetiseres, er kodet i ribonukleinsyremolekylet. Infeksjon skjer gjennom blod, seksuelt, og fra en gravid kvinne til fosteret. Dessverre kan en tilstrekkelig stor mengde tid passere mellom infeksjon og begynnelsen av antistoffproduksjonen - fra to uker til seks måneder. Dette tillater ikke å bestemme infeksjonen ved hjelp av metoden for immunoassay og begynne behandling i de tidlige stadier.

Hva er PCR-analyse?

PCR er en metode for molekylær analyse, som gjør det mulig å oppdage patogenes genetiske materiale allerede i den første uken etter infeksjon ved bruk av polymerasekjedereaksjon. Studien har høy spesifisitet, nøyaktighet, og tillater ikke bare å bestemme tilstedeværelsen eller fraværet av viruset, men også dets konsentrasjon og genotype.

For studien tas en pasients blod der virus-RNA kan være lokalisert. Primerer legges til de kunstig syntetiserte regioner av det ønskede gen av liten lengde, og RNA-polymerase er et spesielt enzym som øker mengden av genetisk materiale av patogenet flere ganger. Ved hjelp av et spesielt apparat, utføres flere sykluser av oppvarming og kjøling. Deretter analyseres materialet og sammenlignes med de kjente genene til viruset, på basis av hvilket det dannes en konklusjon om nærvær eller fravær av infeksjon.

Typer av PCR-analyse for hepatitt C

Det finnes tre typer PCR-analyse:

  1. Kvalitativ analyse av PCR. Den første fasen av studien. Det lar deg identifisere genetisk materiale av viruset i blodet.

  • Kvantitativ analyse av PCR. Lar deg bestemme virusbelastningen - konsentrasjonen av det genetiske materialet til patogenet i en milliliter blod. Denne studien utføres før behandlingsstart, og deretter i første, fjerde, tolvte, og (hvis løpet er lang), tjuefire uke med behandling for å evaluere effektiviteten.

  • Genotyping. Den forårsakende agensen av hepatitt C muterer ofte og raskt. Det var syv varianter av denne virusgenotypen funnet på planeten. I Russland er den første, andre og tredje typen vanlige. Hver av genotypene har en annen motstand mot terapi, for eksempel er effektiviteten av behandlingen av den første typen seksti prosent, og for den andre og tredje når denne tallet åttifem. Derfor, for å kunne velge de riktige stoffene og foreskrive et behandlingsforløp av tilstrekkelig varighet, er det nødvendig å avgjøre nøyaktig hvilken type virus pasienten er infisert med.
  • Indikasjoner for PCR-analyse for hepatitt C

    PCR-studien er foreskrevet i følgende tilfeller:

    • kontakt med en syk person der infeksjon kan oppstå;
    • positiv enzymimmunoassay;
    • tegn på skrumplever: endringer i leverens størrelse, utbredelse av milten, utseende på underlivet av subkutan venøs plexus;
    • Utseendet på symptomer på leverskade: smerte i høyre underliv, guling av huden;
    • økt aktivitet av ALT og AST i den biokjemiske analysen av blod;
    • før behandling begynner å bestemme viral belastning;
    • å overvåke effekten av antiviral terapi;
    • etter behandling for å kontrollere tilbakefall
    • i nærvær av diagnostisert hepatitt B, for å utelukke blandet leverskade.

    Forklaring av PCR-studier på hepatitt C

    Dekoding av PCR-analyse og enzymimmunoassay for hepatitt C skal utføres av en spesialist på hepatolog eller smittsomme sykdommer. Analysere resultatene av PCR er nødvendig i kombinasjon med data om biokjemisk analyse av blod, biopsi og ultralyd. Kun en kvalifisert lege vil kunne analysere resultatene av forskning og, basert på dem, foreskrive riktig behandling.

    Dekoding av kvalitativ analyse.

    I det analyserte biologiske materialet fant det genetiske materialet til patogenet. Infeksjon bekreftet.

    Infeksjon er fraværende, eller mengden av patogenens RNA er under følsomhetsgrensen.

    Dekoding av kvantitativ analyse.

    Normal sats for friske mennesker. Det betyr at det ikke finnes hepatitt C-RNA i materialet som er studert, eller konsentrasjonen er under følsomhetsgrensen for studien.

    RNA-konsentrasjonen er under rekkevidden av kvantifisering. Disse resultatene tolkes svært nøye, korrelerer dem med data fra andre studier, ofte gjenstudier.

    Nivået av viral belastning ved en gitt konsentrasjon regnes som lav. Vanligvis betyr en reduksjon i mengden virus at terapien er vellykket.

    Mer enn 8 * 10 ^ 5 IE / ml

    Nivået av viral belastning ved en gitt konsentrasjon anses høy.

    Mer enn 2,4 * 10 ^ 7 IE / ml

    Mengden av RNA er over den øvre grense for kvantifikasjonsområdet. Det er umulig å trekke konklusjoner om graden av virusbelastning med dette resultatet. Vanligvis i slike tilfeller gjentas testen med fortynning av en blodprøve.

    Dekoding av genotyping.

    Oppdaget RNA av en bestemt genotype

    Hepatitt C-virus av en bestemt genotype og subtype ble påvist i biomaterialet. Resultatet er kodet i romerske tall og latinske bokstaver, for eksempel - 1a, 2b. Totalt er det syv genotyper og sekstisju subtyper, men i Russland er det bare tre første typer.

    Hepatitt C virus RNA oppdaget

    RNA ble funnet i blodet av en sjelden genotype for Russland, som ikke kan tilskrives den første, andre eller tredje typen. Mer forskning er nødvendig.

    Dette resultatet indikerer at pasienten er sunn, eller at mengden av patogen-RNA er for liten.

    Det er mulig at PCR-analyse for hepatitt C er negativ, og enzymbundet immunosorbentanalyse gjenkjenner antistoffer mot viruset. Dette betyr at pasienten hadde akutt hepatitt C og gjenopprettet alene. Omtrent tjue tilfeller av infeksjon resulterer i spontan utvinning dersom pasientens kropp har tilstrekkelig motstand mot infeksjonen.

    Selv om PCR er en svært nøyaktig analyse, kan resultatet bli forvrengt i følgende situasjoner:

    • blodet ble transportert til laboratoriet under upassende forhold, temperaturen ble brutt;
    • biomaterialprøven var forurenset;
    • det var rester av heparin og andre antikoagulantia i blodet;
    • Undersøkere ble funnet å være inhibitorer - stoffer som reduserer eller stopper polymerasekjedereaksjonen.

    Fordelene med PCR over andre metoder

    1. Diagnose i de tidlige stadier. PCR detekterer det genetiske materialet til det forårsakende middel. Ved hjelp av immunfluorescensanalyse kan bare immunoglobuliner bestemmes - stoffer som kroppen produserer som svar på en infeksjon. I tilfelle infeksjon med hepatitt C, kan intervallet mellom infeksjon og utbruddet av immunresponsen være flere uker og måneder, da vil ELISA være ineffektivt. PCR vil gi svar i den første uken etter infeksjon.

  • Lav sannsynlighet for feil. I materialet som studeres, bestemmer området for genetisk materiale, som er karakteristisk for bare en type patogener. Dette eliminerer falske resultater. Når ELISA-feil er mulige, siden samme type antistoffer kan frigjøres mot forskjellige virus - slike antistoffer kalles kryssantistoffer.

  • Høy følsomhet. PCR gjør det mulig å oppdage forårsakerens RNA selv i små mengder. Dette gjør det mulig å identifisere skjulte infeksjoner.
  • Hvordan forberede seg på bloddonasjon for PCR-studier

    For PCR-analysen av hepatitt C samles venøs blod. Vanligvis tas to porsjoner blod fra pasientens vene om gangen: den første sendes til PCR og den andre av ELISA. Dette er gjort for å mer nøyaktig vurdere hvor mye en pasient er infisert med et virus, og hvordan immunitet bekjemper den.

    Vanligvis er pasienten pålagt å følge følgende regler:

    • en blodprøve blir tatt om morgenen;
    • Intervallet mellom det siste måltidet og bloddonasjonen skal være åtte til ti timer;
    • to eller tre dager før analysen, er det nødvendig å forlate stekte og fete matvarer og alkohol;
    • i tjuefire timer før analysen, bør pasienten unngå fysisk anstrengelse: ikke bære vekter, ikke gå til treningsstudio eller svømmebasseng.

    Hva viser en kvantitativ analyse av hepatitt C?

    Det er ganske vanskelig å diagnostisere leversykdommer ved hjelp av eksterne tegn eller smerte.

    Dette skyldes organs egenart, som praktisk talt ikke har noen nerveender og er en pasient med ulike plager.

    Dette er også tilfelle med hepatitt - i begynnelsen utsender de ikke seg selv, bare med utvikling av sykdommen gulsott kan oppstå, temperaturen stiger og en liten smerte i leveren kan føles.

    For å diagnostisere med nøyaktighet og velge en behandlingsmetode, kan legen foreskrive en rekke tester: fra blodprøver for antistoffer mot ultralyd i leveren.

    Men hepatitt er diagnostisert med blod, alle tilleggsstudier er ment å hovedsakelig forstå hvordan viruset ødela leveren.

    På økten kan legen foreskrive deg en kvantitativ analyse for hepatitt C. I denne artikkelen vil vi analysere hvorfor han er utnevnt, når det går, mulige resultater og tolkning. Ved slutten av materialet finner du en estimert pris for bloddonasjon for analyse.

    Hva er det

    En slik undersøkelse er utført for å forstå hvor mange virusmolekyler som er i kroppen.

    Kvantitativ analyse er en blodprøve for tilstedeværelse av hepatitt. Det viser hvordan cellene i kroppen er infisert med et virus, om sykdommen utvikler seg eller ikke.

    Det vil si at det viser konsentrasjonen eller belastningen av Hepatitt C RNA i menneskekroppen i enheter per milliliter eller 1 kubikkcentimeter blod.

    I kontrast bidrar kvalitativ analyse til bare å bestemme tilstedeværelsen av virus-RNA.

    I hvilke tilfeller gjør du?

    Studien blir gjort parallelt med en kvalitativ analyse etter at en blodprøve for tilstedeværelse av antistoffer mot hepatitt (ELISA) viste et positivt resultat. Gjør det flere ganger:

    • i den første diagnosen hepatitt C før du tar en beslutning om valg av behandling;
    • under behandling av sykdommen (vanligvis ved 1, 4, 12 og 24 uker) for å bestemme det kliniske bildet av resultatene av behandlingen;
    • etter behandling for å bestemme gjentakelsen.

    betydning

    Kvantitativ analyse er en av hovedtypen av forskning som legen er avhengig av når man velger behandlingsmetoder for hepatitt. Det tjener til å:

    1. Forstå hvor mye kroppen er infisert med et virus, den kvantitative tilstedeværelsen av antigener i kroppen.
    2. Effektiviteten til den valgte behandlingen.
    3. Velg en behandlingsmetode og gjør prognosen.

    Denne analysen tillater imidlertid ikke å bedømme graden av leverskade eller alvorlighetsgraden av sykdommen for kroppen. For å gjøre dette, bruk annen forskning, for eksempel biokjemisk analyse av blod, elastometri, biopsi og andre.

    Metode og tidsfrister

    Blodprøvetaking fra en vene skjer vanligvis om morgenen. Gjennom bruk av polymerasekjedereaksjon (PCR), kan en slik studie bli kalt en av de mest nøyaktige innen virusdeteksjon.

    Uten bruk av vitenskapelig terminologi kan prosessen beskrives som følger: Det tatt biomaterialet blandes med visse enzymer som lar deg kopiere enzymer RNA eller DNA fra viruset. Så gjør, til det blir nok av disse molekylene til å identifisere patogenet.

    Begrepet for utgivelse av resultater varierer avhengig av medisinsk institusjon og arbeidsbelastning. Resultatene kan oppsummeres etter 4-5 timer etter studiestart. Resultatet kan derfor utstedes neste dag etter blodprøvetaking.

    Jo mer moderne laboratoriet, utstyr og reagenser, desto mer nøyaktige og raskere resultater kan oppnås.

    Forbereder bloddonasjon

    Leveringen av biomaterialet til analyse skjer fra en ven. Det er ingen spesielle anbefalinger for forberedelse, derfor standardreglene som må følges før bloddonasjon for en studie er relevant:

    1. Det er bedre å gjøre dette om morgenen på tom mage (det siste måltidet bør ikke være tidligere enn 8-12 timer før levering).
    2. Hvis blod ikke samles om morgenen, bør du ikke spise fettstoffer til frokost (intervallet 8-12 timer må også observeres).
    3. Avvis fra alkohol, fett og stekt mat 1-2 dager før studien.
    4. Ikke kom til analysen dagen etter ferien.
    5. Røyking er forbudt minst en time før biomaterialet.
    6. Før du tar blod, bør du sitte i 10-15 minutter i fred for å slappe av i kroppen, for å eliminere virkningen på resultatene av stress, både fysisk og psykologisk.
    7. Hvis du bruker medisiner eller lignende stoffer, kan analysen tas 10-14 dager etter den siste dosen. (dette faktum må rapporteres til legen, kanskje han vil etablere en annen tilstand).
    8. Biomaterialet gir ikke opp umiddelbart etter å ha utført en rektal undersøkelse, røntgen, fysioterapi.
    9. Første og gjentatte analyser er best tatt i samme laboratorium (medisinsk institusjon), slik at de kan bruke forskjellige institusjoner for forskjellige reagenser, utstyr, måleenheter og nøyaktighet.

    Dekoding resultater

    Avhengig av nivået av viruskonsentrasjon i kroppen, gjøres det ulike konklusjoner angående behandling av sykdommen.

    Deretter bestemme effektiviteten av behandlingen. Hvis det under gjentatt analyse er virusets belastning mindre enn 8 * 105 IE / ml, kan det hevdes at terapien går i riktig retning og det er suksess i kampen mot sykdommen.

    Man kan snakke om en tidlig virologisk respons, forutsatt at den kvantitative tilstedeværelsen av virus-RNA er redusert på den tredje behandlingsdagen. Men sannsynligheten for dette er på nivået av 85%.

    Hvis indikatoren imidlertid er over 8 * 105 IE / ml, bør legen vurdere behandlingsregimet og velge en mer egnet en. Følgelig, jo større nivå, jo sterkere viruset rammet kroppen og jo verre prognosen.

    I dette tilfellet kan resultatene i forskjellige laboratorier angis i IE / ml eller i eksemplarer per ml. Omregningsfaktoren er forskjellig (varierer fra ca. 1 til 5) og avhenger av metoden som brukes til å bestemme den kvantitative indikatoren. Det er generelt akseptert at 1 IE / ml = 4 eksemplarer per ml.

    Er det noen feil?

    Dessverre kan diagnosen være feilaktig. Men dette er bare hvis det medisinske anlegget bruker utdatert utstyr, upassende reagenser, så er det en viss andel feil resultater.

    Slike faktorer kan også påvirke:

    • tilstedeværelsen av heparin eller hemmere i blodet;
    • biomaterialkontaminering under forskning.

    Med riktig forberedelse til analyse i moderne behandlingssenter er denne sannsynligheten nær null.

    Hvem skal kontakte og hva er kostnaden

    Hvis du er mistenksom på hepatitt, bør du kontakte en virolog, infeksjonsspesialist eller hepatolog. Om nødvendig vil de sende deg til andre leger.

    Prisen på slike studier kan være forskjellig. I tillegg avhenger det av merkene til de diagnostiske sentrene selv, og på kompleksiteten til arbeidet, utstyret etc.

    I moderne laboratorier kan du navigere til 2900-3000 rubler (1350-1400 UAH) uten kostnaden for å ta blod fra en blodåre. Det er klinikker som tilbyr å utføre en analyse av 300 rubler (ca 140 USD).

    Den omtrentlige formen for analyseresultatene ser slik ut.

    konklusjon

    For å oppsummere artikkelen fremhever hovedpoengene:

    1. Kvantitativ analyse av hepatitt C kalles en blodprøve for tilstedeværelsen av virusceller, som indikerer dens belastning.
    2. Indikatoren måles i enheter per milliliter eller 1 kubikkcentimeter av blod.
    3. Analysen er gjort som i den første diagnosen, og etterpå bestemmer effekten av den valgte behandlingen eller påvisning av tilbakefall.
    4. Det tillater ikke å snakke om nivået på leverens helse, svekket som følge av infeksjon med hepatitt C-viruset. For dette kan relaterte studier utføres: biokjemisk blodprøve, elastometri, biopsi, etc.
    5. De fleste bloddonasjon skjer i morgen, biomaterialet tatt fra en vene.
    6. Det anbefales ikke å røyke, drikke alkohol, fett eller stekt mat før du tar testen. Samtidig er overholdelse av regler for utarbeidelse av studien som er angitt i artikkelen velkommen.
    7. Hvis analysen viste at virusbelastningen i blodplasmaet er over 600 IE / ml, har infeksjon og utvikling av hepatitt C i kroppen oppstått.
    8. I tilfelle når gjentatte analyser viser en belastning på mer enn 8 * 105 IE / ml, bør legen vurdere planen og behandlingsmetodene. Dette indikerer mangel på effektivitet av den valgte behandlingen.
    9. Sannsynligheten for feil i den kvantitative studien er ekstremt liten. Imidlertid er biomaterialkontaminering mulig for tilstedeværelse av inhibitorer eller heparin i den, noe som vil gjøre analysen feil.
    10. Den nedre terskelen av kostnaden for prosedyren er 300 rubler (uten prisen på blodprøvetaking) og vokser avhengig av reagensene som brukes, utstyret i laboratoriet og andre faktorer.

    Nr. 350, Kvantitativ bestemmelse av RNA av hepatitt C-virus ved PCR [viral load] (HCV viral load, Hepatitis C Virus RNA (kvantitativ test)) i serum

    Bestemmelse av RNA for hepatitt C-virus i serum ved hjelp av polymerasekjedereaksjon (PCR) med deteksjon i "sanntid".

    påvisbart fragment-spesifikt sted for RNA av hepatitt C-virus; Specificiteten av bestemmelsen er 100%. Deteksjonsfølsomhet - 60 IE / ml Linjært område: 10 ^ 2 - 1x10 ^ 8 IE / ml.

    • Positiv kvalitativ test for tilstedeværelse av RNA av hepatitt C-virus i serum.
    • Bestemmelse av viral belastning.
    • Bestemme taktikken for å behandle pasienter.
    • Nøyaktig vurdering av effektiviteten av behandlingen.

    Tolkning av forskningsresultater inneholder informasjon til den behandlende legen og er ikke en diagnose. Informasjonen i denne seksjonen kan ikke brukes til selvdiagnose og selvbehandling. En nøyaktig diagnose gjøres av legen ved å bruke både resultatene av denne undersøkelsen og nødvendig informasjon fra andre kilder: anamnese, resultater av andre undersøkelser mv.

    Måleenheter: mengden av RNA i hepatitt C-viruset, uttrykt i IE / ml. For konvertering til kopi / ml, bør et forhold på 1 IE = 2,5 kopier av RNA i hepatitt C-viruset brukes.

    • Generell informasjon
    • Eksempler på resultater

    * Den angitte perioden inkluderer ikke dagen for å ta biomaterialet

    Real-time PCR-deteksjon.

    eksempler på resultater på skjemaet *

    * Vi legger oppmerksomheten på at når du bestiller flere studier, kan flere forskningsresultater gjenspeiles på en form.

    I denne delen kan du finne ut hvor mye det koster å fullføre denne studien i byen din, se beskrivelse av testen og tabellen over tolkning av resultatene. Velge hvor du skal passere analysen "Kvantitativ bestemmelse av hepatitt C-virus RNA ved PCR [virusbelastning] (HCV Viral Load, Hepatitis C Virus RNA (Kvantitativ test)) i blodserum" i Moskva og andre russiske byer, ikke glem at prisen på analyse, Kostnaden for biomaterialeprosedyren, metodene og tidspunktet for forskning i regionale medisinske kontorer kan variere.

    Medinfo.club

    Portal om leveren

    HCV kvantitativ analyse og dekoding

    Hepatitt C er en sykdom som kan formere seg i friske leverceller og provosere forekomsten av proliferative sykdommer. I den moderne verden, når hepatittviruset har passert en bestemt mutasjon, er det menneskelige immunsystem truet, siden det er ubetydelig sammenlignet med en infeksjon. Det er også verdt å merke seg at ikke alle pasienter vil oppleve de første tegn på sykdommen, særlig i de tidlige stadier.

    RNA-analyse av hepatitt C-virus er en kvantitativ studie, hvis norm ligger i den moderate mengden av tilstedeværelsen av virusceller i pasientens blod. Ifølge statistikken er ca 31% av pasientene fullstendig herdet av denne sykdommen, hvis den er i utgangspunktet.

    I medisinsk praksis merker leger at 4 millioner infiserte symptomer og første tegn ikke synes i det hele tatt, selv om den forsømte form for hepatitt kan føre til levercirrhose eller kreft.

    For tiden, under blodtransfusjonsprosedyren, kontrolleres dette blodet for tilstedeværelsen av hepatitt C-viruset, siden denne sykdommen overføres gjennom donorblod.

    I dag har medisiner for hepatitt C allerede oppstått i verden med en effektivitet nær 100%. Moderne farmasøytisk industri har skapt stoffer som har nesten ingen bivirkninger. Mange pasienter får de første resultatene i form av å lindre symptomene og redusere virusbelastningen etter en uke med inntak. Les mer om medisiner for hepatitt fra indisk produksjon, les vår egen artikkel.

    Sofosbuvir Express har bevist seg i markedet for transport av indianhepatitt C-legemidler. Dette selskapet hjelper med suksess folk til å gjenopprette fra sykdommen i mer enn 2 år. Anmeldelser og videoer av fornøyde pasienter kan du se her. På deres konto er det mer enn 4000 mennesker som gjenvunnet takket være kjøpte stoffer. Ikke legg helsen din på vent, gå til www.sofosbuvir-express.com eller ring 8-800-200-59-21

    Typer av PCR-studier

    PCR (polymerasekjedereaksjon) er den mest moderne og effektive metoden for å studere virusgenet og dets evner. Slike diagnostikk er i stand til å etablere en type sykdom og bestemme dens videre mutasjon i pasientens kropp.

    Analysen utføres ved å ta blod, som deretter plasseres i spesielle reagenser der kloning av celler finner sted.

    Fra en celle viser det seg to, og så videre. Som et resultat er det hundrevis av DNA, der du kan diagnostisere patogenet og identifisere viruset på et tidlig stadium.

    Derfor er PCR delt inn i flere typer:

    • kvalitativ analyse - gjenkjenner gener infeksjon i blodet. Hvis sykdommen under den kvalitative analysen av pasienten bekreftes, bør en kvantitativ analyse utføres for å fastslå infeksjonens omfang. Som et resultat av denne diagnosen skriver eksperter "oppdaget / ikke oppdaget". "Oppdaget" - sier at sykdommen er tilstede i kroppen og dens RNA allerede er identifisert. "Ikke oppdaget" - indikerer fraværet av et virusgen i prøven, det vil si, det er ingen hepatitt-RNA. Men leger anbefaler at de testes etter 10 dager.
    • kvantitativ analyse - bestemmer mengden av genetisk materiale av infeksjon i blodet. En slik diagnose bidrar til å fastslå alvorlighetsgraden av sykdommen og hele klinisk historie. Som et resultat av en slik analyse kan bare "Positiv / Negativ / Ugyldig" skrives. "Positiv" - representerer den smittsomme belastningen. Legene foreskriver denne metoden for å diagnostisere sykdommen for å bestemme effektiviteten av behandlingen ved 4, 12, 16 og 24 ukers sykdom. Hvis virusindikatoren er i området 8x10 IE / ml, er behandlingen effektiv hvis prisene er høyere, så nei. "Negativ" - infeksjonsgenet blir ikke oppdaget. "Ugyldig" - dette skjer hvis virusgenet ble oppdaget i kvalitative, men det ble ikke avslørt i kvantitativ analyse. Det er en lignende, forutsatt at infeksjonsvolumet er under nivået.

    Forskjeller i kvalitative og kvantitative analyser

    Hepatitt C-viruset diagnostiseres først og fremst ved å gjennomføre en kvantitativ analyse, hvor dekoding er nødvendig for korrekt tolkning av sykdommen. Til tross for dette har de kvalitative og kvantitative diagnostiske metodene sine forskjeller, for eksempel: rollen og oppgavene som er tildelt forskningen - kvalitativ - bekrefter tilstedeværelsen av infeksjon etter virusets detekterte antistoffer og kvantitativ - en sekundær metode som refuterer eller bekrefter sykdommen for å få den riktige og eneste diagnosen.

    Tolkning av kvantitativ forskning

    Etter diagnosen kan bare leger tolke resultatet, slik det ikke skal vises i figurer, men i ord. Ifølge statistikk er kvantitativ PCR den mest sensitive analysen. For å forstå om et virus er til stede i kroppen, er det nødvendig å forstå og vite at en kvantitativ analyse av hepatitt C tolkes ved hjelp av den digitale betegnelsen (standard) for infeksjon:

    Bruk av PCR-diagnostikk

    Polymeraskjedereaksjon (PCR) i molekylærbiologi er en eksperimentell metode for å oppdage virus. Det lar deg øke konsentrasjonen av bestemte nukleinsyrefragmenter (DNA) i prøver av biologisk materiale, noe som gjør det mulig å bestemme dem (gjenkjenne) og telle.

    Analysen utføres som følger. Genetisk materiale (en blodprøve), som potensielt kan inkludere det ønskede genet, blir introdusert i røret. Det er også plassert primere - kjemisk syntetiserte segmenter av en liten lengde av ønsket gen.

    DNA- eller RNA-polymerase er også tilsatt til karet, det er i stand til å lineere opp en nukleinsyrekjede som er helt identisk med originalen. Den resulterende sammensetning injiseres og et sett med fire fri nukleotider - et spesielt byggemateriale for RNA eller DNA, hvorav den ene inneholder radioaktive fosforpartikler.

    Den resulterende blanding oppvarmes til 95-96 ° C, og derfor er to DNA-spiraler, som normalt er sammenflettet, vevd. Deretter avkjøles legemidlet, hvorpå primene selv fester seg til den ønskede regionen av virusgenomet, og hindrer at RNA (eller DNA) danner en dobbelt helix igjen.

    Under kjøleprosessen søker polymerasen etter en fri nukleotidkjede. For funksjonen av dette enzymet er det nødvendig en enkelt kjede av nukleotider. Siden polymerase glir langs DNA-kjeden (som en ring på et tau), er den ikke i stand til å arbeide på en dobbelt helix.

    Etter dette utføres en gjentatt varmesyklus som skyldes hvilke kjeder av nukleotider som er separert. Ved hver av disse syklusene av PCR øker mengden i prøven av det ønskede hepatittgenet eksponentielt, og resten av det genetiske materialet blir produsert (vokser) lineært.

    Etter rensing av løsningen fra nukleotidrester og separasjon ved elektroforese av DNA-kjeder av molekylvektsparameteren, kan man lett bestemme om det er et ønsket gen i prøven under studie eller ikke.

    Fordeler med PCR

    Laboratorietesting ved hjelp av PCR tillater enda mer informasjon enn tilstedeværelsen av virus-RNA. Ved å bestemme parameteren for nivået av radioaktiv stråling, er det mulig å identifisere hvor mye genetisk materiale som opprinnelig var inneholdt i prøven under studien. I tilfelle av hepatitt, bestem indikatoren for nivået av viral belastning.

    En annen fordel ved denne metoden er den meget høye følsomhetsgrad av CR-reaksjonen. Det er mye høyere enn klassiske metoder for å oppdage virus. Ideelt sett, for å identifisere ønsket gen, for PCR, er bare ett virus i prøven tilstrekkelig.

    I tillegg er PCR helt spesifikt. Dens primere er utformet på en slik måte at de stemmer fullt overens med de unike områdene av de ønskede gener som ingen annen sekvens har. Som fingeravtrykk er unike, er det unike nukleotidsekvenser i hvert gen.

    Kvalitativ analyse av PCR

    Kvalitativ analyse lar deg bare identifisere tilstedeværelsen av et virus i blodet. Denne testen skal utføres for alle pasienter i hvilke antistoffer mot hepatitt C ble funnet i blodet. Det kan resultere i bare én av to verdier: "detektert" eller "ikke oppdaget". I en sunn person skal normen (referanseverdi) "ikke oppdages".

    Det er en spesiell tolkning av slike resultater av kvalitativ forskning:

    • Resultatet er "oppdaget". Dette betyr at et fragment av RNA som er spesifikt for hepatitt C-viruset ble funnet i den analyserte prøven av biologisk materiale tatt. Det er derfor et faktum at pasienten er infisert med hepatitt C-viruset. Hvis resultatet av høyverdig PCR er "detektert", indikerer dette at viruset multipliserer og på denne tiden smitter det nye leverceller i kroppen.
    • Resultatet er "ikke oppdaget." En slik dom indikerer at i den analyserte prøven av biologisk materiale som er oppnådd i dette laboratoriet, ble det ikke funnet noe fragment av RNA som er spesifikt for hepatitt C-viruset. Alternativt var konsentrasjonen av RNA av patogeninfeksjonen i denne prøven under sensitivitetsgrensen for testen.

    I den akutte fasen av RNA i hepatitt C-viruset kan slike kvalitative studier ved PCR-metoden detekteres allerede etter 1-2 uker umiddelbart etter kroppsinfeksjon, det vil si lenge før utseendet av antistoffer mot hepatitt selv.

    Unøyaktige testresultater fra denne studien kan fås ved å:

    • forurenset biomateriale;
    • tilstedeværelsen av heparin i pasientens blod;
    • Tilstedeværelsen i prøven av kjemiske eller proteinstoffer (inhibitorer) som påvirker de ulike komponentene i PCR.

    For å gjennomføre en kvalitativ analyse av PCR, er det ikke nødvendig med spesiell forberedelse av pasienten for studien. Venøst ​​blod brukes som et materiale.

    Evaluering av resultater

    HPR-test av høy kvalitet har en viss grad av følsomhet, og avhengig av nøyaktigheten av forskningen og nivået på utstyret i laboratoriet kan variere fra 10 til 500 IE / ml.

    Dette betyr at hvis viruset i blodprøven er tilstede i en meget lav konsentrasjon (mindre enn terskelverdien av følsomheten til dette laboratoriet), kan resultatet bestemmes som "ikke detektert" hos en pasientpatient. På grunn av dette, når det utføres en kvalitativ analyse av PCR med lavt nivå av viremia (lav viruskonsentrasjon), for eksempel for pasienter som gjennomgår antiviral terapi, er det svært viktig å kjenne følsomhetsgrensen for dette diagnostiske systemet.

    Varianter av diagnostiske systemer

    For å kontrollere den virologiske responsen, anbefales det å bruke diagnostiske systemer med en følsomhetsgrense på minst 50 IE / ml for antiviral behandling. Disse kriteriene er oppfylt, for eksempel med Cobas Ampicolor HCV-test-analysatorer (nøyaktig til 50 IE / ml), samt RealBest HCV RNA (med følsomhet på 15 IE / ml).

    I henhold til WHO-anbefalinger, for å etablere en endelig diagnose av hepatitt C, er det nødvendig å basere seg bare på tre ganger deteksjon av C-virus-RNA i pasientens serumprøver, uten andre varianter av hepatittmarkører.

    I tillegg til PCR-metoder, brukes en TMA-analyse (transkripsjonal amplifikasjonsmetode) til å detektere HCV RNA hos pasienter. Den har den beste følsomhetsgrensen (5-10 IE / ml), men i vårt land er en slik testmetode ikke særlig vanlig.

    Utvalg av detekterbare virusmodifikasjoner

    En slik kvalitativ bestemmelse i serum av tilstedeværelsen av RNA i hepatitt C-viruset gjør det mulig å bestemme flere genotyper av dette viruset. For tiden vet vitenskapen mer enn seks genotyper av dette viruset, så vel som om 10 subtyper av denne sykdommen.

    I vårt land er vanlige virus 1, 2, 3 genotyper. Laboratorier kan oppdage følgende genotyper: 1a og 1b, 2a, 2b og 2c, samt 3, 4, 5a og 6, uavhengig av undertyper. For alle virusmodifikasjoner er deteksjonsspecifikiteten 100%.

    PCR kvantitativ analyse

    Ved hjelp av en kvantitativ PCR-test bestemmes nivået av konsentrasjon av hepatittviruset i blodprøver (virusbelastning). Denne testen for viremia (viruskonsentrasjon) lar deg bestemme antall enheter av et bestemt genetisk materiale (det mest virale RNA) som detekteres i en viss mengde. I dette tilfellet bestemme konsentrasjonen i 1 ml, som tilsvarer 1 cu. cm.

    De kvantitative parametrene til analysen er uttrykt i figurer, for dette formål brukes internasjonale enheter (IE) per ml (ml), referert til som IE / ml, som måleenheter. Nå i noen laboratorier kan mengden av virus bestemmes i andre enheter: Antall kopier per ml er angitt som kopier / ml.

    • Datoer. For hepatitt C, gjøres en slik kvantitativ analyse av PCR umiddelbart før starten av behandlingen. Deretter 1., 4., 12. og 24. uke. Evaluering på 12. uke er indikativ, det gjør det mulig å bestemme effektiviteten av terapien.
    • Forberedelse for analyse. For å utføre en kvantitativ analyse av PCR, er det ikke nødvendig med spesiell forberedelse av pasienten til studien. En halv time før prøvetaking bør ikke røyke. Venøst ​​blod brukes som laboratoriemateriale.

    Evaluering av resultater

    For ulike laboratorietestsystemer er det forskjellige konverteringskvoter for denne indikatoren i IE / ml. I gjennomsnitt tar de en konverteringsparameter, der 4 kopier / ml = 1 IE / ml. Det vil si at hvis laboratoriet gir resultatet av PCR-analyse 2,4 * 10 6 kopier / ml, så skal denne parameteren deles inn i 4 og vi får 6 * 10 5 IE / ml.

    En belastning på 800.000 IE / ml regnes som høy, noe som tilsvarer omtrent 3.000.000 eksemplarer / ml. Lav viremia, ifølge noen forfattere, tilsvarer parametrene for kvantitativ PCR under 400 000 IE / ml.

    Som resultat av den kvantitative testen kan de endelige resultatene ikke leveres i form av en digital verdi, men: "under måleområdet" eller "ikke detektert".

    • Vurdering: "under måleområdet." Dette antyder at den kvantitative testen ikke kunne oppdage hepatitt C viral RNA, men selve viruset er tilstede i kroppen i svært lave konsentrasjoner. Dette fremgår av en ytterligere kvalitativ test, som bekrefter faktumet av tilstedeværelsen av viruset.
    • Vurdering: ikke oppdaget. Dette resultatet indikerer at den kvantitative testen ikke ble funnet i prøven av virus-RNA.

    Parameteren for viral belastning bestemmer først og fremst graden av infeksiøsitet av sykdommen, nivået av "infeksjon" av pasienten. Jo høyere pasientens viruskonsentrasjon er, jo større er sannsynligheten for at den overføres til andre mennesker. For eksempel, under samleie med en syke person, eller vertikalt. Denne kvantitative indikatoren bidrar også til å bestemme effekten av behandlingen av pasienten.

    Å gjennomføre en kvantitativ analyse av KKP er viktig for antiviral terapi, vurderer suksess og planlegger varighet på kurset. Med en rask respons fra kroppen til behandling og en lav grad av viremi, kan varigheten av behandlingen forkortes.

    Hvis den kvantitative PCR-parameteren reduseres sakte, bør antiviral terapi forlenges eller modifiseres. Hvis nivået av viral belastning er lav, er dette en gunstig faktor for terapi, men hvis forhøyet, er metoden for behandling som brukes, ineffektiv og legemidlene eller metoder for deres bruk bør endres.


    Forrige Artikkel

    Kronisk hepatitt C

    Neste Artikkel

    Symptomer på leversykdom

    Relaterte Artikler Hepatitt